艾叶中异泽兰黄素的含量测定

龙 澜,李亚杰,程新华,帅超群

(1.湖北省农业科学创新中心鄂西综合实验站，湖北 恩施 445000；2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

艾叶属菊科植物艾(ArtemisiaargyiLevl.et.Vant.)的干燥叶，具有散热止痛，温经止血的作用.用于少腹冷痛，经寒不调，宫冷不孕吐血等症状.异泽兰黄素是艾叶中一种活性成分，二十世纪八十年代发现异泽兰黄素能抑制肿瘤细胞的生长[1]，它还具有治疗胃溃疡和镇痉的作用[2,3]，能调控血糖含量[4],还有抗诱变因素的小生能[5]，在临床上治疗胃癌有一定的疗效.目前，异泽兰黄素的检测方法主要是液相色谱[6，7].笔者采用超声波提取，反相高效液相色谱法检测艾叶中异泽兰黄素的含量.

1 仪器与试药

Waters液相2996；KQ-250D型超声波清洗器.异泽兰黄素对照品(天津一方科技有限公司提供，批号20100601)，色谱乙腈，去离子水，甲醇、80%甲醇、无水乙醇、95%乙醇试剂均为分析纯，艾叶样品采自湖北恩施市内野生品种，经本研究所杨永康高级农艺师鉴定为菊科植物ArtemisiaargyiLevl.et.Vant..

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Waters μBondapark C18柱(3.9 mm×300 mm，10 μm)，流动相∶乙腈-磷酸缓冲盐(40∶60)(称取2.72 g磷酸二氢钾溶于1 000 mL去离子水中，磷酸调pH=2.5～3.0)；流速:1.0 mL/min；检测波长:350 nm；柱温:25℃.样品中异泽兰黄素与其他组分分离较好.

图1 异泽兰黄素对照品

图2 艾叶样品

2.2 对照品溶液的制备

精密称取异泽兰黄素对照品5.0 mg，置50 mL棕色瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作对照储备液.取备用液,加乙腈配置成0.5，5，10， 20，30 μg/mL的对照品溶液.

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 提取液的选择 取艾叶样品过(4号筛)五份各约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密称定，分别精密加入甲醇、80%甲醇、无水乙醇、95%乙醇，超声波提取45 min，测定.其结果显示甲醇提取效果最好，且杂质少，因此选甲醇为提取剂.

2.3.2 提取时间的选择 取艾叶样品(过4号筛)五份各约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密称定，加入甲醇50 mL，分别超声波提取30、45、60、80 min，测定.结果显示在45 min内可提取完全，因此选提取时间为45 min.

表1 添加回收率实验

2.3.3 供试品溶液的制备 取艾叶样品(过4号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，即得.

2.3.4 线性关系的考察 取对照品溶液,按照2.1的色谱条件,以异泽兰黄素对照品溶液浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线,线性方为:y=314 252x-192 374，r=0.999 91，结果表明异泽兰黄素在0.5～3.0 μg/mL之间线性关系良好.

2.4 精密度试验

按照2.1的色谱条件连续进同一供试品溶液5次，测定峰面积的RSD为1.86%.

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，按照2.1的色谱条件，每2 h测定一次，供试品中异泽兰黄素含量的RSD为1.04%(n=7) ，表明供试品溶液在12 h内稳定.

2.6 重复性试验

取艾叶样品，按照2.3.2的方法进行处理，平行制备5份，依法测定，计算其RSD为2.03%.

2.7 回收率试验

精密称取已知含量的同一艾叶样品(含量约万分之6.47)约0.5 g，分别加入等量异泽兰黄素对照品，按照2.3.2的方法进行处理，测定含量，计算回收率，结果见表1.

3 讨论

1)在对异泽兰黄提取溶剂的考察过程中，我们发现甲醇的提取效果是最好的；并对超声波提取时间进行考察，结果采用超声提取45 min为最佳方法.

2)通过对异泽兰黄素的三维扫描，异泽兰黄素的最大吸收在350 nm处.

3)本实验所建立的测定异泽兰黄素含量的方法，准确度高，操作简便、快速、准确、灵敏度高、重复性好，能准确检测艾叶中异泽兰黄素的含量.

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