水飞蓟宾磷脂复合物自乳化片的制备及体外溶出度考察

卫世杰， 霍务贞， 李晓芳， 方泽浩

(1.广东药学院药剂系，广东广州510006;2.广东药学院中药开发研究所，广东广州510006)

水飞蓟宾(Silybin)是一种对各型病毒性肝炎及肝损害等病症有良好疗效的药物，具有广阔的应用前景［1］。但该药难溶于水及一般有机溶剂，且口服吸收差，生物利用度低，因此如何改善该药的溶解特性，增加其体内外溶出，并制备适宜的制剂是制剂研究人员所面临的重要课题之一。为改善上述问题，本课题组制备了水飞蓟宾磷脂复合物，增大了其脂溶性，并研制了水飞蓟宾磷脂复合物自乳化片，以期进一步达到增加体外溶出度、提高生物利用度的目的。

1 仪器与材料

1.1 仪器

METTLER AE240型电子天平(德国);Shimadzu LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，Hypersil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)(日本岛津);Zetasizer Nano ZS90纳米粒度及Zeta电位分析仪(英国马尔文仪器有限公司)。

1.2 试药

水飞蓟宾(西安天一生物科技有限公司，纯度为90%);水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所，批号0856-200203);益肝灵片(陕西利君现代中药有限公司，批号090602);水飞蓟宾磷脂复合物(实验室自制);吐温-80(Tween-80，中国医药集团上海化学试剂公司);Cremophor®RH40、EL(德国BASF公司)，其余均为药用辅料。

2 实验方法

2.1 水飞蓟宾HPLC测定方法

2.1.1 色谱条件 色谱柱Hypersil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相:甲醇-水-冰醋酸(30∶40 ∶30，pH=4);流速:1 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:20 μL。

2.1.2 线性范围的确定 精密称取10 mg水飞蓟宾对照品置于100 mL棕色量瓶中，甲醇溶解并定容。精密量取1、2、4、6、8、10 mL 分别于50 mL 棕色量瓶中，甲醇稀释定容，摇匀，进样，以峰面积对药物浓度回归得线性范围。

2.2 自乳化处方的筛选与优化

2.2.1 水飞蓟宾磷脂复合物在油相、表面活性剂和助表面活性剂中平衡溶解度的考察 将过量的水飞蓟宾磷脂复合物分别加入装有适量的油相、表面活性剂、助表面活性剂的微量离心管中，涡旋分散后，于37℃水浴平衡48 h后，8 000 r/min离心10 min，取上清液用甲醇溶解后，流动相稀释后以高效液相方法测定水飞蓟宾的含量。

2.2.2 相图的绘制 在溶解度考察及初步配伍选择实验基础上确定了几种性能优良的油相、表面活性剂和辅助表面活性剂。

三元相图分别以油相、表面活性剂和辅助表面活性剂为顶点，相图中各点代表不同的油相、表面活性剂和辅助表面活性剂比例，在处方中三者的总量一定，只是相对含量变化。分别对相图中各点所对应的处方进行自乳化效率考察，主要考察乳化速度和乳化粒径。取约0.2 mL滴入100 mL水(37°C)中，用磁力搅拌器以50 r/min的速度搅拌，直至完全乳化记录时间，并于500 nm测其吸光度，同时进行粒径测定，然后静置，观察是否形成澄清透明或略带乳光的微乳溶液，并记录乳化时间［2］。

根据所得的结果绘制由表面活性剂-油相-辅助表面活性剂三元相图，考察不同处方形成微乳的能力和区域，根据所得三元相图的乳化区域大小来确定最优处方［3］。

2.2.3 水飞蓟宾磷脂复合物自乳化给药系统的体外评价 将磷脂复合物溶入表面活性剂中，以处方量的油相、表面活性剂和辅助表面活性剂于60℃水浴中涡旋混合，充分溶解混匀后在30℃水浴中平衡1 h，得到水飞蓟宾磷脂复合物自微乳化液。

乳化后粒径的测定:水飞蓟宾磷脂复合物自微乳化溶液用0.1 mol/L HCl稀释100倍后，用马尔文激光粒度分析仪进行粒径测定。

稳定性考察:分别置于4℃、室温(25℃)和冷热循环(4℃，37℃各放置12 h相交替)3种条件下进行稳定性考察。15天后观察其外观。

2.3 自乳化片的制备

按优化处方配制自乳液，采用等量递加法，将微粉硅胶与自乳液混合。吸收完毕后，再与处方量的MCC研磨，混合均匀，过筛后直接粉末压片。

2.4 体外溶出度考察

分别称取6片水飞蓟宾磷脂复合物自乳化片，照中国药典(2005年版)二部附录X C溶出度测定法(第一法)测定溶出度，溶出介质分别为900 mL的0.1 mol/L盐酸、蒸馏水和pH 6.8的磷酸盐缓冲液，转速为100 r/min，溶出温度为(37±0.5)℃，于0.5、1、2、4、8 与12 h取样。以 HPLC 方法测定水飞蓟宾含量，并绘制释放度曲线。

3 结果与讨论

3.1 水飞蓟宾线性范围考察

标准曲线为A=53 697.2C+37 682.3(R2=0.999 7)，线性范围为2 ～20 μg/mL。

测定方法的准确度符合要求，方法日内精密度＜0.7%，日间精密度＜1.3%，样品溶液可在12 h内保持稳定，表明该方法准确、可行。

3.2 自乳化处方筛选结果

3.2.1 水飞蓟宾磷脂复合物平衡溶解度结果 水飞蓟宾磷脂复合物在不同油相、表面活性剂和辅助表面活性剂中的溶解度见表1。

表中数据表明水飞蓟宾磷脂复合物在辛癸酸三甘油酯(GTCC)、乳化剂 OP、RH40中的溶解度较大，辅助乳化剂中异丙醇和无水乙醇溶解度较大，因此后续研究中采用这几种辅料的组合。

