ＨＰＬＣ法测定安乐片中２，３，５，４′－四羟基二苯乙烯２－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的含量

李秋云　张　利　周建平

摘 要：目的：建立安乐片中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件：PhenomenxC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；乙腈-水（20∶80）为流动相；流速1.0mL•min-1；检测波长320nm；进样量10μL；柱温25℃。结果：2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.05475～0.438μg范围内，其峰面积值与进样量（μg）有良好的线性关系，r=0.9996，平均加样回收率为97.1%，RSD为1.3%（n=6）。结论：该测定方法快速简便，可用于安乐片的质量控制。

关键词：安乐片；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷；HPLC

中图分类号：R914文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0039-02

安乐片由柴胡、当归、川芎、首乌藤等八味药材经提取加工成的中药制剂，具有舒肝解郁、定惊安神的功效，用于精神抑郁、惊恐失眠、胸闷不适、纳少神疲，对神经官能症、更年期综合症及小儿夜啼、磨牙等症状者亦可使用［1］。为了有效控制该制剂的质量，笔者采用高效液相色谱法测定其中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，结果显示该方法简便，精密度好，重复性好，可用于本制剂的质量控制。

1 仪器和试药

1.1 仪器

KQ-2500超声清洗仪（昆山检测仪器厂），BP210D电子分析天平（德国塞多利斯），SSI高效液相色谱仪（美国SSI公司），SSI P4000泵，SSI 500 UV/Vis检测器，10μL定量环，色谱柱：Phenomenx C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，HW-2000色谱工作站（千谱软件有限公司）。

1.2 试药

2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品（批号：0844-200003，供含量测定用），购自中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯（西安化学试剂厂）；安乐片样品为自制剂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（21∶79）；流速1.0mL•min-1；检测波长320nm；柱温25℃；进样量10μL。

2.2 对照品溶液的制备

取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成25μg•mL-1的溶液，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取本品内容物10g，研细，取约0.7g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40KHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方比例及生产制备方法，自制不含首乌藤药材的阴性样品，然后按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.5 系统适用性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图，结果2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷色谱峰与其它杂质峰得到较好的分离，分离度均大于1.5，阴性对照无干扰，色谱图见图1。

2.6 线性关系考察

取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品，按对照品溶液制备方法，分别配制成不同浓度的对照品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归分析，得回归方程为：y=3958186.2x-38114.7，r=0.9996。结果表明，2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.05475～0.438μg范围内，其峰面积值与进样量有良好的线性关系。

2.7 精密度试验

取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，重复进样5次，记录2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积，结果RSD为0.46％。

2.8 稳定性试验

取同一份供试品溶液，在上述色谱条件下，分别在0，1，2，3，6和8h进样，测定峰面积值，结果表明供试品溶液在8h内稳定。

2.9 重复性试验

取同一批样品，按2.3项供试品溶液的制备方法，制备5份供试品溶液，分别测定其中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，结果RSD为0.87%，表明本方法重复性良好。

2.10 回收率试验

取已知含量的样品适量，研细，取6份，每份约0.35g，分别精密称定，分别在其中精密加入一定量的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法处理，即得加样回收供试品溶液。在上述色谱条件下，测定加样回收供试品溶液中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。计算2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷加样回收率，结果见表1。结果表明，本品加样回收率良好。

2.11 样品含量测定

取三批样品，按上述方法测定其中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，测定结果见表2。

3 讨论

3.1 含量测定指标的选择

安乐片收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第二册，其质量标准中无含量测定，为了有效控制本品质量，笔者选择处方中首乌藤中的主要成分2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行了研究，参考有关文献资料［2］，建立高效液相色谱法测定本品中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法，具有分离效果好、灵敏高等优点，故将首乌藤中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷作为控制本品质量的指标成分。

3.2 提取方法的考察

曾用甲醇、乙醇和稀乙醇提取样品，结果用甲醇所提取的供试品溶液，杂质较少，峰形较好，分离度高，故采用甲醇为样品的提取溶剂。

参考文献：

［1］ 中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准［S］.中药成方制剂（第二册）.北京：人民卫生出版社，1990：104.

［2］ 廖海民，胡正海，贺定翔.制首乌中二苯乙烯苷含量的HPLC测定［J］.西北药学杂志，2006，21(1)：3-4.

（责任编辑：姜付平）