蝉拟青霉对蚕豆蚜虫致病性的初步研究

谭艾娟　欧　翔　刘爱英

摘要:研究了8株蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)对蚕豆蚜虫的致病性。结果表明,8株蝉拟青霉分生孢子悬液、菌丝悬液对蚕豆蚜虫的致病性有一定差异,孢子悬液的致病性强于菌丝悬液,其中GZDXIFR4611菌的感染致死效果最好,其孢子悬液的致死率可达到86.7%,菌丝悬液的致死率可达到66.7%,这将为蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供参考数据。

关键词:蝉拟青霉;蚕豆蚜虫;致病性

中图分类号:S476.12文献标识码:A DOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.03.016

Study on Pathogenicity of Paecilomyces cicadae to Aphis Medicnginis Koch

TAN Ai-juan,OU Xiang,LIU Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang 550025,China)

Abstract:To investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae (PC) to aphis medicnginis koch, the insecticidal mortality of the 8 strains of PC were tested. The result indicated that the 8 strains of PC showed the different insecticidal effect. The pathogenicity of spore suspension was stronger than that of hyphae suspension. The highest insecticidal mortality of the 8 strains of PC was GZDXIFR4611, which mortality in spore suspension was 86.7% and in hyphae suspension was 66.7%.

Key words:Paecilomyces cicadae;aphis medicnginis koch;pathogenicity

蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)又名蝉花,是由子囊菌类麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae)的子实体及其寄主山蝉(Cicadeflammata)幼虫的虫体部构成[1]。拟青霉属真菌作为一类重要的生防真菌可以侵染多种害虫,产生多种具有生物活性的代谢产物,在害虫生物防治上有着广泛的应用[2]。蝉拟青霉既是名贵中药,又有较高的致病性,可以寄生鳞翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆虫[3]。随着化学农药弊端的日益凸现,生物防治成为当今研究的热点,笔者报道了8株蝉拟青霉对蚕豆蚜虫的致病性,为将蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供参考数据,有一定的应用价值。

1材料和方法

1.1材 料

1.1.1供试菌株蝉拟青霉共8株:GZDXIFR3618采自贵州省荔波县;GZDXIFR4611、GZDXIFR4614、GZDXIFR4615、GZDXIFR1615均采自贵州省贵阳市森林公园;GZDXIFR 4718采自贵州省梵净山;GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山;GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由贵州大学真菌资源研究所分离、鉴定、保存。

1.1.2供试昆虫供试蚕豆蚜虫由贵州大学昆虫研究所提供。

1.1.3培养基PDA培养基:马铃薯200 g切块,用水煮沸30 min,加蔗糖20 g、琼脂20 g、水补足1 000 mL,pH自然。液体培养基[4]:葡萄糖20 g,酵母膏5 g,K2HPO4 1 g,水补足1 000 mL,pH6.5。

1.2方 法

1.2.1菌培养斜面培养:将8株菌分别接种到PDA试管斜面上,25 ℃恒温培养7 d,备用。平板培养:将活化的斜面菌种接种于PDA平板,25 ℃恒温培养15 d,备用。液体种子培养:用接种环将已活化的试管斜面菌种接种到装有50 mL液体培养基的250 mL的三角瓶中,25℃,150 r/min,摇床振荡培养18～20 h。

液体发酵培养:将种子培养液按5%的接种量接种到装有50 mL液体培养基的250 mL的三角瓶中,25 ℃,150 r/min,摇床振荡培养72～96 h。

1.2.2杀虫制剂准备孢子悬液:在培养好的平板菌落上倒入适量的0.05%土温-80溶液,用接种环轻轻刮下孢子,充分震荡后用4层纱布滤入无菌三角瓶中,调整孢子浓度为1×107个/mL,2×107个/mL,3×107个/mL,备用。菌丝悬液:将摇瓶培养好的菌丝用无菌水洗涤除去发酵液,用玻璃匀浆器破碎细胞,无菌水稀释备用,稀释倍数(w∶v)为1倍、2倍、3倍。

1.2.3致病性测定参照安建梅[5]、陈祝安[6]的方法,将直径为12 cm的培养皿内放入圆形滤纸,灭菌,冷却后把新鲜、无虫、洁净的蚕豆叶放入培养皿内,用湿润的棉球包裹叶柄,从长有两龄蚜虫的蚕豆叶上接入个体大小相近的蚜虫30头,用喷雾器均匀地往蚕豆叶上喷洒适量的孢子或菌丝悬液,空白对照为无菌水。25 ℃恒温保湿培养,每日光照10 h,每2 d给棉球加一次无菌水。观察蚜虫感染情况,计数。致死率=试验组死亡率-空白组死亡率。

2结果与分析

2.1感染症状

在试验过程中,蚕豆蚜虫感染了蝉拟青霉后,保湿培养3～4 d,虫体表面被白色菌丝覆盖,无孢梗束形成。对感染的蚜虫进行粘片显微观察,可见蝉拟青霉菌丝形成的产孢结构和分生孢子。

2.28株蝉拟青霉菌丝悬液对蚕豆蚜虫的致病性差异

从表1可看出,不同浓度的8株蝉拟青霉菌丝悬液对蚕豆蚜虫都有致病作用,浓度越高,致病性越强。其中GZDXIFR4611的致病性最强,致死率可达到66.7%。

2.38株蝉拟青霉孢子悬液对蚕豆蚜虫的致病性差异

从表2可看出,不同浓度的8株蝉拟青霉孢子悬液对蚕豆蚜虫都有致病作用,浓度越高,致病性越强。其中GZDXIFR4611的致病性最强,致死率可达到86.7%。

3讨 论

(1)对蚕豆蚜虫的致病性测定结果显示,8株蝉拟青霉菌株对蚕豆蚜虫都有致病作用,浓度越高,致病性越强。通过对蝉拟青霉孢子悬液、菌丝悬液致病性测定表明,孢子悬液的致病能力高于菌丝悬液,并且8株蝉拟青霉菌中GZDXIFR4611致病性最强。

(2)对感染的蚕豆蚜虫进行粘片显微观察,结果显示芽孢结构是蝉拟青霉;孢子悬液致病的原因可能在于孢子萌发时芽管侵入虫的体表使虫致死。本试验中采自不同地区的蝉拟青霉菌株对蚕豆蚜虫致病能力有一定差异,但与其地理

来源无明显相关性。

(3)目前对蝉拟青霉的研究主要集中在药用方面,在其生物防治方面的研究不多,本研究表明,蝉拟青霉可能含有对蚜虫的致死因子,作为生防试剂有良好的开发应用前景,有待进一步研究。

参考文献:

[1] 陈祝安,刘广玉,胡菽英.蝉花的人工培养及其药理作用研究[J].真菌学报,1993,12(2):138-144.

[2] 陈祝安.虫生真菌蝉拟青霉的研究[J].真菌学报,1991,10(4):280-287.

[3] 邹晓,刘爱英,梁宗琦.紫外线诱变蝉拟青霉对白粉虱治病性的影响[J].菌物研究,2004,2 (4) :35-39.

[4] 谭艾娟,梁宗琦,刘爱英.蝉拟青霉最适液体培养基的正交试验研究[J].华中农业大学学报,2004, 23(1):33-35.

[5] 安建梅.虫生真菌粉质拟青霉对黄刺蛾幼虫的致病性研究[J].山西农业大学学报,2000(2):105-107.

[6] 陈祝安,黄基荣,许益伟,等.蝉拟青霉防治菜粉蝶幼虫试验[J].生物防治通报,1990,6(3):131-133.