蒙药制剂亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法研究

郭司群 鲁海涛 迟晓雪 郭刚 魏红

【摘 要】 目的：建立亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为ZORBOX SB-C₁₈5 μm4.6 mm×250 mm；流动相为乙腈∶水（50∶50）洗脱；流速：0.8 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：225 nm。结果：木香烃内酯在8.59 ～85.91 μg/mL的浓度范围内线性关系良好，r=0.9999，回收率为97.4%。结论：该方法经方法学验证准确可行，可用于亚玛熏药散的质量控制。

【关键词】 高效液相色谱法；亚玛熏药散；木香烃内酯

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）03-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.03.zgmzmjyyzz202403008

Study on Deter mination of Costunolide in Yama Fumigation Powder

GUO Siqun1 LU Haitao2 CHI Xiaoxue2* GUO Gang3 WEI Hong2

1.Hulunbeier Institute for Food and Drug Control，Hulunbeier 021008，China;

2.Hulunbuir Institute of Forestry and Grassland Science， Hulunbeier 021008，China;

3.Hulunbeier Center for Disease Control and Prevention Inner Mongolia， Hulunbeier 021008，China

Abstract：Objective Aim to establish a method for the deter mination of Costunolide in Yama fumigation powder.Methods High performance liquid chromatography was used. The column was ZORBOX SB-C₁₈5 μm 4.6 mm×250 mm， the mobile phase was acetonitrile∶water （50∶50）， the flow rate was 0.8 mL/min， the column temperature was 35 ℃， and the detection wavelength was 225 nm. Results the linear relationship of Costunolide was good in the range of 8.59-85.91 μg/mL，r=0.9999， the recovery rate was 97.4%.Conclusion  The method is proved to be accurate and feasible by methodology， and can be used for the quality control of Yama fumigation powder.

Keywords：HPLC；Yama Fumigation Powder；Costunolide

蒙药制剂亚玛熏药散由红大戟、石菖蒲、木香、草阿魏、姜黄、没药、商路、生草乌和人工麝香九味药组成。具有清热、解毒、消“粘”、行“赫依”开窍和止痛的功效，用于治疗头刺痛、白内障、黑亚玛病^［1］、脑瘤等。木香，性温、味辛苦，具有行气止痛、调中导滞的功效^［2］，木香烃内酯作为木香主要化学成分具有抗炎镇痛、抑制微生物活性、抑制多巴胺所致的神经细胞毒性、保护神经元^［3］和抗肿瘤等作用^［4］，这些药理作用均与亚马熏药散治疗头刺痛，粘虫微生物引起的黑亚玛病和脑瘤等相关，因此本实验选取木香烃内酯作为质量控制成分，通过建立高效液相色谱法，对处方中木香烃内酯的含量进行测定，最终初步确定亚玛熏药散中木香烃内酯的含量限度。

1 仪器与试剂

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；KQ2200DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；赛多利斯BSA224S型、BP211D型电子天平（德国赛多利斯科技有限公司） ；亚玛熏药散样品由内蒙古国际蒙医医院提供（批号：20191114、20190522、20200810）；木香烃内酯（来源：中国食品药品检定研究院 ；批号：111524-201911 纯度99.9%）；乙腈、甲醇（色譜纯 Fisher Chemical）；自制纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBOX SB- C₁₈5 μm4.6 mm×250 mm； 流动相为乙腈∶水（50∶50）；流速：0.8 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：225 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备溶液的制备 精密称取木香烃内酯对照品4.30 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含木香烃内酯85.91 μg的对照品储备溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声（功率350 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 取按处方比例并以相同工艺制备的缺木香的阴性供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

2.3 干扰试验 分别取2.2.1、2.2.2、2.2.3项下对照品储备溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按2.1项下色谱条件进行测定，结果表明：其他组分对木香烃内酯的测定无干扰，结果如图1、图2和图3所示。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系试验 分别精密量取2.2.1项下对照品储备溶液1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL和10 mL分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成木香烃内酯的8.59 μg/mL、21.48 μg/mL、42.96 μg/mL、64.43 μg/mL和85.91 μg/mL系列浓度溶液。按2.1项下色谱条件，以浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1 。

