冷鲜牛肉中蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)的分离与鉴定

张旭东,闫超杰,孙 剑,姚 佳,苏明明,王植朔,卢行安

(1.锦州出入境检验检疫局,辽宁锦州 121013;2.辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连 116001)

蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)是革兰阴性兼性厌氧杆菌,存在于人和动物的粪便、自然界水和土壤中,是肠杆菌科哈夫尼亚属唯一的一种细菌。该菌属于条件致病菌,在特定的条件下可引起多种肠道感染疾病,同时与伤口感染、化脓、腹泻等多种疾病有关[1]。蜂房哈夫尼亚菌在腐肉中的分离几率很高,该菌的存在是造成肉制品腐败变质,影响风味和保存时间的因素之一。蜂房哈夫尼亚菌喜好厌氧潮湿的环境,真空包装的冷藏环境是其适合的生长环境,在开始阶段,蜂房哈夫尼亚菌存在于肉及肉制品的比例是比较低的,但是经过冷藏储存,温度达到它能生长的最低温度4℃左右之后,其他非低温耐受细菌的生长受到损害抑制,而蜂房哈夫尼亚菌仍能正常生长繁殖,其数量便急速增加,影响肉制品的风味和品质。本文从真空包装的出口冷鲜牛肉沙门氏菌检验过程中分离出1株可疑菌,通过对其形态特征、生理生化特性的观察和检测,同时结合BBL Crystal半自动微生物检测仪进行鉴定,结果为蜂房哈夫尼亚菌。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种来源 冷鲜真空包装牛肉,锦州绿源肉业公司提供。

1.1.2 培养基与试剂 缓冲蛋白冻水(BPW)、SC增菌液、TTB增菌液、DHL琼脂、BS琼脂、TSI(三铁糖)琼脂、EH琼脂、科玛嘉显色平板、沙门菌生化试剂套装,北京陆桥技术有限责任公司;BBL Crystal半自动检测革兰阴性菌试剂盒,BD公司。

1.1.3 仪器 电热恒温培养箱、BBL Crystal半自动微生物检测仪、数码荧光生物显微镜。

1.2 方法[2-3]

1.2.1 取样 在无菌环境中,打开冷鲜牛肉包装,用已灭菌的剪刀、镊子在牛肉的表层和里层肌肉进行取样,取样时避开脂肪组织。取样点要全面有代表性,取冷鲜牛肉100 g左右混匀作为样品备用。

1.2.2 增菌培养 取冷鲜牛肉样品25 g放入225 mL BPW增菌液中进行初步增菌,(36±1)℃培养8～18 h,转移培养物10 mL至100 mL SC增菌液,(36±1)℃培养20 h进行2次增菌培养,同时转移培养物10 mL至100 mL TTB增菌液(42±1)℃培养20 h。

1.2.3 分离培养 取增菌液1接种环,三段画线法涂布BS、HE、科玛嘉显色平板进行菌落分离培养。平板(36±1)℃培养24～48 h。

2 结果与分析

2.1 菌落观察

观察BS、HE、科玛嘉显色平板培养后分离出的单个菌落的特征,选择HE平板上灰黑色至灰绿色、圆形、湿润、光滑的菌落和科玛嘉显色平板上的灰白色、湿润、光滑的菌落,挑选可疑菌落底层穿刺斜面划线接种TSI,TSI经24 h培养结果为斜面红色不产酸,底层黄色产酸,不产气,H2S阴性。染色镜检为革兰阴性无芽胞、杆状细菌,见图1。

图1 蜂房哈夫尼亚菌革兰染色结果和琼脂上的菌落特征Fig.1 The result of Gram stain and the conlony characteristics on agar of H.alvei

2.2 Crystal微生物半自动检测仪辅助鉴定

取三糖铁培养物接种革兰阴性肠杆菌科发酵生化鉴定试剂盒,用Crystal微生物半自动检测仪辅助检测鉴定,鉴定结果为蜂房哈夫尼亚菌,见表1。

2.3 生化鉴定

结合伯杰细菌鉴定手册选择典型试验做生化试验进行确认[4],结果见表2。

表1 微生物半自动检测仪鉴定结果Table 1 The identification result ofBBL Crystal

续表

表2 蜂房哈夫尼亚菌生化鉴定结果Table 2 The physiological and biochemical characteristics ofHafnia alvei

3 结论与讨论

本文综合形态鉴定、生化试验和BBL半自动微生物检测仪的检测结果,判定从冷鲜牛肉中分离出的可疑菌为蜂房哈夫尼亚菌。该菌属于条件致病菌,在特定条件下可引起多种肠道疾病,在生活中就有该菌引起腹泻等疾病的病例[5]。此外,

该菌还可以引起禽畜肉的腐烂变质,对冷鲜保存的禽畜肉的质量风味造成影响。因此,为了保证肉类品质并预防该菌对人类健康的潜在危害,肉品加工生产企业应定期对该菌进行严密监控,各有关检验机构在冷鲜肉的检验过程中也应提高警惕,加大蜂房哈夫尼亚菌的检验力度。

[1] R.Podschun,A.Fischer,U.Ullmann.Characterisation ofHafnia alveiisolates from human clinical extra-intestinal specimens：haemagglutintns,serum resistance and siderophore synthesis[J].The Pathollgical Society of Great Britain and Ireland,2001,50：208-214.

[2] 刘秀梅,郭云昌,刘桂华,等.食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB/T4789.4-2008[S],2008.

[3] 曹际娟,卢行安,郑秋月,等.食品微生物学与现代检测技术[M].大连：辽宁师范大学出版社,2006：41-60.

[4] R.E.布坎南,N.E.吉本斯.伯杰细菌鉴定手册(第8版)[M].北京：科学出版社,1984：388.

[5] M.John Albert,Khorshed Alam,Moyenul Islam,et al.Hafnia alvei,a Probable Cause of Diarrhea in Humans[J].Infection and Immunity,Apr.,1991,59(4)：1507-1513.