免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比

熊同舟　刘春笋　蔡先强　等

摘要:当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。

关键词:猪瘟;免疫金标试纸检测;正向间接血凝试验

中图分类号:S852.5+2;S854.4+3文献标识码:A文章编号:1007-273X(2009)08-0027-01

猪瘟是威胁养猪业的主要疾病,对于猪瘟的控制目前主要还是依靠猪瘟疫苗的免疫预防,猪瘟疫苗免疫效果的好坏直接关系到全县猪瘟防疫的效果以及生猪感染压力的大小,也关系到我县畜牧养殖业的可持续健康发展[2]。猪场及农村散养户定期对猪瘟疫苗效果检测评估是十分必要的。目前,用于猪瘟疫苗免疫效果评估的方法很多,如何选择一种切合我县实际的检测方法是科学评估的首要问题。我们采用两种常用的评估方法(免疫金标试纸检测和正向间接血凝试验)对全县农村散养户的336份血清样品进行了猪瘟免疫效果平行对比检测试验[3],这对于以后我县动物疫病预防控制中心能够及时准确掌握生猪猪瘟免疫效果,具有非常深远的指导意义。

1材料与方法

1.1材料

被检样品:采自全县12个乡镇农村散养户不同日龄的猪,其中仔猪(20～45日龄)96份,生产母猪102份,肥猪(70～160日龄)138份。散养户提供的336份血清均为猪瘟免疫首免20日龄左右、二免在65日龄,免疫后18～20d所采的仔猪全血样品。

猪瘟正向间接血凝试剂盒(包括猪瘟正向间接血凝抗原、猪瘟稀释液、猪瘟阴、阳性血清)购自中国农业科学院兰州兽医研究所,试剂盒批号:20080812。

猪瘟抗体免疫金标试纸条,购自深圳市康百得生物科技有限公司,生产批号:20081020。

其他试验材料:96孔血凝板(110°V型),飞鸽牌台式离心机,精密移液器(5～50μL、20～200μL),微量振荡器。

1.2方法

将336份全血样品放入离心机离心,5min后吸取上层血清液,置于试管架上备用。在金标检测卡的椭圆形加样孔内加入2～3滴(50～100μL)待检猪血清。将检测卡平放在平面上,在室温下静置8～15min判定结果。加样后8～15min可与金标试纸附带的参照卡的色带滴度进行参考比较,当被检样品检测线(T)条带的色泽大于参照卡中猪瘟抗体效价1∶16 时,说明检测样品中猪瘟抗体的滴度较高,如果低于1∶16则表示被检猪的猪瘟抗体水平过低,应及时进行猪瘟疫苗接种。正向间接血凝试验操作顺序如下:加入稀释液→加被检血清→在血凝板上倍比稀释被检血清、阳性血清→加血凝抗原→振荡摇匀→37℃下静置1～2h→结果判定。以50%红血球出现凝集的血清最大稀释倍数为该血清的血凝效价。血凝效价达1∶16为免疫合格,1∶16以下为免疫不合格[4]。

2结果与分析

免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的检测结果对比情况见表1。

由表1得知:抗体金标检测仔猪猪瘟抗体效价达到保护线的为82%,正向间接血凝检测合格的为81%;金标抗体检测生产母猪免疫合格的为84%,正向间接血凝试验为86%;育肥猪金标检测抗体水平达到有效保护(1∶16)的为91%,正向间接血凝试验为91%。通过数据比较表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。

3讨论

(1)从上述试验中可以看出,在我县现有的疫病预防免疫程序中,总有一部分群体免疫不合格,造成这种情况的因素可能与基层兽医的技术、疫苗用量,疫苗质量等有关;也可能与广泛存在的猪繁殖与呼吸综合征、圆环病毒感染等破坏了猪的免疫系统,造成免疫抑制相关[5]。

(2)从操作方法上,免疫金标试纸条操作简便,更重要的是检测时间很短,使我们能及时做好疾病诊断及抗体监测。间接血凝试验是通过血球凝集程度来判断结果的,实验员的判断力不一样,就很有可能出现不同的结果,即便对于同一操作者,每次的试验判断结果都可能有一定的偏差。

(3)从经济成本上,免疫金标试纸检测也能体现出一定的优势,它能大量成批的检测,也能单独进行检测,且不造成浪费。而间接血凝所需抗原一经开启就必须一次用完,在检测量较小的情况下,就会造成很大的浪费。

4结论

综上所述,猪瘟抗体金标试纸检测法具有操作简便、结果直观、反应时间短的优势,非常符合我县的实际需要。乡镇兽医站、养殖场都可推广应用,对提高我县应对重大动物疫病时的应急反应能力将起到举足轻重的作用[6]。

参考文献:

[1]何启盖,陈焕春,吴斌,等.规模化猪场猪瘟、细小病毒、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析[J].中国预防兽医学报,2000,22(1):5-9.

[2]谢庆阁,翟中和.畜禽重大疫病免疫防制研究进展[M].北京:中国农业科技出版社1996.32-64.

[3]宣长和.猪病学[M].北京:中国农业科技出版社,1997.44-51.

[4]陆芹章,温和心,陈义祥,等.利用猪瘟间接血凝试验净化猪瘟的探讨[J].养猪大视野,2006(6):33-34.

[5]王大林,索绪峰,王建新,等.海南省规模化猪场猪瘟免疫抗体的检测与免疫效果分析[J].养猪,2005(5):32.

[6]郑世军.猪病免疫与防治技术[M].北京:北京农业大学出版社,1995.41-45.