2.4.2 精密度试验 取2.2.1项下对照品储备溶液，按2.1色谱条件连续进样5针，记录色谱峰峰面积，羟基红花黄色素 A 峰面积的 RSD为0.21%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进行测定。结果见表2。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.4 重复性试验 取样品（批号：20191114）供试品6份，各约1.5 g，精密称定，按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定。结果见表3。表明该方法的重复性良好。

2.4.5 回收率试验 取已知含量的样品（批号：20191114，含量为1.33 mg/g）9份，各约0.75 g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，精密加入用甲醇配制的0.3063 mg/mL木香烃内酯对照品溶液2.4  mL、3.0  mL和3.6  mL，按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表4 。表明该方法的准确度良好。

2.5 样品含量测定 取三批样品按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定。结果见表5。

2.6 木香药材含量测定 取三批样品生产的木香药材按2.2.2项下方法制备，按2.1项下色谱条件测定。结果见表6。

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 参考《中国药典》2020年版一部“木香”^［5］含量测定项下流动相组成，分别考察甲醇-水、乙腈-水不同流動相比例时木香烃内酯的保留时间和分离情况，结果表明乙腈∶水（50∶50）时，木香烃内酯能与其他成分达到较好分离。采用紫外-可见分光光度计对2.2.1项下木香烃内酯对照品储备溶液在190～800 nm波长范围扫描，结果在波长225 nm处有最大吸收，因此选择225 nm作为检测波长。

3.2 供试品溶液制备 分别使用甲醇和乙腈作为提取溶剂进行考察，结果表明甲醇提取量明显高于乙腈。对加热回流、超声提取和浸泡过夜超声提取3种提取方法进行比较，结果表明3种提取方法含量差异并不明显，考虑操作的简便性，最终选用超声作为提取方法。同时又对超声20 min、30 min和40 min进行比较，结果表明超声30 min和40 min时，木香烃内酯的提取量明显高于超声20 min，且超声30 min和40 min差异不大，所以本次实验选择超声时间为30 min。

3.3 结果分析 通过对三批样品中木香烃内酯含量结果分析，平均含量为1.35 mg/g，同法对生产所用木香药材中木香烃内酯含量进行测定，结果为10.16 mg/g，按理论值折算，成品应含木香烃内酯为10.16 mg/g×1000/7251= 1.40 mg/g，转移率=1.35/1.40×100%=96.4%，表明制剂制备工艺有利于木香烃内酯的溶出。由于《中国药典》2020年版一部中，未单独规定木香中木香烃内酯含量限度，考虑到药材质量差异，因此选择样品的实测值下浮20%确定限度，初步确定本品每1 g含木香以木香烃内酯（C₁₅H₂₀O₂）计，不得少于1.0 mg。

实验结果表明建立的高效液相色谱法简便可行、结果准确，可用于亚玛熏药散的质量控制。

参考文献

［1］关代兄，乌兰，娜仁高娃.蒙医辨证治疗亚玛病学术细想的归纳［J］.世界最新医学信息文摘，2018，18（101）：221.

［2］李林玉，刘大会，杨斌，等.木香的本草考证［J］.中药材， 2020， 43（2）：492-495.

［3］王永兵，王强，毛福林，等.木香的药效学研究［J］.中国药科大学学报，2001，32（2）：146.

［4］潘阳，王小静，潘娟，等.木香烃内酯的药理作用及构效关系研究进展［J］.中南药学， 2013（2）：108-112.

［5］国家药典委员会.中国药典（一部）［M］.中国医药科技出版社，2020：62-63.

（收稿日期：2023-05-05 编辑：陶希睿）

作者简介：郭司群（1986—），男，汉族，硕士研究生，副主任中药师，研究方向为药物分析研究。E-mail：guosiqun33@163.com

通信作者：迟晓雪（1986—），女，汉族，硕士研究生，副研究员，研究方向为草原生态保护与建设研究。E-mail：chixiaoxue.333@163.com