猪副嗜血杆菌的综合防治

李庆德,唐延平,褚贵芳

摘要:副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis.HPS)引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,该病已经成为全球范围内影响养猪业的一种重要细菌性疾病。对副猪嗜血杆菌的病原学、流行病学、临床表现及诊治措施进行了阐述,为养殖户对于该病的诊断、预防和控制提供一定的参考。

关键词:副猪嗜血杆菌;诊断;综合防治

中图分类号:S858.28文献标识码:B文章编号:1007-273X(2009)12-0026-02

副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis.HPS)又称格拉泽氏病、猪纤维素性浆膜炎和关节炎,病原为副猪嗜血杆菌,该病主要危害1～28周龄的哺乳仔猪、保育仔猪和生长猪,主要引起猪的多发性浆膜炎、多发性关节炎、肺炎、胸膜炎等,发病率一般在10%～15%,严重时死亡率可达到50%以上[1,2]。

HPS是猪鼻黏膜常在菌,主要通过空气传播,猪群受应激会零星暴发该病。近年来,特别是在受到伪狂犬病毒、蓝耳病病毒、圆环病毒、支原体等感染后免疫功能下降时,常造成幼猪短期内大批发病和死亡,生长发育严重受阻,对大规模高密度的养猪业危害日益严重。

1病原

1910年Glasser首次报道一种革兰氏阴性的细菌,能够引起猪的纤维蛋白化脓性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。1960年Leece证实该菌生长不需要X因子,将其命名为HPS。该菌呈革兰氏阴性,在显微镜下形态不一,由杆状到球杆状,0.5μm×(1.5～2.0)μm,体外培养需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD),在5%马血琼脂平板上(加NAD),37℃培养24～48h,生长为边缘整齐、小而透明的不溶血菌落;在巧克力琼脂平板上生长良好,在划线接种有葡萄球菌的血平板上24h后,呈卫星生长(CAMP现象)。

HPS的血清型很多,到目前为止,己确定有15个血清型,其中血清型4、5、13最为常见(占70%以上)[3,4]。血清型1、5、10、12、13、14为高毒力致病株;血清型2、4、15为中等毒力致病株;血清型8为弱毒力;血清型3、6、7、9、11证明与临床症状无关。外膜蛋白(OMP)与HPS的毒力有关,Miniats(1991)指出不同血清型的菌株抗原性不同,毒力和免疫保护作用成正相关,OMP具有较强的免疫原性。

2流行病学

HPS是猪上呼吸道的常在菌,能从健康动物的鼻腔、鼻分泌物、气管和扁桃体中分离到,是一种典行的“机会主义”病原。HPS只感染猪,有很强的宿主特异性,主要影响哺乳仔猪及4月龄以内的保育猪和生长育肥猪,其中以5～8周龄的保育猪更为多见。病菌寄居于感染猪的呼吸道,该病在保育阶段发生流行同母源抗体水平下降和饲养管理因素有关,由猪只的免疫状态、应激反应和侵入菌数等所决定。如拥挤、转群、换料、长途运输、天气骤冷等都可引起急性暴发,发病率和死亡率也较高。耐过的猪生长发育不良,增重缓慢,常成为僵猪。

病猪和带菌猪是该病的主要传染源,该病的主要传播途径是通过排泄物、空气、猪与猪之间的接触,未免疫的猪场或特别健康的猪群最容易受到侵袭。该病常与猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒、猪流感病毒和猪呼吸道冠状病毒引起的病毒病及支原体病并发。研究表明患猪繁殖与呼吸综合征的猪肺中,HPS的检出率为51.2%。

3临床症状

3.1临床表现

急性病例,往往首先发生于膘情良好的猪,病猪发热、体温一般为39~40℃,个别病猪可达到41~42℃,呼吸困难、腹式呼吸、耳稍发紫,食欲下降或不食,眼睑皮下水肿,行走缓慢或不愿站立,腕关节、跗关节肿大,有的还伴有腹泻,腹泻物为黄色、绿色。有时也会无明显症状而突然死亡,急性死亡者通常由于脓毒血症引起。慢性病例多见于保育猪,主要表现为食欲下降、咳嗽、呼吸困难、被毛粗乱,四肢无力或跋行,生长不良。

HPS很容易与关节炎型猪链球菌病混淆而误诊,其区别在于HPS病有咳嗽、呼吸困难等症状,而关节炎型猪链球菌病无此症状。

3.2病理剖检[5]

尸体剖检主要表现为胸膜炎、腹膜炎、脑膜炎、心包炎、关节炎。多见纤维素性或浆液性渗出,胸水、腹水增多,有时肺脏发生粘连、肿胀、出血、瘀血;胸腔内有多量的淡红色液体及纤维素性渗出物凝块,心包膜与心脏粘连,病变明显;全身淋巴结肿大,肠系膜淋巴结肿大,小肠卡他性肠炎、肝肿大,表面有灰白色坏死灶或小坑,大小如豆粒,脾表面有出血点,边缘梗死,肾脏有少量针尖大出血点。

4检测

4.1细菌分离培养

HPS的生长依赖NAD,取病猪的心包液、肺、关节腔内容物接种于鲜血琼脂平面或者补充NAD的PPLO肉汤,置37℃培养24～48h,不出现溶血现象。挑取菌落,进行显微染色观察,均见到革兰氏阴性的细小杆菌,以纤细杆状者居多,个别呈两极染色的球杆状,间有长而弯细状菌体,菌体形态表现明显的多形性。

