禽流感的诊断与防控措施

王艳，陶双能，杨菲菲

武汉现代农业教育中心/武汉市农业学校，武汉 430043

禽流感在家禽、野禽和人均有发生，严重危害养禽业和人的生命健康安全。禽流感由A 型流感病毒引起，发病禽可表现出亚临床症状、呼吸道症状、消化道症状、神经症状、产蛋量下降、急性出血性症状及隐性感染。在家禽中对鸡和火鸡危害最为严重。禽流感病毒自从被发现起，H5 亚型与H7亚型的毒株一直在世界范围内的鸡群中流行[1]。禽流感病毒可传染给人，并造成死亡，据统计[2]，人感染高致病性禽流感H5N1 的死亡率接近50%；人感染H7N9约1 500例，死亡约600例；感染H5N6约80例，死亡约30 例。2022 年以来，禽流感又席卷了全球五大洲50余个国家，全球染疫或扑杀的禽类已超过2 亿只，受疫情影响最严重的美国，扑杀了5 800多万只禽类，损失约6.61 亿美元。在柬埔寨发生了2例由H5N1引发的人类感染病例，其中1例死亡。

1 病原学

流感病毒属于正黏病毒科，分为A、B、C 三型。A型流感病毒可感染人、禽和许多其他种属的动物，B 型和C 型主要感染人。根据流感病毒的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性差异，将A 型流感病毒分为不同的亚型，目前HA 发现16 个亚型，NA发现9个亚型，不同的HA和NA之间无交叉反应[3]。根据禽流感病毒毒力不同，分为强毒株（速发型）、中强毒株（中发型）和弱毒或无毒株（缓发型）[4]，引起高致病性禽流感的主要是H5 和H7 亚型。禽流感病毒重组和变异性强，且不同的H 抗原和N 抗原之间无交叉保护，给该病的防控增加了难度。大鼠、小鼠、兔、水貂、雪貂等都可感染，人也可感染[5]。禽流感病毒耐干燥、低温，不耐热，对紫外线耐受力差，对常用消毒药敏感。在自然条件下，存在于病鸡鼻腔分泌物和粪便中的禽流感病毒，由于受到有机物保护，抵抗力较强。

2 流行病学

禽流感呈世界性分布，家禽、野禽、鸟类都可感染。对禽流感病毒易感性最高的禽类是鸡和火鸡，其次是珠鸡、野鸡、孔雀，哺乳动物和人也可感染。隐性带毒或发病的动物，野生水禽，迁徙的鸟类都可成为传染源，病禽的分泌物、排泄物和尸体等污染饮水、饲料及用具，通过直接接触和间接接触感染。主要的感染途径是消化道和呼吸道，也可通过损伤的皮肤和黏膜感染，吸血昆虫和饲养人员也可传播病毒；发病率和死亡率与毒株毒力强弱、禽类易感性、年龄、性别、饲养管理条件、环境等因素有关。禽流感在寒冷季节及天气骤变时多发。

3 症 状

禽流感潜伏期从数小时到几天不等，潜伏期长短与病毒毒力强弱、感染强度、家禽种类、传播途径有关。该病症状与感染禽的种类、性别、年龄、毒株毒力强弱、混合感染或继发感染情况及环境因素有关。高致病性禽流感毒株感染的病禽往往表现为最急性型和急性型，最急性型病例看不到明显症状而突然死亡，死亡率接近100%；急性型病例体温升高，颜面部水肿，角质鳞片出血，咳嗽、喷嚏、呼吸困难、啰音、冠和肉髯发绀、腹泻和神经紊乱等，蛋鸡停止产蛋，有的病例甚至失明，病程一般2～3 d，致死率可达100%[6]。低致病性禽流感病毒感染的病禽，出现典型的呼吸道症状，如咳嗽、喷嚏、流泪、流涕和鼻窦炎，蛋鸡产蛋量和蛋的品质下降，产软壳蛋、砂壳蛋、畸形蛋，种蛋孵化率下降，大肠杆菌和博德特氏菌继发感染时，临床症状较严重[7]。部分蛋鸡出现急性肾衰竭和内脏痛风，在没有继发细菌或病毒感染的情况下，发病率及死亡率会降低。

4 病理变化

病禽感染毒株毒力、病程长短、禽的种类不同，病理变化也不同。死于高致病性禽流感的家禽，脑、皮肤及内脏器官坏死，表现充血、出血、渗出和坏死变化，病鸡颜面部水肿，冠和肉髯肿大，鸡冠坏死和出血，心脏、肺、脑、脾出血，心脏、肝、肾、脾及肺有坏死。死于低致病性禽流感的家禽，主要表现为泌尿生殖系统受到侵害，输卵管水肿，管腔内有黏性分泌物，卵巢退化、出血和卵子变形、破裂及卵黄性腹膜炎，气管黏膜水肿，有数量不等的浆液性或干酪样渗出物，气囊炎，腺胃乳头和肠黏膜出血。

5 诊 断

根据流行病学、临床症状和病理变化可做初步诊断，禽流感的确诊主要根据病毒的分离和鉴定，在我国，高致病性禽流感必须由指定实验室开展分离和鉴定工作，诊断主要依据2020 年颁布实施的《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936—2020）国家标准[2]。

