日照市亚I-O型口蹄疫疫苗免疫效果检测与分析报告

张永梅 李 霞 卢兵远 李 芬 李丰宜

摘要于2008年秋季进行了日照市亚I-O型口蹄疫疫苗免疫效果检测,结果表明,日照市牛亚I型口蹄疫和O型口蹄疫免疫合格率都达到80%以上;而猪O型口蹄疫免疫合格率偏低,刚达到农业部70%以上的要求。对猪O型口蹄疫免疫合格率偏低的原因进行了分析,建议要针对检测情况抓紧时间组织补免,确保免疫程度达到1 000%。

关键词猪O型口蹄疫;牛亚I型口蹄疫;牛O型口蹄疫;免疫效果;检测

中图分类号S858.28文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)08-0175-01

2008年11月,日照市秋季重大动物疫病防疫结束后,为及时对免疫效果进行检测,笔者按照《山东省2008年高致病性禽流感、口蹄疫等主要动物疫病监测方案》要求,对全市的种畜禽场、养殖场、活禽交易市场、猪屠宰场进行集中采样检测。随机抽查了16个场(户),采集血清样品232份,其中7个养猪场、6个奶牛场、3个屠宰场。

1检测方法

采用兰州兽医研究所研制的亚州I型口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒(生产批号:2008052802)、O型口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒(生产批号2008052801)进行检测。

2器材的准备

亚I-O型口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附试验检测试剂盒,5～50μL移液器:多道与单道各数把,37℃温箱,酶标仪,其他试验耗材。

3试验操作步骤

3.1包被固相

用包被缓冲液稀释兔抗血清至工作浓度,在ELISA板每孔加50μL。室温振荡30min,然后置湿盒中室温过夜。

3.2抗原-抗体(对照和待检血清)的预告结合(液相阻断)

各对照和待检血清在LB-ELISA中的布局,在第1行1～10孔加入不同样品,按12.5μL样品+87.5μL PBST工作液,按列倍比稀释。封板后室温振荡30min,然后置湿盒中4℃过夜。

3.3转移抗原-血清混合液

将包被的ELISA板取出,洗涤5次,扣干。将抗原-血清混合液反应板取出,室温放置20～30min。将抗原-血清混合液转移到ELISA板相应各孔中,每孔50μL,置37℃温箱1h。

3.4加检测抗体

将装有抗原—血清混合液的ELISA板取出,洗涤5次,扣干。以豚鼠抗血清稀释液将豚鼠抗血清稀释至工作浓度,混匀后每孔加50μL,置37℃温箱1h。

3.5加酶结合物

取出ELISA板,洗涤5次,扣干。以PBST工作液将酶结合物稀释至工作浓度,混匀后每孔加50μL,置37℃温箱1h。

3.6加底物溶液

取出ELISA板,洗涤5次,扣干。加入底物溶液,每孔加50mL,置37℃温箱15min。

3.7加终止液

如表1所示,每孔加50μL终止液,轻轻振荡混匀,在酶标仪上读数。

4检测结果

如表1所示,本次集中检测,共抽查了16个场户,采集血清样品232份。其中7个种猪场、3个屠宰场,采样105份,进行O型口蹄疫检测,合格81份,免疫合格率为77.1%;6个牛场,采样127份,进行O型口蹄疫检测,合格118份,免疫合格率为92.9%;进行亚I型检测,合格107份,免疫合格率为84.3%。

5检测结果分析

根据本次检测结果,日照市牛亚I型和O型口蹄疫免疫合格率都能达到80%以上;而猪O型口蹄疫免疫合格率偏低,刚达到农业部70%以上的要求,明显低于2007年,屠宰场的表现尤其明显。其主要原因可能有:①在秋防集中免疫过程中,4种强制免疫疫苗,有3种是猪用疫苗,3种疫苗的免疫必须间隔一定的时间;加上近几年来高致病性猪蓝耳病危害性已经引起了养殖场户的高度重视,猪蓝耳、猪瘟疫苗大都优先免疫,而将口蹄疫疫苗免疫拖后,免疫时间距离采样时间太短。②本次抽查加大了猪屠宰场的比重,而屠宰场猪的来源多是农村的散养户,其免疫密度低于养殖场。③奶牛场户的免疫质量较好,但免疫效果不平衡。目前,日照市注射的都是亚I-O型口蹄疫二联苗,但二者的免疫效果却不一样,O型疫苗的免疫效果明显好于亚I,可能是两毒株的免疫原性有差异或由于常期使用O型口蹄疫疫苗有关。另外,本次抽查的牛场除1个肉牛场外,其他都是奶牛场户,说明日照市奶牛场户的免疫质量比较好。

6建议

根据本次检测结果,日照市猪O型、牛亚I-O型口蹄疫免疫合格率虽然都能达到农业部70%以上的要求,但有关区县应针对各养殖场的检测情况抓紧时间组织补免,确保免疫密度达到100%,以达到重大动物疫病的防控效果。