HPLC法测定三七血伤宁散中人参皂苷Rg1的含量

王先友,孔 军,樊丰春

(1.河南大学药学院,河南 开封 475004;2.河南大学医学院,河南 开封 475004)

HPLC法测定三七血伤宁散中人参皂苷Rg1的含量

王先友1,孔 军2,樊丰春1

(1.河南大学药学院,河南 开封 475004;2.河南大学医学院,河南 开封 475004)

目的:建立用HPLC法测定三七血伤宁散中人参皂苷Rg1的含量的方法。方法:以 Hypersil-ODS柱(4.6 mm×200 mm,5 μ m)为色谱柱;甲醇-水(50∶50)为流动相,流速:1.0mL/min;检测波长:203nm。结果:人参皂苷Rg1在10.0～100.0μ g/mL范围内线性关系良好,其线性方程为Y=5455.7 X-2484(n=6,r=0.9997),回收率为99.8%,RSD=0.48%(n=6)。结论:HPLC法测定三七血伤宁散中人参皂苷Rg1的含量线性关系良好、精密度较好、准确度高、稳定性好,可用于该散剂的质量控制。

三七血伤宁散;人参皂苷Rg1;高效液相色谱法;含量测定

三七血伤宁散由三七、重楼、制草乌、大叶紫珠提取物、山药、黑紫藜芦、冰片及朱砂组成。具有止血镇痛,祛瘀生新之功效。用于瘀血阻滞、血不归经之各种血证及瘀血肿痛等。三七为君药,且为贵重药材。查阅有关文献,该制剂中三七的质量控制未见报导。人参皂苷Rg1为三七的有效成分之一,我们参考其他药物中人参皂苷Rg1的含量测定方法[1-2],建立了测定其含量的HPLC法,并进行了方法学考察,为有效控制该制剂的质量提供了有效途径。结果表明,使用该法测定时,其线性关系好、准确度高、稳定性好、专属性强、重复性好。

1 仪器与试剂

LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津);Hypersil-ODS(4.6 mm ×200 mm,5 μ m)色谱柱;人参皂苷Rg1对照品(自制,并经1HnmR和13CnmR图谱验证);三七血伤宁散(市售);甲醇(色谱纯);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil-ODS柱(4.6 mm×200 mm,5 μ m);流动相:甲醇 -水 (50∶50);流速:1.0mL/min;检测波长 :203nm,柱温 :室温;进样量 :20 μ L。在此色谱条件下,得到人参皂苷Rg1的对照品溶液及供试品溶液的HPLC图谱(见图1)。以人参皂苷Rg1计算理论塔板数不低于4000。

图1 人参皂苷Rg1的HPLC图谱

2.2 实验溶液的制备

对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1对照品5.00mg于50mL容量瓶中,加流动相适量使溶解,然后用流动相稀释至刻度,摇匀即得100 μ g/mL的对照品储备液。

供试品溶液的制备:精密称取三七血伤宁散1.0053 g,置50mL容量瓶中,加流动相适量,超声提取30min,冷却至室温,用流动相定容,静置,用0.45 μ m微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系 精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液(100 μ g/mL)1.00 、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL至10mL容量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,制成10.0～100.0 μ g/mL的对照品溶液。各取20 μ L注入高效液相色谱仪,按2.1项下色谱条件进行测定(n=3)。以峰面积Y对浓度X进行线性回归,得回归方程为:Y=5455.7 X-2484(n=6,r=0.9997)。结果表明,人参皂苷Rg1在10.0～100.0 μ g/mL范围内具有良好的线性关系。

2.3.2 精密度实验 取线性关系项下的人参皂苷Rg1对照品溶液(50 μ g/mL)重复进样 6 次,测定其峰面积,得RSD为0.79%(n=6)。结果表明,该法精密度较好。

2.3.3 重复性实验 取同一批样品,按2.2项下方法配制样品溶液 6份,取每份溶液20 μ l进样,记录色谱图,测得人参皂苷峰面积的RSD为0.83%。表明该法重复性较好。

