凹凸棒石对中药水煎液中丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的吸附作用考察

李晓强，李 平，魏 琴，张德莉

（兰州大学 第二医院，甘肃 兰州 730030）

丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA是中药丹参中的主要有效成分，为了最大限度去除在水煎提取过程中的大分子无效成分，保留有效成分，提高中药制剂质量，本文以丹参药材、复方丹参滴丸水煎液中有效成分丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量和煎出总固体物量作为评价指标，采用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石作为吸附澄清剂，分别对药材丹参及复方丹参滴丸水煎提取液进行了吸附澄清处理，考察了普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石吸附澄清效果。

1 材 料

Agilent 1100高效液相色谱仪（包括：G1312A二元泵、G1315B二极管阵列检测器、G1316A色谱柱恒温箱、G2170AA色谱工作站和7725进样阀），美国安捷伦公司；Sartorius NE215S电子天平，德国赛多利斯仪器系统有限公司；丹参酮Ⅰ对照品、丹参酮ⅡA对照品，中国药品生物制品检定所；复方丹参滴丸水煎提取液，按照2005版中国药典自制；处方中所用药材均符合中国药典2005年版一部标准；凹凸棒（120目），甘肃省地质勘探局第三地质矿产勘查院；水为纯化水；其余试剂均为色谱纯。

酸化凹凸棒：普通凹凸棒过7号筛，使用前加水离心处理3次，弃去上层悬浮物质和下层沉淀杂质，收集中间部分物质，然后加37%盐酸浸泡72 h，再用纯化水洗至pH 6～7，于105℃干燥8 h，研细过7号筛，即为酸化凹凸棒。

2 方法与结果

2.1 丹参药材水提取物的制备

称取丹参20 g，分别加入10倍量与8倍量的水煎煮提取 2次，第 1次1.5 h、第 2次 1.0 h，滤过，合并滤液，摇匀。精密量取滤液 20 mL，共 10份，分别置于 50 mL烧杯中（剩余母液蒸干备用），按 0，0.5%，1.0%，1.5%，2.0%的浓度分别加入普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石，以相同速度搅拌1 h，在4℃静置48 h，观察澄清度，抽滤。滤液减压浓缩，蒸干，于60℃烘至恒重。按中国药典2005年版附录ⅩA浸出物测定法计算总固体物量，结果见表1。

2.2 复方丹参滴丸水提取物制备[1]

称取丹参90 g，三七28.2 g。分别加入10倍量与8倍量的水进行煎煮提取2次，第1次1.5 h、第2次1.0h，滤过，合并滤液，摇匀。精密量取50 mL，共10份，分别置100 mL烧杯中，在相同搅拌速度下，分别加入普通凹凸棒和酸化凹凸棒，使其含量分别达到0，0.5%，1.0%，1.5%，2.0%。4 ℃静置沉淀 48 h，观察澄清度，抽滤。滤液减压浓缩，蒸干，于60℃烘至恒重。按中国药典2005年版附录ⅩA浸出物测定法计算总固体物量，结果见表1。

表1 总固体物量测定结果（±s，n=3）Tab.1 The results of solid component（±s，n=3）

表1 总固体物量测定结果（±s，n=3）Tab.1 The results of solid component（±s，n=3）

与普通凹凸棒组比较：1P＜0.05；与同组0%酸化凹凸棒比较：2P＜0.051P ＜0.05 vs common attapulgite group；2P＜0.05 vs same 0%acidified attapulgite group

编号 凹凸棒含量/%丹参药材/g普通凹凸棒 酸化凹凸棒复方丹参滴丸/g普通凹凸棒 酸化凹凸棒1 0 0.205 17±0.000 34 0.206 83±0.000 431 0.960 68±0.000 32 0.962 77±0.000 161 2 0.5 0.204 74±0.000 21 0.201 66±0.000 351，2 0.960 25±0.000 23 0.942 37±0.000 121，2 3 1.0 0.204 64±0.000 16 0.199 26±0.000 341，2 0.961 89±0.000 26 0.932 18±0.000 431，2 4 1.5 0.202 23±0.000 32 0.190 56±0.000 291，2 0.946 74±0.000 17 0.902 94±0.000 261，2 5 2.0 0.199 90±0.000 43 0.186 85±0.000 421，2 0.951 53±0.000 34 0.880 51±0.000 401，2