5.1 临床诊断

根据流行病学、临床症状及病理剖检结果可做初步诊断。

5.2 实验室诊断

1）病毒分离、鉴定。禽流感病毒存在于病死禽的所有组织、分泌物和排泄物中。采集病料后，按照生物安全要求进行包装，防止病原泄露。将采集的病料进行处理（混合，研磨、离心，取上清液，加入双抗），将处理后的上清液接种于SPF 鸡胚或流感病毒阴性鸡胚，在37 ℃的条件下孵化3～7 d，收集48～96 h 的胚液，测定血凝活性。若检测样本血凝活性为阴性，用尿囊液盲传2～5代，若血凝活性仍为阴性，则判定为禽流感病毒阴性；若血凝活性为阳性，则要用新城疫病毒抗血清进行血凝抑制试验，排除新城疫病毒感染的可能性。如果新城疫病毒抗血清血凝抑制试验为阴性，下一步用血清学方法检测特异性抗原，最后用血凝素抗血清和神经氨酸酶抗血清进行血凝抑制试验，来判定禽流感病毒H亚型和N亚型。

2）血清学检测。血清学诊断方法较多，可用的有血凝试验、血凝抑制试验、琼脂凝胶扩散试验、病毒中和试验、乳胶凝集试验、免疫胶体金试验、酶联免疫吸附试验和免疫组化试验等。

3）病毒核酸检测。目前，常用的有RT–PCR（反转录–聚合酶链反应）、荧光RT–PCR 技术[2]，结合电泳技术进行诊断。该方法的特点是快速，灵敏度高，特异性强，准确性高。

5.3 鉴别诊断

禽流感要与新城疫、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、传染性鼻炎及慢性呼吸道疾病进行鉴别诊断，特别是某些疾病的混合感染或继发感染，常给诊断带来困难，且容易发生误诊。

6 防 控

6.1 科学合理规划养殖场

养殖场的选址、布局设计必须以科学合理饲养、降低疫病发病率为基础。因此，在建造养殖场时，必须充分考虑当地的交通情况、地形地势、气候、水源，与居民区、畜禽屠宰场的距离等，科学合理规划，既能节约生产成本，提高生产效益，又能为禽营造良好的生长环境，提升疫情防控效果。

6.2 外防输入

严防高致病性禽流感病毒从外传入，引进来自无禽流感养禽场的禽类及其产品。对进口或者从外地引进的禽类及其产品加强检疫，运输途中防止禽类接触到禽流感病毒，到达目的地后进行隔离，待隔离期满后，才可进入圈舍饲养。

6.3 加强饲养管理

对未有该病发生的养禽场和地区，加强饲养管理。减少应激，注意饲料中营养物质的配比，提高家禽自身的抵抗力。注意养禽场内工作人员和饲养用具的流动，做好消毒，防止禽流感病毒交叉传播。做好禽舍的通风，定期清扫、消毒，控制好禽舍的温度、湿度、光照，为禽提供良好的生活环境。

6.4 建立健全疫情防控制度

基层兽医主管部门对辖区内的养禽场加强监管，严格消毒制度和免疫接种程序，养殖畜禽做好登记，定期监测抗体。养禽场内防止野禽进入，尤其在野禽迁徙季节，加强对场内禽的抗体监测，防止禽流感暴发。一旦发现禽流感疫情，应立即上报上级兽医主管部门，划定疫点、疫区，采取隔离封锁、扑杀销毁、环境消毒、强制免疫、限制人员和车辆流动等措施，防止病原扩散。

6.5 免疫接种

疫苗免疫接种是目前防控禽流感最有效的方法。核酸疫苗主要是DNA 疫苗，优点是注射剂量低，免疫保护力持久，且制备简单，易批量生产、成本低、储运方便，免疫效果不受机体免疫机能和母源抗体的影响，缺点是免疫效率和表达效率低，而且核酸疫苗可能会携带抗生素基因，存在生物安全隐患[8]；重组活载体疫苗，可使用痘病毒、新城疫病毒、火鸡疱疹病毒、禽腺病毒作为载体制备疫苗，此类疫苗具有灭活疫苗的优势，使用方便，又可以做到“一针多防”，但是载体的免疫与目的抗原的免疫会发生竞争[9]；亚单位疫苗，生物安全性高，其制备过程中使用的佐剂虽然能显著增强疫苗的免疫原性，但是此类疫苗不能刺激机体产生较强的免疫应答反应，诱导免疫保护期短，且制作成本高，应用不广泛；基因工程重组灭活苗，2006 年以后在我国使用较为广泛，相比于传统灭活苗，此类疫苗在安全性、生产难易程度、免疫效果上都有明显提升；减毒活疫苗，稳定性好，免疫原性高，接种方法简单，一次免疫即可刺激机体产生良好的免疫保护力，但是要警惕其“毒力返祖”现象，使用不当，可能引起禽发病；灭活疫苗在安全性、稳定性、储存运输、生产周期，以及针对流行毒株的保护效率等方面都具有优势，但是需要接种2次以上才能产生高水平抗体，免疫保护期短，并且不能中和变异产生的新病毒；病毒颗粒样疫苗，是纳米疫苗的一种[10]，又被称为“假病毒”，已研制出利用昆虫杆状病毒表达系统表达抗毒基因的禽流感疫苗，此类疫苗不含核酸，安全性高，稳定性好，可有效避免其他病毒的感染，同时还能较好地刺激机体产生抗体，适合大批量生产；表位疫苗可以诱发机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应，提高不同亚型禽流感病毒之间的交叉保护力。