3.2.2 绘制三元相图确定处方中各成分的种类和用量 三元相图结果见图1。

表1 水飞蓟宾磷脂复合物在不同溶媒中的溶解度(37℃，±s，n=3)Tab.1 Solubility of silybin phospholipid complex in various oils and surfactants(37 ℃，±s，n=3)

表1 水飞蓟宾磷脂复合物在不同溶媒中的溶解度(37℃，±s，n=3)Tab.1 Solubility of silybin phospholipid complex in various oils and surfactants(37 ℃，±s，n=3)

溶媒 溶解度/(mg/mL) 溶媒 溶解度/(mg/mL)橄榄油 7.3±4.7 辛癸酸三甘油酯86.3±7.9油酸乙酯 17.2±1.1 亚油酸乙酯 11.4±3.2乳化剂OP 78.1±6.1 Tween-80 37.3±5.6 Cremophor EL 42±2.9 Cremophor RH40 101.4±7.5无水乙醇 19.2±3.3 PEG400 6.8±2.7丙二醇 10.6±2.4 异丙醇26.1±3.2

由图1中c，e可见，油相油酸乙酯与GTCC相比较，GTCC形成微乳的区域明显大于油酸乙酯;图1中a、b与d、e相比较可见乳化剂为RH40时，形成微乳的区域较大;a、d与b、e相比较，异丙醇为辅助乳化剂时，形成微乳的区域较大。因此，选择自微乳化区域最大的相图e中的体系制备水飞蓟宾磷脂复合物自乳化液，进行后续研究。其中油相GTCC的含量范围为10% ～35%，乳化剂RH40的含量范围为40%～80%，辅助乳化剂异丙醇含量范围为从10% ～55%。

3.2.3 粒径及乳化时间考察 根据表2中的数据确定GTCC-RH40-异丙醇的最佳比例为20∶60∶20。见表2。

图1 水飞蓟宾磷脂复合物自微乳图Figure 1 Ternary phase diagram of silybin phospholipid complex

表2 不同处方的粒径及乳化时间考察(n=6)Tab 2 Effect of self-microemulsification in vitro

3.3 自乳化片的制备

采用等量递加法，将自乳化液与等量的微粉硅胶研磨混匀，制成疏松粉末状，干法制粒后进行压片。自乳液的质量百分比为56.8%，微粉硅胶的质量百分比为33.8%，MCC的质量百分比为9.4%。

3.4 自乳化片溶出度考察结果

溶出度结果见图2。

图2 水飞蓟宾磷脂复合物自乳化片及市售片溶出度图Fig.2 Dissolution curves of SPCMET compared with those in tablet in various cond itions

图中SBSME为自制的水飞蓟宾磷脂复合物自乳化片，T为市售的益肝灵薄膜衣片。从图中结果可见，自制的自乳化片在3种溶出介质中的溶出度均明显高于参比制剂，达到了90%左右，而参比制剂仅为40%左右，且溶出介质对溶出度的影响不大。说明将水飞蓟宾磷脂复合物制成自乳化片后，能明显提高其溶出度。

4 讨论

4.1 水飞蓟宾磷脂复合物与水飞蓟宾相比，其脂溶性增大，不仅有利于体内的跨膜转运，也有利于制备液体制剂。SMEDDS的油相多为脂肪酸酯类和经过结构改造或水解后的植物油类，尤其是链长在C8～C10之间的中等链长的脂肪酸酯类(MCT)。有研究表明表面活性剂最佳的HLB值在11～15之间，浓度也应适中，这样形成的乳滴粒径较小［4-5］。本实验中在溶解度的基础上选择了GTCC为油相、RH40为乳化剂，实验结果也显示最佳处方对水飞蓟宾磷脂复合物具有较好的增溶作用，自乳化效率高，粒径小，制剂稳定，溶出度较市售薄膜衣片有明显提高。

4.2 本实验在绘制三元相图时采用了一种新方法，即油相、乳化剂、助乳化剂总量为1 g，按不同比例配比，加入100 mL水中，观察是否澄清，然后绘制以油相、乳化剂、助乳化剂为顶点的假三元相图。与常用的加水法［6］相比，具有操作简便，容易辨别的优点，特别是对凝胶相的判断上具有优势。

4.3 自微乳液可以制备成软胶囊或以液体的形式直接服用［7］，但是存在诸多不便，如自乳化液一般比较粘稠，灌封时存在困难;软胶囊囊壳中的水分在干燥过程中会进入自微乳液，从而改变了微乳各相的组成，并导致胶囊壳失水变干易于碎裂等。本实验将自微乳液制成固体剂型口服，从而解决了微乳传统给药方式的不足。

4.4 溶出度结果显示本实验所制备的片剂溶出度明显优于市售片，由于采用的溶出介质为蒸馏水、盐酸溶液和磷酸盐缓冲溶液，三者对水飞蓟宾的溶解度和溶出速率均较差，但自乳化片的溶出度明显较高，其原因为水飞蓟宾磷脂复合物在溶液中形成微乳，所以制剂最终的溶出度较高。

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［5］Gershanik T，Benita S.Self-dispersing lipid formulations for improving oral absorption of lipophilic drugs［J］.Eur J Pharm Biopharm，2000，50:179-188.

［6］谢 燕，荣 蓉，杨 峻，等.醋柳黄酮自微乳制剂制备工艺的研究［J］.中国中药杂志，2009，34(1):43-46.

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