2.3.4 稳定性实验 取供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、24 h 各进样 20 μ l,测得各峰面积的 RSD=0.87%。结果表明,供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 回收率实验 精密称取已知含量(4.033mg/g)的三七血伤宁散供试品约 0.25 g(批号:080722)6份,准确加入人参皂苷Rg1对照品适量,按供试品溶液的制备方法,制备加样回收供试品溶液。测得平均回收率为99.8%,RSD=0.48%。结果显示,准确度较好。

表1 回收率实验结果

2.3.6 样品的含量测定 取3个批号的样品溶液20 μ l进样(n=3),测得结果见表 2。

表2 三七血伤宁散中人参皂苷Rg1的含量

3 讨论

3.1 检测波长的选择

人参皂苷Rg1中没有共轭双键,只有末端紫外吸收;结合文献[3-5]因此选择203nm波长作为测定波长。

3.2 流动相的选择

比较了不同比例的甲醇-水系统为流动相,通过调节两者的比例,当两者比为50∶50时出峰时间比较合适,得到的色谱峰形较好,分离效果较好,故用此为流动相。

3.3 供试品超声时间的选择

取同一包供试品,配制供试品溶液(1.0053 g/50mL)4 份,分别超声 20、30、40、50min。然后进样,由峰面积得出供试品超声30min以后,人参皂苷Rg1提取很充分。因此确定超声时间为30min。

4 结论结果

本实验测定方法的线性关系好、准确度高、稳定性好、专属性强,可作为该产品的质量控制方法。

[1]洪爱华,陆大祥,戚仁斌,等.HPLC/MS/MS法同时测定小鼠血浆中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1[J].暨南大学学报,2007,28(10):491-493.

[2]李霞,杨建婷,柳小秦,等.胶束毛细管电泳色谱法测定三七中人参皂苷 Rg1、Re及三七皂苷R1的含量[J].中成药,2007,29(12):1810-1812.

[3]朱照静,邓开英.红参中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2003,9(5):10-11.

[4]刘波,聂阳,沈嘉茵,等.高效液相色谱法测定复方三七缓释片中有效成分的含量[J].时珍国医国药,2008,19(5):1048-1049.

[5]Su Na Kim,Young Wan Ha,Heungsop Shin,et al.Simultaneous quantification of 14 ginsenosides in Panax ginseng C.A.Meyer(Korean red ginseng)by HPLC-ELSD and its application to quality control[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2007,45(1):164-170.

[责任编辑 李武营]

Determination of Ginsengnoside Rg1in Sanqi Xueshangning Powders by HPLC

WANG Xian-you1,KONG Jun2,FAN Feng-chun1(1.Pharmaceutical College of Henan University,Kaifeng,Henan 475004;2.Medical College of Henan University,Kaifeng,Henan 475004)

Objective:To establish a method for determination of ginsengnoside Rg1in Sanqi Xueshangning Powders by HPLC.Methods:Hypersil-ODS column(4.6 mm ×200 mm,5 μ m)was used with mobile phase of methanol water(50∶50).Flow rate was 1.0mL/min and detection wave-length was 203nm.Results:The concentration of Ginsengnoside Rg1was in good linearity related to its peak area in range of 10.0～ 100.0 μ g.mL.Linear regression equation wasY=5455.7X-2484(n=6,r=0.9997).Recovery was 99.8%,with RSD of 0.48%(n=6).Conclusion:This method is of good linearity,accurate,precise and stabile.It is suitable for the quantity control of Sanqi Xueshangning Powders.

Sanqi Xueshangning Powders;Ginsengnoside Rg1;HPLC;Content determination

R363.2

A

1672-7606(2010)03-0173-02

2010-05-08

河南大学校内基金(B2007050)

王先友(1971-),男,河南商丘人,博士,副教授,从事分析化学的教学与科研工作。