样本直接涂片法与液基夹层杯涂片法查找抗酸杆菌的效果比较

罗少珍 刘欣 张志坚 黄业伦 刘志辉

1 广州市胸科医院医学检验科，广州 510095；2 广州市胸科医院第二门诊部，广州 510300

结核病是由结核分枝杆菌感染所致，一直为人类重大公共卫生问题［1］。病原学检测为结核病确诊的依据，目前的主要方法有涂片染色镜检查找抗酸杆菌、分枝杆菌培养和结核分枝杆菌分子检测［2］。其中涂片染色镜检查找抗酸杆菌方法简单、经济，在临床上易于推广应用，在全球结核病控制工作中占有十分重要的位置，但其阳性检出率欠佳；1997 年至2018年中国18 646 672例新登记结核病例中，6 605 414例患者涂片检测阳性，涂片阳性检出率为35.42%［3］。因此，为提高其检测敏感性和准确性，人们从样本处理、染色方法和显微镜检等各个技术环节进行了不懈的探索，以集菌为基本原理的液基夹层杯涂片法即为取得的重要成果之一［4］。本研究对419 例痰液与支气管冲洗液样本的液基夹层杯涂片法和直接涂片法检验结果进行了比较分析，现报道如下。

资料与方法

1.一般资料

以2021 年1 月至7 月广州市胸科医院收治的419 例肺结核患者为研究对象，男302 例、女117 例，年龄14～85 岁。将时间间隔不超过1周，对同类样本（痰液或/和支气管冲洗液）同时行直接涂片与液基夹层杯涂片查找抗酸杆菌的同一患者全部纳入研究，分别获得241 份痰液样本、178 份支气管冲洗液样本两种检测方法的结果并比较分析。本研究符合《赫尔辛基宣言》的原则。

2.仪器与试剂

2.1.仪器 直接涂片法采用荧光染色法手工制片，应用舜宇阅片仪FS400进行初筛、舜宇EX30荧光显微镜人工复查；液基夹层杯涂片法采用抗酸染色法，应用上海皓信生物液基薄层细胞自动制片机（HSXH0001）制片，应用上海皓信生物显微扫描仪进行初筛、OLYMPUS CX21显微镜人工复查。

2.2.试剂 荧光染色试剂和抗酸染色试剂均应用贝索（BASO）公司产品。

3.实验方法

3.1.直接涂片荧光染色法 涂片、染色和人工复查镜检均依中国防痨协会抗酸杆菌显微镜检查标准化操作程序［5］进行，自动阅片仪初筛严格按仪器说明书进行。

3.2.液基夹层杯涂片抗酸染色法 涂片制作和自动阅片仪初筛均严格按仪器说明书进行，染色和人工复查镜检均依中国防痨协会抗酸杆菌显微镜检查标准化操作程序［5］进行。

4.资料收集、整理与分析

从医院医学检验科LIS系统中收集、整理2021年1月至7 月痰液与支气管冲洗液主要送检临床样本的涂片抗酸染色检查和分枝杆菌培养结果。分析同一患者时间间隔不超过1 周、对同类样本进行直接涂片与液基夹层杯涂片查找抗酸杆菌的检验结果。

结果

1.419份样本（241 份痰液样本、178 份支气管冲洗液样本）检测结果比较

直接涂片法和液基夹层杯涂片法在所有样本中的阳性检出率分别为15.27%和13.37%，见表1。在同期直接涂片法和液基夹层杯涂片法中分枝杆菌培养阳性样本的检出率分别为55.56%和48.73%。

表1 直接涂片法和液基夹层杯涂片法检测419份样本（241份痰液样本、178份支气管冲洗液样本）的结果比较（份）

2.241份痰液样本检测结果比较

直接涂片法和液基夹层杯涂片法在所有样本中的阳性检出率分别为15.35%和13.69%，见表2。在同期直接涂片法和液基夹层杯涂片法中分枝杆菌培养阳性样本的检出率分别为56.52%和50.78%。

