血清微小RNA-19b-3p、微小RNA-933水平对老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的评估价值

马存亮, 耿庆亚

(安徽省阜阳民生医院, 1. 心内科, 2. 全科医学科, 安徽 阜阳, 236000)

慢性心力衰竭是一种由各种原因引起组织灌注量不足以及出现肺循环或体循环瘀血的病理状态,多发生于老年人,其具有高发病率、住院率及病死率的特点[1]。微小RNA(microRNA)作为一类调节基因表达的单链非编码小分子RNA, 可反映机体生理状况和疾病种类[2-3], 既往研究[4]显示, hsa-miR-19b-3p靶基因编码蛋白参与机体的炎症、免疫和转录效率,在哮喘儿童中呈低表达。miR-933作为miRNA成员之一,在口腔鳞状细胞癌中呈低表达[5]。目前,血清miR-19b-3p、miR-933在老年慢性心力衰竭患者心功能、预后中作用的相关研究较少。本研究探讨老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平对心功能、预后的评估价值,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年2月—2022年5月本院收治的老年慢性心力衰竭患者108例作为研究对象,并纳入研究组,其中男65例,女43例; 年龄60～81岁,平均(70.66±1.85)岁; 根据纽约心脏学会(NYHA)分级标准[6]分为Ⅱ级35例, Ⅲ级40例, Ⅳ级33例。另选择同期在本院体检的90例健康人群纳入对照组,其中男55例,女35例; 年龄61～82岁,平均(70.74±2.01)岁。

纳入标准: ① 符合慢性心力衰竭诊断标准[7]者; ② 患者和家属知情同意; ③ 年龄≥60岁者。排除标准: ① 伴有肺、脑、肾功能严重障碍者; ② 合并恶性肿瘤疾病者; ③ 伴有其他心脏疾病者; ④ 近期存在大型手术及外伤史者; ⑤ 近期使用免疫抑制剂、糖皮质激素者; ⑥ 精神障碍、意识不清者; ⑦ 临床资料不全者; ⑧ 中途退出者。本研究经过医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 一般资料收集: 收集本研究纳入对象的一般资料,包括年龄、性别、收缩压、体质量指数、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室射血分数(LVEF)及左室舒张末期内径(LVEDD)。

1.2.2 荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测血清miR-19b-3p、miR-933: 获得本研究纳入患者知情同意后,抽取清晨空腹外周静脉血5 mL, 室温下以2 500转/min离心15 min后取清液,存放至-80 ℃冰箱内。后续按比例加入提取试剂Trizol并充分摇匀,随后参照miRNA试剂盒说明书提取血清总miRNA。采用由上海英杰公司生产的特异性逆转录引物及逆转录试剂盒进行cDNA合成,经实时荧光定量PCR进行扩增,以U6为内参。PCR仪器设置参数为95 ℃、30 s, 95 ℃、5 s, 60 ℃、35 s, 共40个循环。miR-19b-3p上游引物为5′-CATGGGTTGTCTCAGTGTCAGAGCT-3′, 下游引物为5′-TGCCTTCTGTCTCCAGTCTTCCAA-3′; miR-933上游引物为5′-CGGCAGGACGAGAAAGAGT-3′, 下游引物为5′-TAGGGCGGGTAGGTGGTGA-3′;U6上游引物为5′-GGAAAGCTGTGGCGTGAT-3′, 下游引物为5′-TCCACAACGGATACATTGGG-3′。最终利用CFX manager 3.0软件分析Ct值并通过2-△△Ct法计算血清miR-19b-3p、miR-933相对表达量。

1.2.3 超声心动图检查: 使用美国Alere公司生产的HP5500型彩色多普勒超声心电图仪测定心功能指标,包括LVEF、LVEDD。

1.3 随访

以发生不良心血管事件再次入院或全因死亡为终点事件,且观察记录入院后12个月内终点事件发生情况。随后根据1年内是否发生终点事件分为发生组(n=34)、未发生组(n=74)。不良心血管事件包括纳入时未发生但在随访过程中发生或随访过程中出现的各种心脏疾病; 全因死亡是指在随访过程中出现的任何原因的死亡事件。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 2组一般资料比较

2组年龄、性别、收缩压、体质量指数及TC、TG、LDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05); 研究组LVEF及 miR-19b-3p、miR-933水平低于对照组, NIHSS评分及LVEDD高于或大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 研究组、对照组一般资料比较

2.2 不同NYHA分级患者血清miR-19b-3p、miR-933及心功能指标比较

NYHA心功能分级Ⅳ级患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群, LVEDD大于心功能Ⅲ级患者、心功能Ⅱ级患者和健康人群,差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 不同人群血清miR-19b-3p、miR-93及心功能指标比较

2.3 老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平与心功能的关系

Pearson相关分析显示,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关(r=0.554,P<0.001), 与LVEDD呈负相关(r=-0.368,P<0.001); 血清miR-933水平与LVEF呈正相关(r=0.505,P<0.001), 与LVEDD呈负相关(r=-0.410,P<0.001)。

2.4 不同预后血清miR-19b-3p、miR-933水平比较

随访12个月,发生组老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 不同预后血清miR-19b-3p、miR-933水平比较

