ｈＭＬＨｌ、ｈＭＳＨ２及ＰＣＮＡ在宫颈癌组织中的表达及意义

苏　红　李　梅　王秀莹等

[摘要]目的：探讨宫颈癌中错配修复基因hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表达的关系及意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测68例宫颈癌中的bMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表达。结果：①宫颈癌中，hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白阳性表达率为57.35％、58.82％及72.06％。②在PCNA阳性表达和阴性表达的宫颈癌病例中，hMLHl阳性表达率分别为61.22％和47.37％，hMSI-12阳性表达率分别为67.35％和36.84％。PCNA与hMSH2表达呈正相关(P＜0.05)。结论：hMSH2可能通过与PCNA蛋白相互作用参与宫颈癌的发生。

[关键词]宫颈癌；hM_LHl；hMSH2；PCNA；免疫组织化学

[中图分类号] R737.3 [文献标识码]A [文章编号]1674-4721(2009]05(b)-011-02

宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，其发病机制目前仍不清楚。研究表明，由于体内外各种因素的刺激造成的DNA损伤是其发展的重要原因。人体细胞存在DNA错配修复(DNA mismatch repair,MMR)系统，错配修复功能的完整是细胞DNA准确复制和基因组稳定的基本保证。该功能缺失与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，但其在子宫颈癌发生中的作用尚不清楚。hMLHl和hMSH2是错配修复系统的2个重要成员。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen。PCNA)与细胞DNA合成密切相关。本研究通过免疫组织化学法检测68例宫颈癌的hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白表达，探讨宫颈癌中PCNA表达与hMLHl、hMSH2表达的关系及意义。

1资料与方法

1.1一般资料

选取大连妇产医院2000～2002年收治的68例宫颈癌手术病例。患者年龄为22～78岁，中位年龄40岁。所有标本均经4％中性甲醛固定，石蜡包埋，制成3～μm切片，HE染色，由两位有经验的病理医师进行病理学诊断。

1.2试剂与方法

采用免疫组织化学SP法染色，切片常规脱蜡水化，微波加热抗原修复，鼠抗人单克隆抗体hMLHl(1:50稀释，美国Zymed Laboratories公司，克隆系：14)、鼠抗人单克隆抗hhMSH2(1:250稀释，美国Zymed Laboratories公司，克隆系：FEll)、PCNA(1:400，克隆系：pc 10，美国NeoMarker公司)40cC孵育过夜，操作按SP试剂盒(北京中山生物技术有限公司)说明书进行。以PBS代替一抗作为阴性对照。选取已知阳性的切片作为阳性对照。

1.3结果判定

hMLHl、hMSH2以细胞核或细胞浆内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，PCNA以核内出现棕黄色颗粒细胞为阳性细胞，计数5个高倍视野或500个细胞。对hMLHl、hMSH2判定：阳性细胞数与实质细胞总数之比≥10％，判为阳性表达，否则为阴性表达。PCNA判定：阳性细胞数与实质细胞总数之比＞20％为阳性表达，否则为阴性表达。结果均由两位有经验的病理医师采用双盲法判定。

1.4统计学方法

采用)(2检验，应用SPSSl3.0软件对结果进行统计学分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白在宫颈癌中的表达

在宫颈癌中，hMLHl、hMSH2及PCNA蛋白阳性表达率分别为57.35％(39／68)、58.82％(40／68)及72.06％(49／68)，见图1、2。

2.2 PCNA与hMLHl、hMSH2蛋白在宫颈癌中的表达关系

在PCNA阳性表达与阴性表达的宫颈癌病例中，hMLHl阳性表达率分别为61.22％和47.37％，hMSH2阳性表达率分别为67.35％和36.84％。PCNA阳性表达病例中，hMLHl、hMSH2表达率均较高，但PCNA表达与hMLHl表达无显著相关关系(P＞0.05)。PCNA与hMSH2表达显著相关(P＜0.05)。见表1。

3讨论

MMR基因是高度保守的看家基因，其功能完整保证了DNA复制的高保真性。突变或启动子甲基化能够通过减少或抑制该类基因表达，使机体错配修复功能缺失，从而引起整个基因组的不稳定以至肿瘤发生。hMLHl、hMSH2是MMR系统的重要成员，其编码蛋白的主要功能是识别DNA错配并结合错配碱基，启动修复反应。许多恶性肿瘤的发生伴随着错配修复蛋白结构或功能的异常，常表现为hMLHl、hMSH2蛋白表达的减少或增多。如大肠癌，常出现因错配修复基因突变或甲基化引起的蛋白表达减少。但有些恶性肿瘤，却常出现hMLHl、hMSH2蛋白表达增多。本研究宫颈癌组织中，hMLHl、hMSH2蛋白阳性表达率为57.35％、58.82％，也有较高表达。

有学者认为增殖细胞核抗原在宫颈癌组织中其阳性率显著增高，肿瘤细胞过度增殖时会伴有DNA碱基错配增多，从而引起细胞错配修复蛋白合成代偿性增多。PCNA在细胞增殖的启动上起重要作用。不溶性PCNA较稳定，其量的变化与DNA合成一致，检测其在细胞中的表达，可作为评价细胞增殖状态的一个指标。

由于恶性细胞增殖旺盛，DNA复制频繁且紊乱。DNA复制过程中出现错配的概率大大增加，hMLHl、hMSH2蛋白代偿性的表达上调以启动错配修复反应进行。还有研究表明PCNA参与错配修复反应。本研究发现宫颈癌中PCNA与hMSH2表达呈正相关也支持上述观点，提示错配修复蛋白与PCNA相互作用在宫颈癌发生中起重要作用。