丹参药材水煎液及复方丹参滴丸水煎液的酸化凹凸棒石组总固体物量明显比其普通凹凸棒石组减少；不同比例普通凹凸棒石处理丹参药材水煎液及复方丹参滴丸水煎液，对其浸出物总固体量无显著性影响；用不同比例酸化凹凸棒石处理丹参药材水煎液及复方丹参滴丸水煎液，对其浸出物总固体量有显著性影响，随着加入酸化凹凸棒石量的增加，浸出物总固体量相应减少。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件[2-3]色谱柱：ODS-80 Ts（4.6 mm×150mm，5μ m）；流动相：甲醇-水（75∶25）；流速：0.8 mL/min ；检测波长 ：270 nm ；柱温 ：30 ℃；进样量 ：20 μ L 。

2.3.2 溶液的制备

2.3.2.1 对照品溶液 精密称取丹参酮Ⅰ对照品0.42 mg、丹参酮ⅡA对照品 0.22 mg，置同一 10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得丹参酮Ⅰ（42 μ g/mL）、丹参酮 ⅡA（22 μ g/mL）对照品溶液。

2.3.2.2 丹参药材供试品溶液 精密称取2.1项下的10份供试品各约0.016 g，分别置于10mL量瓶中，加入流动相溶解，超声处理30 min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用 0.22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液作为丹参药材供试品溶液。

2.3.2.3 复方丹参滴丸供试品溶液 精密称取2.2项下的10份供试品各约0.08 g，分别置于10 mL量瓶中，加入流动相溶解，超声处理30 min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用 0.22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液作为复方丹参滴丸供试品溶液。

2.3.2.4 阴性样品溶液 称取三七药材20 g，按复方丹参滴丸供试品溶液的制备方法依法制得复方丹参滴丸阴性样品溶液。

2.3.3 专属性试验 精密量取对照品溶液、丹参药材及复方丹参滴丸供试品溶液、阴性样品溶液各20 μ L，进样，记录色谱图，结果见图1。由图 1可知供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性样品色谱在此保留时间无干扰。

2.3.4 线性范围 精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.3 ，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0，1.2 mL 分别置于 5 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含丹参酮 Ⅰ0.84，1.68，2.52，3.36，4.20，5.04，6.72，8.40，10.08 μ g，丹参酮 ⅡA0.44，0.88，1.32，1.76，2.20，2.64，3.52，4.40，5.28 μ g 的系列混合溶液。按2.3.1项下条件测定峰面积，以对照品浓度X为横坐标、峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，结果见表2。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

表2 线性关系考察结果Tab.2 The results of linear relation

2.3.5 稳定性与精密度试验 精密量取对照品溶液 20 μ L 分别于 0，2，4，6，8，10 h 进样测定 ，结果丹参酮Ⅰ峰面积的RSD 为0.49%（n=6），丹参酮ⅡA峰面积的RSD为1.32%（n=6），表明对照品溶液在10 h内稳定性良好。取同一对照品溶液重复进样6次，测其峰面积，结果丹参酮Ⅰ峰面积的 RSD为1.39%（n=6），丹参酮ⅡA峰面积的 RSD 为0.62%（n=6），表明本法精密度良好。

2.3.6 重复性试验 取同一批供试品6份，按复方丹参滴丸供试品溶液制备方法制备，进样测定，结果丹参酮Ⅰ峰面积的 RSD 为1.55%（n=6），丹参酮ⅡA峰面积的 RSD为1.59%（n=6）。

2.3.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批复方丹参滴丸供试品0.1g至10 mL量瓶中，共6份，分别按高、中、低量加入丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的混合对照品溶液，充分混匀，加入流动相溶解，其余操作同复方丹参滴丸供试品溶液的制备方法，进样测定，计算丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的加样回收率，结果见表3。

