ＨＰＬＣ法测定蒙药查干－扫日劳－４汤中金丝桃苷的含量

苏日塔拉图　许　良　白呼和　龚翠琴

（1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028042；

2.内蒙古民族大学 化学化工学院，内蒙古 通辽 028042;

3.内蒙古民族大学 蒙医药研究中心，内蒙古 通辽 028042）お

摘 要：目的：测定蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷的含量。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定。色谱柱：symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；检测波长：363nm；流速：0.5mL•min-1。结果：金丝桃苷在0.125～1.25μg范围内具有良好的线性关系，平均加样回收率为98.18%，RSD=1.62%。结论：该方法具有较高的准确度和精密度，重复性良好，可作为蒙药查干-扫日劳-4汤中金丝桃苷的含量测定方法。

关键词：HPLC法；查干-扫日劳-4汤；金丝桃苷

中图分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）03-0025-02

查干-扫日劳-4汤是蒙医临床上常用的蒙药之一，被《内蒙古蒙成药标准》收载^[1]。在临床上常用于清热、止咳、祛痰。用于肺热、咳嗽、多痰、胸背刺痛等症。由北沙参、甘草、紫草茸、连翘、拳参组成^[1]。该药的薄层鉴别法研究已有报道^[2]。但其含量测定方法尚未建立。金丝桃苷为处方中连翘的主要药效成分之一。课题组对处方中金丝桃苷含量测定方法进行研究，建立了高效液相色谱测定方法^[3-6]。此方法简便，可靠，可用于该蒙药中金丝桃苷的含量测定报道如下。

1 仪器与试药

LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），N3000色谱工作站，电子天平（上海FA2004），SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器（南京安铎贸易有限公司），KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），数字式恒温水箱（中外合资深圳天南海北有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市永大化学试剂厂），蒸馏水（自制），乙醇、冰醋酸（分析纯，天津市永大化学试剂厂），金丝桃苷对照品（中国药品生物制品检定所），查干-扫日劳-4汤（内蒙古库伦蒙药厂，批号：20080109，20080420，20080224）。

2 溶液的制备

2.1 对照品溶液的制备

精密称取金丝桃苷标准样品6.25mg，置于25mL容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，超声处理，摇匀，得浓度为0.25mg•mL-1的含金丝桃苷对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取蒙药查干-扫日劳-4汤0.2g，置于具塞小三角烧瓶中，加50%乙醇20mL，超声处理35min，冷却，过滤，在25mL容量瓶中定容。进样时经0.45μm微孔滤膜滤过处理。

3 色谱条件

色谱柱：Symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；流速为0.5mL•min-1；柱温25℃；检测波长：363nm；进样量：10μL。

4 系统适用性试验

理论塔板数按金丝桃苷计算不低于6400，金丝桃苷与相邻色谱峰之间的分离度大于1.53，拖尾因子1.01。在以上色谱条件下，金丝桃苷对照品和查干-扫日劳-4汤供试品溶液的色谱图见图1和图2。

5 线性关系考察

取对照品溶液（0.25mg•mL-1）1mL，用甲醇稀释一倍，在上述色谱条件下，精密量取已稀释的对照品溶液（0.125mg•mL-1）1，2，4，6，8，10μL进样，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，进样量（W）为横坐标，进行线性回归。得回归方程：A=1.62×106-3.66×104W，r=0.9998，表明金丝桃苷在0.125～1.25μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。回归曲线见图3：

6 重复性与稳定性试验

取批号为（20080109）的样品按前述(2.2项)供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果RSD=1.37%，重复性较好;取同一份查干-扫日劳-4汤供试品溶液，按上述色谱条件，分别在1h、2h、4h、8h、12h进样测定，RSD=1.98%，表明供试品溶液中金丝桃苷至少在12h内稳定。

7 精密度试验

精密吸取金丝桃苷对照品溶液（0.125mg•mL-1）10μL，重复进样5次，结果金丝桃苷峰面积RSD为1.53%，表明该方法精密度良好。

8 加样回收率试验

精密量取已知含量的查干-扫日劳-4汤样品（批号：20080224，含量为3.102mg•g-1）0.2g共6份，分别加入金丝桃苷对照品溶液1mL和1.5mL（浓度：0.25mg•mL-1），照前述(2.2项)供试品溶液的制备方法制备样品，测定，计算回收率，结果见表1。

9 样品测定

分别精密称取3份样品溶液各0.2g，按前述(2.2项)供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，计算金丝桃苷的含量，结果见表2。

10 讨论

本实验分别用乙醇回流法和乙醇超声提取法提取样品中金丝桃苷，比较其提取率。结果表明，超声波提取法的提取率明显高于回流提取法。对超声提取时间的考察试验结果显示，超声35min足以提取样品中的金丝桃苷。流动相选择中发现，虽然甲醇-水的流动项条件下能够使得金丝桃苷的色谱峰得到分离，但是为了改善峰形，有必要在流动相中加入适量的冰醋酸。本实验中当流动相比例为甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）时得到理想的分离度和峰形。

参考文献：

［1］ 内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准［M］.赤峰：内蒙古科学技术出版社，1984.

［2］ 韩春平，王青虎，敖日布.蒙成药查干-扫日劳-4汤的薄层色谱鉴别研究［J］.时珍国医国药，1999，10（11）：835-836.

［3］ 石瑞平，周庆英，陈兴菊.不同生长期山楂叶中黄酮类有效成分的含量测定［J］.药品检测，2002，11（7）：55-56.

［4］ 许乾丽，熊慧林，茅向军.黔产3种金丝桃属植物药中金丝桃苷的含量测定［J］.药物分析杂志，2003，23（6）：414-416.

［5］ 李标，张锴，曹文丁，等.高效液相色谱法测定山楂叶中金丝桃苷的含量［J］.时珍国医国药，2003，12（12）：37-38.

［6］ 李月，程岚，康廷国.高效液相色谱法测定山楂叶提取物中金丝桃苷的含量［J］.时珍国医国药，2006，17（3）：372-373.

（责任编辑：陈涌涛）