4.2血清学检测

补体凝集试验(CF)、间接血凝(IHA)以及ELISA技术己应用于抗体检测。王艳等[6]使用HPS全菌体建立了其抗体检测的间接ELISA方法,该方法特异性和重复性较好。补体凝集试验,相同的特异性抗体滴度在攻毒后得到一致的证实,但是发现各血清型之间有交叉反应。

4.3培养特性试验及生化试验[7]

该菌株在生化反应中,只发酵葡萄糖和蔗糖,吲哚试验和脲酶试验阴性。将分离纯化的细菌与葡萄球菌共同接种培养可形成卫星现象,在血平板37℃培养不出现溶血现象。细菌在高压巧克力琼脂平板上生长发育良好,而在普通巧克力琼脂平板生长不良。

4.4分子生物学技术的应用

冼琼珍等[8]在细菌分离培养基础上,通过PCR反应成功扩增出HPS 16S小亚单位rRNA长约822bp的特异基因片段,但在病料上直接进行PCR鉴定有待进一步研究。蔡旭旺等[9]利用PCR技术进行了HPS的鉴定和血清学分型。随着现代生物技术的发展,蛋白质多态性分析技术[10]、限制性酶切片断长度多态性分析技术[11]和PCR技术等应用于HPS的分型鉴定。

5防治

目前,HPS病发生呈递增趋势[12],且以多发性浆膜炎、关节炎、死亡率攀升为特征,影响猪生产的各个阶段。

5.1消除诱因

饲养管理不到位、环境卫生把关不严、生物安全措施不得力、气候突变、运输应激等因素是造成发生该病的主要诱因。加强饲养管理与环境消毒,采取相关措施避免或弱化天气及运输等应激,“分级饲养”断奶后的保育猪,发现病猪及时隔离。各猪场可根据自己平时的用药情况,在养猪生产的各个关键环节投以敏感药物及一些抗应激的药物如维生素C等,防止该病的发生。HPS病的有效防制是一项系统工程,主要病毒性疾病的免疫必不可少,又要注意改善猪群饲养管理,同时加强猪群进行常规的预防保健。

5.2治疗

HPS有15种血清型,并且有明显的地方性特征,疫苗免疫在不同血清型之间的交叉保护率很低,疫苗的保护作用仅限于同种血清型的病原菌,因此商品疫苗的保护效果各猪场反映不一。许多猪场在发病严重时,使用含多个血清型和菌株的疫苗或自家苗进行控制临床上有一定效果。一旦发生该病,及时隔离病猪,采集样本送检进行药敏试验,科学使用抗菌素,进行全群非口服性药物性预防。常选用青霉素治疗,另外氨苄青霉素、氟喹诺酮类、头孢菌素、庆大霉素和增效磺胺类药物,也可用于治疗[13]。

5.3注意事项

5.3.1免疫抑制副嗜血杆菌引起的循环衰竭,是造成免疫应答降低的一个重要原因。猪发病后,高热不退(41.5℃以上),一些弱毒苗(如猪瘟、伪狂犬疫苗)在体内无法定植,也会造成免疫失败。大量使用免疫增强剂(如黄芪多糖、左旋咪唑)不能够改善这种免疫失败现象;控制副嗜血杆菌后免疫失败现象可得到明显的改善。

5.3.2合理使用抗生素副嗜血杆菌的耐药性产生快,大剂量无计划的使用抗生素,会促使副嗜血杆菌的进化,使环境净化难度大大增加,疾病流行更加严重。因此应根据需要合理使用抗生素。

参考文献:

[1]OLIVEIRA S,BLACKALL P J,PIJOAN C. Characterization of the diversity of Haemophilus parasuis field isolates by use of serotyping and genotyping[J]. Am J Vet Res,2003,64(4): 435-442.

[2]DEL RIO M L, GUTIERREZ C B, RODRIGUEZ FERRI EF. Value of indirect hemagglutination and coagglutination tests for serotyping Haemophilus parasuis[J]. J Clin Microbiol,2003, 41(2): 880-882.

[3][美]斯特劳.赵德明,张中秋,等,译. 猪病学(第8版)[M]. 北京:中国农业大学出版社,1998.407-416.

[4]张海花,童富淡,朱家新. 副猪嗜血杆菌分型方法的研究进展[J]. 中国兽医学报,2006,26(4):454-455.

[5]尹秀凤,张书霞,王 艳,等. 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察[J].中国兽医学报,2007,27(1):91-93.

[6]王艳,夏万田,柏坤桃. 副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 畜牧与兽医,2006,38(3):5-7.

[7]马增军,芮萍,杨宗泽,等. 副猪嗜血杆菌主要生物学特性测定[J].黑龙江畜牧兽医,2005(1):91-92.

[8]冼琼珍,黄耿森,王淑敏,等. 副猪嗜血杆菌的分离鉴定[J]. 中国兽医杂志,2006,42(3):27-29.

[9]蔡旭旺,刘正飞,陈焕春,等.副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定[J].华中农业大学学报,2005,24(1):55-58.

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[11]SMART N L,HURNIK D,MACINNES J I. An investigation of enzootic Glasser disease in a specific pathogen-free grower-finisher facility using restriction endonuclease analysis[J].Can Vet,1993,34:487-490.

[12]尹秀凤,姜平,邓雨修,等.副猪嗜血杆菌的分离与鉴定[J].畜牧与兽医,2004,36(7):6-8.

[13]高丰,罗毅,成军.猪副嗜血杆菌感染的诊断与防治[J].动物医学进展,2002,23(6):101-103.