表3 丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA加样回收率试验结果Tab.3 The results of added recovery of TanshinoneⅠand TanshinoneⅡA

2.3.8 含量测定 精密量取丹参药材供试品溶液及复方丹参滴丸供试品溶液各20 μ L，进样测定，计算丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量。结果见表4～5。

对于丹参药材水煎液和复方丹参滴丸水煎液，酸化凹凸棒石组和普通凹凸棒石组相比，其丹参酮Ⅰ含量无显著性差异；用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石处理丹参药材水煎液和复方丹参滴丸水煎液，对丹参酮Ⅰ含量均有一定影响。

对于丹参药材水煎液和复方丹参滴丸水煎液，酸化凹凸棒石组和普通凹凸棒石组相比，其丹参酮ⅡA含量无显著性差异；用不同比例的普通凹凸棒石和酸化凹凸棒石处理丹参药材水煎液和复方丹参滴丸水煎液，对丹参酮ⅡA含量均有一定影响。

3 讨 论

中药水提液中常含有淀粉、蛋白质、黏液质、色素、树胶、果胶等杂质，使制成的制剂服用量较大，并且影响液体制剂的澄清度[4-5]。因此，在中药制剂的生产过程中，经常需要对药物的提取液进行精制。目前广泛使用的精制方法是水提醇沉精制法，它可以有效地除去提取液中的杂质。但水提醇沉精制法存在不少缺陷，如耗用大量乙醇、易燃、易爆等；且在去除杂质的同时，可造成生物碱、苷类、有机酸等有效成分的不同程度的流失[6]。凹凸棒石作为一种天然的澄清剂，资源丰富，价格低廉，无毒无污染，沉淀效果肯定。若能将其用于中药提取液的精制工艺中，可减少成本，缩短生产周期，且易于操作[7-9]。

表4 丹参酮Ⅰ的含量测定及澄清度结果（±s，n=3）Tab.4 The results of content of TanshinoneⅠ and clarification（±s，n=3）

表4 丹参酮Ⅰ的含量测定及澄清度结果（±s，n=3）Tab.4 The results of content of TanshinoneⅠ and clarification（±s，n=3）

-.溶液混浊；+.溶液较澄清；++.溶液澄清-.Solution not clear；+.Solution relatively clear；++.Solution clear

编号 凹凸棒含量/%丹参药材/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度复方丹参滴丸/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度1 0.0 234.36±0.31 - 230.85±0.26 - 100.99±0.40 - 105.78±0.26 -2 0.5 230.59±0.38 - 228.05±0.48 - 97.08±1.02 - 97.73±0.76 -3 1.0 227.66±0.43 - 221.49±0.21 - 97.31±0.63 - 95.53±0.42 -4 1.5 229.90±0.56 + 220.91±0.42 + 96.59±0.53 + 96.98±0.58 +5 2.0 224.05±0.92 + 216.09±0.57 ++ 96.31±0.72 + 90.25±0.92 ++

表5 丹参酮ⅡA的含量测定及澄清度结果（±s，n=3）Tab.5 The results of content of Tanshinone ⅡAand clarification（±s，n=3）

表5 丹参酮ⅡA的含量测定及澄清度结果（±s，n=3）Tab.5 The results of content of Tanshinone ⅡAand clarification（±s，n=3）

-.溶液混浊；+.溶液较澄清；++.溶液澄清-.Solution not clear；+.Solution relatively clear；++.Solution clear

编号 凹凸棒含量/%丹参药材/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度复方丹参滴丸/（μ g/g）普通凹凸棒 澄清度 酸化凹凸棒 澄清度1 0.0 105.31±0.38 - 105.34±0.43 - 35.71±0.23 - 35.16±0.69 -2 0.5 104.32±0.51 - 102.04±0.25 - 35.54±0.78 - 34.73±0.37 -3 1.0 105.04±0.27 + 100.45±0.21 + 34.73±0.58 + 34.91±0.14 +4 1.5 103.38±0.61 + 99.21±0.53 + 34.23±0.11 + 33.98±0.63 +5 2.0 103.80±0.47 + 97.61±0.96 ++ 34.05±0.83 + 31.13±0.29 ++

