甘木通醇提物对家兔高脂血症及动脉粥样硬化的预防作用

胡宗礼， 黄晓萍， 陈珺霞

(韶关学院英东生物工程学院，广东韶关512005)

甘木通(Clematis filamentosa Dunn)为毛莨科铁线莲属植物，用于防治冠心病、高血压等疗效显著［1］。实验发现，甘木通能显著改善正常家兔的血液流变学特性［2］，但对动物高脂血症的作用尚未见有报道。本实验通过采用家兔实验性高脂血症模型，观察甘木通乙醇提取物(extract of Clematis filamentosa Dunn，ECFD)对家兔高脂血症的预防作用，为扩大甘木通的临床应用范围提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验药材与试剂

甘木通药材(由广东雷霆国药有限公司提供，采收于2008年11月);胆固醇(北京鼎国生物技术有限责任公司，批号:72710150);胆酸盐(上海国药集团化学试剂有限公司，批号:20070828);TG、TC、HDL－C 和 LDL－C 检测试剂盒(湖南永和阳光科技有限责任公司，批号:20090420);分析纯无水乙醇(天津市永大化学试剂开发中心);猪油、蛋黄、普通饲料等均为市售。

1.2 实验动物

健康大白兔，购自广东省从化市太平信华动物养殖场，体重1.5～2.0 kg，♂♀兼用，实验动物生产许可证［SCXK(粤)2009－0023］。

1.3 主要仪器设备

OLYMPUS AU－640型全自动生化分析仪(日本);TG16－WS型台式高速离心机(湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司);FW177型中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);RE－52B型旋转蒸发器(上海雅荣生化设备仪器有限公司);TC－120型智能程控生物组织全自动脱水机(湖北泰维医疗科技有限责任公司);珊顿325型石蜡切片机(英国);OLYMPUS－BX41型正置系统金像显微镜(日本);HPIS－2000型病理图像分析系统(西安华海医疗信息技术股份有限公司)。

1.4 受试药物及饲料的制备

1.4.1 受试药物的制备

甘木通药材经干燥、粉碎，过60目筛。以70%乙醇为提取溶剂，药材与溶剂比例为1:20(W/V)，于90℃条件下加热回流提取1 h，共提取3次，合并3次滤液，减压回收乙醇后，进一步减压浓缩至棕褐色膏状(每1 g相当于原药材5 g)，冷藏保存备用。

1.4.2 高脂饲料的制备

普通饲经料粉碎后，按每100 g高脂饲料含胆固醇1.0 g、蛋黄粉5.0 g、猪油10.0 g、胆酸盐0.5 g、普通饲料 83.5 g的比例配制，充分混合后，制备成颗粒状饲料。

1.4.3 含ECFD饲料的制备

普通饲经料粉碎后，按每100 g饲料含ECFD 20 g、普通饲料80 g的比例配制，充分混合后制备成颗粒状饲料。

1.5 实验方法

1.5.1 模型制备与实验分组

参照文献方法［3］，家兔用普通饲料喂养2周后，从耳动脉取血测定血清TC、TG、HDL－C和 LDL－C含量，选择结果较一致的家兔作为实验动物。32只合格家兔随机分成正常对照组、模型对照组、ECFD低剂量预防组和高剂量预防组，每组8只，所有家兔均单笼饲养。正常对照组家兔给予普通饲料喂养;模型对照组家兔每天先给予高脂饲料50 g/kg;ECFD组每天先给予高脂饲料50 g/kg，然后给予含ECFD饲料12.5 g/kg(即ECFD 2.5 g/kg)和含ECFD饲料25 g/kg(即ECFD 5.0 g/kg)。各组饲料不足部分用普通饲料补充，自由饮水，连续喂养8周，每2周称量一次家兔体重用于调整饲料量。

1.5.2 血脂测定

分别于第4周、第8周末取血按照试剂盒说明测定各项血脂指标，TG的测定采用酶比色法(GPO－POP法)，TC的测定采用 COD－CE－PAP 法，HDL－C 与 LDL－C 的测定采用直接法。

1.5.3 动脉硬化指数(arteriosclerotic index，AI)的计算［3］422

根据测定的血脂结果计算AI值，AI=(TC－HDL－C)/HDL－C

1.6 统计学处理

2 实验结果

2.1 ECFD对家兔高脂血症的预防作用

各组家兔喂养4周或8周时，模型对照组家兔血清TC、TG、LDL－C水平与正常对照组比显著升高(P＜0.01)，而HDL－C水平仅呈升高趋势(P＞0.05)。ECFD低剂量或高剂量给药组家兔血清TC、TG、LDL－C水平与模型对照组比有显著降低(P＜0.01)，血清HDL－C水平与正常对照组或模型对照组比均呈明显升高(P＜0.05，P＜0.01)。结果提示，ECFD对家兔高脂血症的形成具有一定的预防作用(见表 1、2)。

表1 第4周时家兔的血脂水平(±s，n=8)

表1 第4周时家兔的血脂水平(±s，n=8)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

正常对照组 —3.24±0.13 0.68±0.09 0.79±0.17 1.87±0.30模型对照组 — 11.36±2.71* 4.18±0.45* 0.91±0.24 6.68±0.39*ECFD组 2.5 8.52±1.66*△△ 2.93±0.83*△△ 1.22±0.21*△ 5.03±0.78*△△ECFD组 5.0 6.33±1.63*△△ 2.16±0.38*△△ 1.31±0.14*△△ 4.27±0.55*△△

表2 第8周时家兔的血脂水平(±s，n=8)

