尖顶羊肚菌菌丝培养研究

熊春菊 赵 琪 徐中志 程远辉

摘要 在不同培养基上研究pH值、温度、碳源、碳氮比对尖顶羊肚菌菌丝体生长的影响。结果表明:尖顶羊肚菌能在多种培养基上生长,菌丝体生长最适温度为22~25℃;pH值 4~6最适宜;对不同碳源的同化吸收各异,其中碳源以葡萄糖最佳;碳氮比以30～40∶1最佳。。

关键词尖顶羊肚菌;菌丝培养;温度;pH值;碳氮化

中图分类号Q939.14+9文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)08-0013-02

尖顶羊肚菌(Morchella spp.)属子囊菌亚门(Aseomycotina)盘菌纲(Discomycetes)盘菌目(Pezizales)尖顶羊肚菌科(Mor-chellaceae)尖顶羊肚菌属(Morchella),由于其菌盖是一个布满凹陷和棱脊的网状体,形状似羊胃的内壁而得名[1]。羊肚菌富含氨基酸和维生素,肉质脆嫩,风味独特,是食(药)用菌中的珍品之一,自古以来一直被奉为宴席上的美味佳肴[2]。我国市场上称作尖顶羊肚菌的种,一般分为羊肚菌(M. escul-enta)、尖顶羊肚菌(M. conica)、小羊肚菌(M. deliciosa)、粗柄羊肚菌(M. crassipes)、黑脉羊肚菌(M. angusticeps)和高羊肚菌(M. elata)[3]。目前,已有羊肚菌人工栽培成功的报道,且大都为尖顶羊肚菌,现对其菌丝生物学特性进行研究,以期为下一步的生产奠定基础。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1供试菌株。笔者于2008年4月16日在云南省玉龙县石头乡采得野生羊肚菌子实体,经昆明植物所杨祝良研究员鉴定为羊肚菌科羊肚菌属尖顶羊肚菌,通过组织和多孢分离获得母种。

1.1.2试验用品及仪器。试管、盐酸、氢氧化钠、酸碱滴定管、玻璃棒、pH试纸(用于调节和测定pH值);接种箱(内置消毒药品、接种工具)、超净工作台; LS—B50L型立式高压蒸气灭菌锅(上海医用核子仪器厂);We202型保温箱和302A型调温调湿箱(上海市实验仪器总厂产,用于恒温培养);物理天平、分析天平、华勃氏温湿度计、亚光牌自动温湿度仪等。

1.1.3供试培养基。基础培养基1:葡萄糖2.0%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.050%,琼脂2.0%,水1 000mL,pH自然。基础培养基2:葡萄糖2.0%,蛋白胨0.2%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸镁0.015%,琼脂2.0%,水1 000mL,pH自然。基础培养基3:葡萄糖2%,琼脂2.0%,水1 000mL,pH自然。基础培养基4:葡萄糖2%,蛋白胨0.2%,磷酸二氢钾0.03%,硫酸镁0.015%,琼脂1.5%,水1 000mL,pH自然。基础培养基5:马铃薯(去皮)20%,葡萄糖2.0%,琼脂2.0%,蛋白胨0.4%,磷酸二氢钾0.03%,水1 000mL,pH自然。

1.2方法

经组织分离后转接的尖顶羊肚菌菌丝生长良好,菌落圆形,菌丝疏松,绒毛状,边缘整齐,气生菌丝不强,爬壁能力强。分别针对尖顶羊肚菌菌丝生长和营养(碳源、碳氮比)、pH值、温度的关系设计如下试验。

1.2.1碳源试验。以基础培养基2中20g的葡萄糖的含碳量为标准,分别用相等含碳量的果糖、蔗糖、麦芽糖代替基础培养基2中的葡萄糖,常规方法灭菌,接入活化菌丝,置于常温下培养。2d后于每天14时观察1次(下同),记录每管每天菌丝的生长量,直到菌丝长满试管为止。

1.2.2碳氮比试验。在基础培养基1中添加不同重量的蛋白胨(蛋白胨含碳量忽略不计)配成碳氮比为10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1的培养基,常规方法灭菌,接入活化菌丝,置于常温下培养。观察记录每管每天菌丝的生长量,直到菌丝长满试管为止。

