EDTA-K2诱导的血小板聚集对血细胞计数的影响

066100 北京军区北戴河疗养院 陈松楠

EDTA-K2诱导的血小板聚集对血细胞计数的影响

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目的 研究EDTA-K2诱导血小板聚集所引起的血液分析仪计数RBC、WBC及PLT的数值变化。方法 采用血液分析仪检测EDTA-K2抗凝血，同时手工计数标本和涂片镜检，并作相应比较得出结论。结果 血液分析仪检测的部分EDTA-K2抗凝血血小板计数低于手工法计数的结果，而白细胞计数结果却高于后者，二者差别均有临床意义。结论 对于EDTA-K2抗凝的静脉血个别患者可能会发生血小板聚集，从而引起血小板假性减少PTCP(pseudothrombocytopenia)，WBC计数假性增高，所以应该引起重视，及时纠正，避免一些不必要的检查和治疗。

EDTA-K2；血小板聚集；血细胞计数

血液分析仪在全国各级医院已普及，相对于传统的手工法来说其优点是简单、快捷、重复性好等，但很多外界因素都会影响其检测的准确性。EDTA-K2抗凝血引起的个别人血小板发生聚集就是典型的例子，它可以导致EDTA依赖性的假性血小板减少(EDTA-dependent PTCP)[1]，同时还造成白细胞数计数的偏高，引起临床误诊，本次实验对7例血小板聚集患者进行了分析研究。

1 资料与方法

1.1 检测对象 2007年8月～2008年8月EDTA-K2抗凝有血小板聚集的患者7例，其中男3例，女4例；年龄15～55岁，平均为34岁。

1.2 仪器与试剂 深圳迈瑞公司BC-3200血细胞分析仪及仪器配套试剂，质控品是PHC-3D血细胞质控物(南京普朗生物技术有限公司)，Olympus公司生产的双目显微镜BH-2，EDTA-K2真空抗凝管 (沧州永康医药用品有限公司)，盐酸稀释液、草酸铵血小板稀释液及瑞氏染液。

1.3 方法 首先用PHC-3D血细胞质控物监控其稳定性，然后严格按照仪器操作规程用血液分析仪检测并记录EDTA-K2抗凝血的WBC、RBC及PLT的数值，然后采集患者末梢血20 μL加0.38 mL盐酸及草酸铵稀释液由有经验的主管技师进行手工WBC、RBC及PLT计数，并制备血涂片，观察血小板数量、形态及血小板聚集情况。

2 结果

BC-3200血细胞分析仪检测和手工计数WBC、RBC、PLT的结果及配对t检验(表1)。

表1 7例血液分析仪和手工计数WBC、RBC、PLT的配对t检验

3 讨论

1)BC-3200血细胞分析仪的检测原理是电阻抗法：电阻抗原理又称库尔特原理，其内有一个充满导电性液体的小孔，它的脉冲是稳定的，当有细胞通过时，脉冲就会变化，它的振幅的大小反映细胞的大小，它的数量即细胞的数量[2]。其中2～35 fl为血小板，35～450 fl为白细胞，当有血小板聚集或存在大血小板且不被溶血素溶解时，仪器可误将聚集成团的血小板当作白细胞计数，因此就会出现白细胞计数偏高的现象[3]，进而引起血小板的假性偏低。

2)EDTA-K2抗凝已在1993年被ICSH(International Council for Standardization in Haematology，国际血液学标准委员会)推荐用作血常规检测的抗凝剂。它对血液中细胞形态和血小板聚集性几乎均无影响，然而在临床的广泛使用中，它偶尔会引起血小板的聚集，且这种聚集不易被溶血素破坏，因为溶血素的主要成分是阳离子表面活性剂，其作用于细胞中的磷脂，使之溶解后与蛋白分离[4]，从而引起血小板假性减低(PTCP)，至今未发现该现象的发生有何病理、生理意义，也与特殊药物的作用无关[5]。EDTA-K2诱导的血小板聚集可能与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关[6]。它可导致血小板活化，血小板形态发生变化，由正常的圆盘状变为圆球形，改变了血小板膜表面某种隐匿性抗原构象，与存在血浆中的自身抗体结合，激活细胞膜中的磷酸酯酶A2和磷脂酶C，使血小板膜磷脂水解并释放花生四烯酸、ADP、5-TH、胶原、凝血酶原、内源性钙离子等活性物质。这些物质能活化血小板纤维蛋白原受体，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团[7]。

3)对EDTA-K2抗凝血分别进行手工计数和麦瑞BC-3200血细胞分析仪计数，结果仪器法血小板计数明显低于手工法，仪器法白细胞计数明显高于手工法，差异均有显著性(P＜0.01)，而红细胞变化不大，差异无显著性(P＞0.05)。个别患者体外的EDTA-K2抗凝血在室温条件下发生EDTA依赖性凝集，血液分析仪对凝集体的结构不能辨别，而误以为是白细胞，所以造成血小板计数的偏低和白细胞计数的偏高。而EDTA-K2抗凝血涂片镜检可见大量聚集成堆的血小板，且多分布在片尾部。此时仪器所测的血小板计数和白细胞计数是错误的，应采取手工计数及镜检。

4)在我们平时的工作中经常会遇到血小板较低的情况，特别是低于50×109/L时，不仅要及时手工计数，还应该涂片观察细胞形态变化，确保检验结果的准确性。另外，采血的过程及血液和抗凝剂的比例都很重要，采血速度慢、多次穿刺和血液比例过高都可能引起血小板凝集，堵塞仪器而无法测得真实的结果，以上问题应该引起我们的注意，加强责任心，避免给病人的诊断和治疗带来不必要的麻烦，引起医疗纠纷。

[1]邢辉，吴健民.EDTA-K3依赖性血小板假性减少症分析[J].临床检验杂志，2004，22(4)：277.

[2]熊立凡，李树仁，主编.血液分析仪及临床应用[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2003.

[3]丛玉隆.血液分析仪中的几个问题[J].中华医学检验杂志，1994，17(6)：325.

[4]崔颖鸣.血细胞自动分析与溶血剂[J].国外医学临床生物化学与检验分册，2000，21(1)：29.

[5]BizzaroN.EDTA-dependent pseudothrombocytopenia;a clinical and epidemiological study of 11 case,with 10-year follow up[J].Am JH ematol,1995,50(2):103-109.

[6]BragnaniG,BianconciniG,Brogna R,etal.pseudothrom bocytopenia;clinical connent on 37 case[J].M inerva M ED,2001,92(1):13.

[7]李明，王超，鲁家才.EDTA依赖性血小板聚集导致血细胞计数误差分析[J].华中医学杂志，2004，28(4)：269.

2009-04-23)

1005-619X(2009)08-0749-02