表2 第8周时家兔的血脂水平(±s，n=8)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.01。

组 别 剂量/(g/kg) TC/(mmol/L) TG/(mmol/L) HDL－C/(mmol/L) LDL－C/(mmol/L)正常对照组 —3.22±0.14 0.71±0.11 0.77±0.15 1.77±0.24模型对照组 — 34.09±3.07* 12.55±1.99* 1.02±0.44 20.03±3.25*ECFD组 2.5 15.50±1.97*△ 5.77±1.48*△ 1.63±0.51*△ 12.10±2.35*△ECFD组 5.0 11.28±1.56*△ 3.16±1.33*△ 1.68±0.46*△ 7.94±1.64*△

2.2 ECFD对高脂血症家兔动脉粥样硬化的影响

模型对照组家兔不同时期的AI值与正常对照组比均显著升高(P＜0.01);ECFD预防组的AI值与同时期模型对照组比较显著降低(P＜0.01)，但仍高于正常对照组(P＜0.01)，结果表明ECFD通过调节血脂能抑制动脉粥样硬化的形成和促进动脉粥样硬化的消退(见表3)。

表3 甘木通提取物对高脂血症家兔不同时间AI值的影响(±s，n=8)

表3 甘木通提取物对高脂血症家兔不同时间AI值的影响(±s，n=8)

注:与正常对照组比，*P＜0.01;与模型对照组比，△P＜0.01。

组 别 剂量/(g/kg) 第4周 第8周正常对照组 —3.11±0.15 3.18±0.13模型对照组 — 11.48±1.48* 34.42±1.76*ECFD组 2.5 5.98±0.94*△ 8.51±1.24*△ECFD组 5.0 3.82±0.89 5.71±1.01*△

3 讨论

引起高脂血症的原因有很多［4］，主要有三方面的原因:①遗传因素，即原发性高脂血症，又称家族性高脂血症，其病因尚未阐明;②患有易引起高脂血症的疾病，这种情况称为继发性高脂血症，如高血糖症、糖尿病、肥胖、高尿酸血症、肝脏疾病、肾脏疾病等;③饮食因素，饮食引起的高脂血症与过高热量、高胆固醇、高饱和脂肪酸有关，常同时伴有纤维素、植物蛋白不足。此外，年龄、性别、职业、吸烟、精神紧张都可导致高脂血症。在众多因素中，饮食因素是最常见、最主要的因素。在实验室中，建立高脂血症模型常用的动物有多种，而家兔在调脂新药和动脉粥样硬化实验研究中是首选的动物模型之一［5］。我们在预实验中发现，家兔用添加有胆固醇、蛋黄粉、猪油等成分的高脂饲料喂养4周时，血清TC、TG和LDL－C水平就有明显升高，但动脉硬化现象不很明显，因此，本实验选用家兔作为实验动物，用高脂饲料喂养8周建立实验性高脂血症动物模型。

脂质代谢异常是导致高血脂的直接原因，而高血脂又是引发动脉粥样硬化的重要原因之一［6］。动脉粥样硬化的发生、发展与脂质浸润、氧化应激、内膜损伤、炎性反应、血小板活化、血栓形成、血管平滑肌细胞激活、选择性基质代谢及血管重建等有密切关系［7－8］，但都不能独立阐明动脉粥样硬化的形成机制可能是:高脂血症(尤其是TC、LDL－C升高)是动脉粥样硬化的始动因素，而炎症、氧化应激、内皮损伤等参与动脉粥样硬化的发病过程，并在动脉粥样硬化的形成中起关键性作用。

研究表明，在引起动脉粥样硬化的危险因素中，只有血浆TC水平升高才能够在缺乏其他危险因素的情况下，独立地诱发动脉粥样硬化［9］;而且大量的流行病学资料也证实，动脉粥样硬化的严重程度与血浆TC水平呈正相关［10］，HDLC浓度与动脉粥样硬化呈负相关［11］。动脉粥样硬化斑块不仅含有脂质，还有大量的炎性细胞。本实验中，在动脉粥样硬化斑块内也发现有大量的炎性细胞，而且动脉粥样硬化斑块的严重程度与血清TC、TG、LDL－C水平一致，即模型对照组血脂水平最高，动脉粥样硬化斑块最明显;ECFD预防组血脂水平显著低于模型对照组，动脉粥样硬化斑块也明显较小。结果表明，ECFD不仅能防止家兔实验性高脂血症的形成，而且能抑制动脉粥样硬化的形成。

大量的研究表明［12］，黄酮类化合物具有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血、抗氧化等作用。结合本实验结果和甘木通中含有黄酮类化合物，推测甘木通的黄酮类成分是其调节血脂和抗动脉粥样硬化有效成分之一，但是还有许多问题亟待解决:①发挥作用是否为黄酮类成分或者是黄酮类的哪一种?②降血脂机制是抑制脂质吸收?还是抑制胆固醇合成?或是促进胆固醇降解?③抗动脉粥样硬化的机制等等，这些将有待于进一步研究。

［1］傅锐斌，邱 建，马 骏，等.冠心康片治疗冠心病心绞痛临床疗效研究［J］. 中药材，2005，28(11):1045－1046.

［2］黄晓萍，胡宗礼，陈珺霞.甘木通提取液对家兔血液流变学的影响［J］.临床和实验医学杂志，2009，8(3):29－30.

［3］李仪奎主编.中药药理实验方法学［M］.第2版，上海:上海科学技术出版社，2006，619－620.

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［5］刘雪梅，吴符火.几类高脂血症动物模型的比较［J］.中西医结合学报，2004，2(2):132－134.

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［12］郭雪微，卢 梃，王雪里红.天然黄酮类化合物在心脑血管疾病中应用进展［J］.中国老年学杂志，2006，26(4):1001－1003.