1.2.3pH值试验。在基础培养基5中,用1mol/L盐酸和1mol/L氢氧化钠调节培养基pH值至3、4、5、6、7、8,常规方法灭菌后测定培养基的pH值,无菌条件下接入活化菌丝,置于常温下培养。观察记录每管每天菌丝的生长量和菌丝长势,直到菌丝长满试管为止。

1.2.4温度试验。在基础培养基4中接入活化菌丝,分别置于19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃恒温下,每天14时观测各处理菌丝的生长量,直到菌丝长满试管为止。

1.3数据处理

对试验数据进行统计分析,用LSD比较差异显著性。

2 结果与分析

2.1碳源对菌丝生长的影响

以葡萄糖为碳源作培养基时,菌丝平均日生长量为0.89 cm;菌落完整,菌丝洁白、浓密、健壮。以果糖为碳源作培养基时,菌丝平均日生长量为0.92cm;菌落不完整,菌丝洁白、稀疏。以蔗糖为碳源作培养基时,菌丝平均日生长量为0.95 cm;菌落完整,菌丝洁白、较浓密。以麦芽糖为碳源作培养基时,菌丝平均日生长量为0.69cm;菌落不完整,菌丝洁白、稀疏(见表1)。由菌丝生长速度和菌丝长势可知,尖顶羊肚菌菌丝生长在不同的碳源下生长速度不同。葡萄糖是尖顶羊肚菌菌丝生长的最好碳源,蔗糖次之,果糖一般,麦芽糖不宜作尖顶羊肚菌菌丝生长的碳源。

进行方差分析,结果表明:F=4.71>F0.05=4.35,故碳源试验中4种碳源存在显著差异(见表2)。经多重比较,LSD=0.215,麦芽糖与果糖、蔗糖水平差异显著,麦芽糖与葡萄糖水平差异不显著,葡萄糖、果糖、蔗糖水平差异不显著(见表3)。

2.2碳氮比对菌丝生长的影响

在尖顶羊肚菌的碳氮比试验基础培养基中,比较不同碳氮化对尖顶羊肚菌菌丝生长的影响。由表4可知,10~50∶1均可以使尖顶羊肚菌菌丝生长,但碳氮比为30~40∶1时,尖顶羊肚菌菌丝的日均生长量最大,分别为0.85cm和0.89cm。经多重比较,LSD=0.156,10∶1与其他4种水平差异显著,其他4种之间水平差异不显著(见表5)。

2.3pH值对菌丝生长的影响

由表6可知,pH值3~8时菌丝均能生长,pH值4~6时菌丝生长速度最快。经多重比较,LSD=0.152 9,pH值为4和5;3和6;3和7之间不存在差异显著性,其他之间差异性显著(见表7)。

2.4温度对尖顶羊肚菌菌丝生长的影响

由表8可知,在22~25℃时生长速度无显著差异,其中在25℃时菌丝生长速度最快,为0.91cm/d。经多重比较,LSD=0.069,22~25℃间菌丝生长速度无显著差异,与其他水平之间差异显著(见表9)。

3讨论

试验表明,温度对尖顶羊肚菌菌丝生长的影响比较明显,其最适碳源是葡萄糖,这是根据菌丝生长速度和长势综合所得。其中,葡萄糖与果糖是同分异构体,麦芽糖与蔗糖是同分异构体。笔者推断菌丝的生长与碳源本身含碳量无关,与结构有关。尖顶羊肚菌菌丝在20~50∶1的培养基中菌丝生长量无显著差异,但在30~40∶1中菌丝生长速度最快,菌落完整,菌丝洁白浓密,健壮整齐。因此,笔者认为尖顶羊肚菌适宜生长的培养基碳氮比为30~40∶1[4]。

4参考文献

[1] 卯晓岚.中国大型真菌[M].郑州:河南科学技术出版社,2000.

[2] 邹方伦,潘高潮,周庆珍.尖顶羊肚菌种类、生态及成分的初步研究[J].贵州农业科学,1996,24(1):29-32.

[3] 兰进,曹文芩,徐锦堂.中国尖顶羊肚菌属真菌资源[J].资源科学,1999,21(2):56-61.

[4] 董爱荣,吴庆郁,何力,等.羊肚菌的生物学特性[J].东北林业大学学报,2002,30(4):28-30.