由实验结果可知，以水煎液总固体物的含量作为评价指标，当丹参药材水煎液及和复方丹参滴丸水煎液加入不同比例的普通凹凸棒石时，得到的总固体物含量与自然静置沉淀法处理得到的总固体物含量无明显差别，与加入的普通凹凸棒石量也无明显相关性，水煎液澄清度略有改善，表明其吸附力较低；但当加入不同比例的酸化凹凸棒石时，总固体物含量明显减少，且与加入的酸化凹凸棒石量有明显相关性，水煎液澄清度也明显改善，提示对无效成分的吸附去除较为明显。以丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量作为评价指标，当丹参药材水煎液及复方丹参滴丸水煎液加入不同比例的普通凹凸棒石与酸化凹凸棒石后，测得丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量略有减少，且酸化凹凸棒石组与普通凹凸棒石组相比无显著性差异。因而，酸化凹凸棒石可用作含有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的中药在提取精制过程中的吸附澄清剂。

凹凸棒石是一种天然水合镁铝硅酸盐类非金属矿土，内部多孔道，具有良好的吸附性能。凹凸棒石经酸浸泡后得到酸化凹凸棒石，此时凹凸棒石内部八面体结构部分溶解，使得孔道数目增加，比表面积增大；同时凹凸棒石的孔道中常含有碳酸盐等杂质，酸化处理可除去此类杂质，使孔道疏通，增大比表面积；还有凹凸棒石的阳离子可进行离子交换，酸化使半径较小的H+置换出部分半径较大的K+、Na+、Ca2+和Mg2+等离子，增大孔道容积，比表面积增大。以上三方面因素使得酸化凹凸棒石的比表面积比普通凹凸棒石的比表面积大的多，因而吸附性能得到提高，这也从本实验结果中得以证实。

因而，通过研究对凹凸棒石进行一些表面形态和结构修饰的改性处理，赋予其特定理化性能，使其具有选择性的吸附功能，具备环境友好的实际应用条件，在中药制剂生产中获得对无效成分的更为高效去除和对有效成分提取精制效果，将是凹凸棒黏土石应用研究的重点所在[10]。

[1] 中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005：528.

[2] 闫豫君，杨广德，贺浪冲.RP-HPLC同时测定丹参中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量[J].中草药，2002，33（4）：363-365.

[3] 师彦平，杨孝朴，李瑜.甘肃丹参化学成分研究——4种丹参酮含量的高效液相层析法测定[J].兰州大学学报：自然科学版，1996，32（2）：69-72.

[4] 李平，果茵茵，史觐诚.凹凸棒对黄芩苷吸附作用的考察[J].中国医院药学杂志，2008，28（6）：455-458.

[5] 李平，张国霞，李亚琴.凹凸棒对大黄素吸附作用考察[J].中国药师 ，2008，11（2）：137-140.

[6] 李平，果茵茵，王霞霞.凹凸棒对盐酸小檗碱吸附作用考察[J].中国药师，2008，11（1）：7-8.

[7] 张国霞，李平，韩彪.3种不同沉淀剂对养血扶正颗粒中阿魏酸与淫羊藿苷含量的影响[J].中国生化药物杂志，2007，28（1）：46-48.

[8] 果茵茵，李平.不同沉淀方法对醒脑益智颗粒中淫羊藿苷、阿魏酸与丹参酮ⅡA含量的影响[J].中国生化药物杂志，2007，28（2）：101-104.

[9] 李平，魏琴，王爱勤.凹凸棒对双氯芬酸钠的吸附作用与应用研究[J].中国生化药物杂志，2006，27（2）：79-82.

[10] 郑茂松，王爱勤，詹庚生.凹凸棒石黏土应用研究[M].北京：化学工业出版社，2007：82-105.