表2 直接涂片法和液基夹层杯涂片法检测241份痰液样本的结果比较（份）

3.178份支气管冲洗液样本检测结果比较

直接涂片法和液基夹层杯涂片法在所有样本中的阳性检出率分别为15.17%和12.92%，见表3。在同期直接涂片法和液基夹层杯涂片法中分枝杆菌培养阳性样本的检出率分别为54.00%和46.00%。

表3 直接涂片法和液基夹层杯涂片法检测178份支气管冲洗液样本的结果比较（份）

4.直接涂片法和液基夹层杯涂片法检测241 份痰液样本、178份支气管冲洗液样本结果的一致性分析

在241 份痰液样本检测中直接涂片阳性及液基夹层杯涂片阳性、直接涂片阳性及液基夹层杯涂片阴性、直接涂片阴性及液基夹层杯涂片阳性、直接涂片阴性及液基夹层杯涂片阴性的样本占比分别为12.03%、3.32%、1.66%、82.99%，在178 份支气管冲洗液样本检测中则分别为8.99%、6.18%、3.93%、80.90%。

讨论

痰液涂片查找抗酸杆菌检查结果事关结核病例发现、抗结核化疗方案制定、治疗效果评价和治疗结局判断，历来为结核病控制与临床诊疗所应用［6-8］。研究显示，对于结核病诊断而言，痰液涂片查找抗酸杆菌检查方法敏感度低［3，9］，在结核病患者中仅约35%［3］，可以联想在结核病可疑患者中的阳性检出率只能是更低。本研究结果展示了现实医疗环境中的真实世界数据，两种检测方法在痰液和支气管冲洗液中的灵敏度分别为17.01%和19.10%［100%-（直接涂片阴性及液基夹层杯涂片阴性）%］；在分枝杆菌培养阳性患者中，阳性检出率约为50.00%。提高其检测灵敏度一直是人们追求的目标，我们应用的液基夹层杯涂片法基于集菌涂片法发展而来，并且拥有自动制片和人工智能阅片初筛功能，为目前涂片查找抗酸杆菌方法研究的重要发展方向［4，10-11］。本研究结果显示，夹层杯涂片法阳性检出率为13.37%，低于直接涂片法15.27%。与其检测原理相悖，亦与严玉婷［12］、邹红等［13］、胡永芳和刘家秀［14］的研究结果迥异。分析原因：可能与直接涂片法中应用的荧光染色法较液基夹层杯涂片法中的抗酸染色法灵敏度高有关［15-16］。液基夹层杯涂片法中标本离心处理可能带来样本粘附性降低问题一直存在于我们的疑虑中，也许可以从本研究支气管冲洗液直接涂片法阳性检出率低于痰液直接涂片法这一结果中得到说明［17］。支气管冲洗液直接来自病灶或其紧邻解剖学部位、受到冲洗液的稀释等诸多因素也会对病原菌的检出造成不同的影响，值得深入探索［18］。

从本研究结果得知，无论是痰液检测还是支气管冲洗液检测，液基夹层杯涂片法总能发现直接涂片法不能指示的结核病患者，特别是在支气管冲洗液检测中，可大显其临床应用价值［18-19］。我们认为液基夹层杯涂片法和直接涂片法可以互相补充，提高临床对结核病的准确诊断率，值得推广应用。本研究基于真实世界数据，肯定存在着许多偏倚与混杂因素，如何对这些方法予以更为准确、更加科学地评价，并创研出更有效的技术方法，则是我们未来的努力方向。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明罗少珍：酝酿和设计试验，实施研究，采集数据，分析/解释数据，起草文章，统计分析；刘欣：实施研究，采集数据，分析/解释数据；张志坚：采集数据，分析/解释数据；黄业伦：实施研究；刘志辉：酝酿和设计试验，对文章的知识性内容作批评性审阅，指导