2.5 血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭患者预后的预测价值

ROC曲线结果显示,血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的AUC分别为0.835(95%CI: 0.785～0.885)、0.843(95%CI: 0.790～0.890); 二者联合预测老年慢性心力衰竭患者预后的AUC为0.901(95%CI: 0.851～0.951), 见表4和图1。

图1 血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的ROC曲线

表4 血清miR-19b-3p、miR-933对老年慢性心力衰竭患者预后的预测价值

2.6 老年慢性心力衰竭患者预后的多因素Cox回归分析

以老年慢性心力衰竭患者是否发生终点事件为因变量(未发生组=0、发生组=1), 以外周血miR-19b-3p、miR-933及NIHSS评分等指标为自变量进行多因素Cox比例风险回归模型分析,赋值为NIHSS评分(≤8.85分=0、>8.85分=1); miR-19b-3p(≤5.41=1、>5.41=0); miR-933(≤1.01=1、>1.01=0)。结果显示,血清miR-19b-3p(HR=3.762, 95%CI: 1.854～7.634)、miR-933(HR=3.480, 95%CI: 1.903～6.364)及NIHSS评分(HR=3.047, 95%CI: 1.837～5.051)为老年慢性心力衰竭患者预后不良的影响因素(P<0.05), 见表5。

表5 老年慢性心力衰竭患者预后的多因素Cox回归分析

3 讨 论

慢性心力衰竭为各种心脏疾病进展到晚期的终末表现,近年来随着人口老龄化,发病率呈逐年上升趋势,老年人群慢性心力衰竭发病率为10%～20%[8], 4年病死率约50%[9]。目前,该病临床治疗效果并不理想,且预后较差,因此探寻早期有效预测老年慢性心力衰竭患者心功能及预后的指标具有重要的意义。

miRNA在心血管疾病发生发展方面有重要价值[10]。研究[11]显示, miRNA通过影响心肌细胞的能量代谢、心肌纤维化、心室重构,参与心力衰竭的发生发展, miRNA-155、miRNA-133均可有效诊断慢性心力衰竭发生[12-13]。miR-19b-3p、miR-933是miRNA家族成员之一。研究[14]显示, miR-19b-3p在阿尔茨海默病大鼠血清中表达降低。但另有研究[15]认为,外周血miR-19b高表达是急性心肌梗死并发医院感染患者预后不良的影响因素。研究[16]认为,外周血中miR-19b异常升高可预测老年急性心肌梗死患者的死亡。研究[17]显示, miR-933定位于人2q31.1区域,其过表达对肺癌的增殖、侵袭具有抑制作用。本研究分析发现,研究组血清miR-19b-3p、miR-933水平均低于对照组(P<0.05), 说明miR-19b-3p、miR-933可能参与老年慢性心力衰竭的发生发展过程。LVEDD、LVEF均是目前临床判断心功能的常用指标,本研究Pearson相关分析显示,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(P<0.05); 血清miR-933水平与LVEF呈正相关,与LVEDD呈负相关(P<0.05), 说明血清miR-19b-3p、miR-933水平变化可反映慢性心力衰竭患者心功能。

本研究随访12个月发现,发生组老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平均低于未发生组(P<0.05), 提示miR-19b-3p、miR-933水平变化与慢性心力衰竭患者不良预后有关。本研究ROC曲线结果显示,血清miR-19b-3p、miR-933预测老年慢性心力衰竭患者预后的AUC均超过0.8,提示血清miR-19b-3p、miR-933对患者预后不良有一定预测价值,进一步多因素分析显示,血清miR-19b-3p、miR-933均为老年慢性心力衰竭预后不良的影响因素(P<0.05), 可见临床监测血清miR-19b-3p、miR-933水平变化可判断病情发展,对及早干预和改善患者预后具有价值。miR-19b-3p是一种具有调控因素表达作用的非编码小分子,作为miRNA成员,具有抗炎及保护心脏等作用。相关研究[18-19]显示, miR-19b可通过细胞凋亡酶激活因子-1/胱天蛋白酶信号通路发挥抑炎作用,同时可通过下调下游分子同源磷酸酶-张力蛋白(PTEN)激活Akt信号通路,保护心肌细胞。研究[19]显示, miR-19b-3p高表达可通过调节巨噬细胞极化、抑制经典的炎症途径和增强其他抗炎反应,发挥对心脏的保护作用。研究[20]报道, miR-19b高表达可显著抑制H9c2细胞的氧化应激损伤,发挥心肌细胞保护作用。miR-933过表达在肿瘤疾病中具有诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、降低细胞迁移和侵袭能力等作用[21-22]。因此推测,血清miR-19b-3p、miR-933, 水平降低可使心肌损伤细胞损伤加重,增加预后不良发生风险。本研究发现, miR-19b-3p联合miR-933预测老年慢性心力衰竭不良预后的AUC大于单一指标,说明二者联合应用更有助于诊断老年慢性心力衰竭患者预后状况,可为临床及时采取积极有效措施提供依据。

综上所述,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表达,且其水平变化与心功能及预后密切相关,可作为预测老年慢性心力衰竭患者预后不良的有效指标。但本研究为单中心分析,且样本量较少,今后仍需进一步探讨。