ＨＰＬＣ法测定冰黄软膏中盐酸小檗碱的含量

尹宁宁　林永强　徐丽华

【摘要】 目的 采用HPLC法测定冰黄软膏中盐酸小檗碱的含量，以更好地控制该制剂的质量。方法 采用DiamonsilC₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱分离黄连中盐酸小檗碱，以磷酸盐缓冲液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.05 mol/L庚烷磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0］-乙腈(67：33)，流速为：1 ml/min，检测波长为265 nm。结果 线性范围为0.0624~0.312μg。盐酸小檗碱的平均回收率为98.7%，RSD为1.48%。结论 试验方法操作简单，提取液的转移次数少，测定结果准确，可靠，重现性好。

【关键词】冰黄软膏；盐酸小檗碱；HPLC

冰黄软膏收载于地标升国标，标准号为：WS-10182(ZD-0182)-2002，由大黄、黄连、硫磺等药味组成。清热除湿，解毒化瘀。用于肺热血瘀所致寻常型痤疮，症见：皮疹红肿，或有脓疱结节，用手挤压有小米粒样白色脂栓排出，伴有颜面潮红，皮肤油腻，大便秘结，舌质红，苔薄黄，脉弦数。黄连为处方中主要药味，黄连苦寒，清热除湿作用较强。原标准中无盐酸小檗碱的含量测定项。目前，黄连中主要有效成分为盐酸小檗碱。中药软膏剂基质成分复杂，易干扰有效成分的提取，故在供试品制备过程中多需进行冷冻等脱基质处理，本文采用硅藻土与样品直接混合研磨，用甲醇索氏提取，提取液直接定容，减少提取液的转移次数，减少试验误差。对黄连中所含的有效成分盐酸小檗碱的含量进行测定。供试品色谱峰分离效果好，阴性对照无干扰，测定结果准确、重复性好，可用于有效控制制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-20A高效液相色谱仪。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：DiamonsilC₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：磷酸盐缓冲液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.05 mol/L庚烷磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0］-乙腈(67∶33)；流速：1 ml/min；检测波长：265 nm［1］。柱温：35℃。理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品9.75 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀(每1 ml含盐酸小檗碱15.6 μg的溶液)，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物约1 g，精密称定，加硅藻土3 g，研匀，定量转移至索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至无色，回收甲醇，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 干扰试验 按样品制备方法，制备不含黄连的阴性样品，照“2.3”项下操作，制得阴性样品溶液。进样10 μl，按以上色谱条件测定，结果阴性样品色谱图中，在与盐酸小檗碱对照品溶液及供试品中盐酸小檗碱相应保留时间处，无干扰峰出现。

2.5 线性关系的考察 精密吸取2.2项下对照品溶液4、8、12、16、20 μl，分别注入高效液相色谱仪，测其峰面积积分值，计算回归方程。回归方程：Y=142773X-23145，r=0.999 9。结果表明盐酸小檗碱进样量在0.0624~0.312 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取浓度为15.6 μg/ml的对照品溶液10 μl，按以上色谱条件连续进样5次，测定峰面积，结果RSD为0.37%。试验结果显示仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液在12 h内，按以上色谱条件进样5次，(0、2、4、8、12 h)，测定峰面积，结果RSD为1.02%。试验结果显示供试品溶液12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 按“2.3”项下的方法，按以上色谱条件测定，对060298的样品进行测定，共测定5份，测定含量RSD为0.52%，试验结果表明该方法重复性良好。

2.9 回收率试验 取样品约0.5 g(批号：060298，含量0.24 mg/g)，精密称定，共测定5份，加硅藻土3 g，精密加入甲醇(含盐酸小檗碱对照品0.022 mg/ml)5 ml，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按以上色谱条件测定峰面积，计算加样回收率，结果表1。试验结果表明该方法回收率良好 。

2.10 样品测定 照“2.3”项下方法，按以上色谱条件对三批样品进行测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 软膏剂中由于含有凡士林、液体石蜡等基质，这些基质在提取时会干扰有效成分的提取，有标准采用置冰箱中冷藏的方式进行脱腊处理。本文选用软膏与硅藻土混合均匀，用甲醇索氏提取，硅藻土可吸附软膏中的基质并充分分散软膏，使提取充分，甲醇提取液经浓缩后可直接定容。方法操作简单，重复性好，可最大限度的减少由方法所产生的误差。

3.2 采用流动相［2,3,4,5］：磷酸盐缓冲液［0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.05 mol/L庚烷磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0］-乙腈(67∶33)，对色谱柱的选择性小，多数品牌的C₁₈柱均适用，盐酸小檗碱的分离效果好，色谱峰峰形好，可减少试验过程中选择合适色谱柱所用的时间，提高试验效率。

参考文献

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