陈伟,斯张国,祝夕超,蔺晓月,李法凯,孙圣福*
1.山东省济南市动物疫病预防与控制中心,济南 250099;
2.山东省莱州市程郭畜牧兽医站,山东烟台 261437;
3.山东省动物疫病预防与控制中心,济南 250100
蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒(blue‐tongue virus,BTV)引起的1 种传染性疫病,主要感染牛羊等反刍动物,尤其是绵羊,感染后主要表现为病羊精神沉郁,食欲丧失,血样下痢,颊黏膜和胃肠道黏膜呈严重的卡他性炎症,常因蹄冠上皮脱落而跛行,被毛断裂,甚至全部脱落[1]。牛感染后症状较轻,主要表现为高热和舌头变蓝,鼻黏膜和口腔黏膜严重充血等症状[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将蓝舌病列为须通报的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。蓝舌病最早于18 世纪发现于南非的绵羊,近年来,在亚洲、欧洲和非洲的多个国家和地区发生绵羊或牛蓝舌病疫情,我国于1979年首次在云南师宗发现该病并分离到蓝舌病病毒。目前,全国已有云南、新疆、甘肃、陕西、四川等29个省(市)区检出羊BTV抗体,许多省份的牛群中也发现BTV 抗体阳性[3-6]。目前,BTV 有29 个血清型[7],不同血清型之间交叉保护性较低,该病主要通过生物安全控制进行防控。本研究采集2022 年山东省规模化牛场血清样品,采用ELISA 方法进行抗体检测,了解山东省牛蓝舌病的带毒状况,为后续该病的防控提供科学依据。
2022 年6 月,全省范围内抽检养牛密集地市(济南、泰安、日照、东营、德州和聊城等市),群体内按照发现疫病的策略进行抽样,置信区间95%,试验敏感性100%,预期流行率为10%进行抽样,抽样场点存栏量50~500 头,每个场点抽检血清样品30份左右,共采集25 个牛场,采集样品750 份。去除不合格血清12 份,合格血清样品共738 份,其中,奶牛场13个,采集血清样品383份,肉牛场12个,采集血清样品355份。
牛蓝舌病抗体检测试剂盒购自IDEXX公司,酶标仪为Thermo-MK3(美国),移液器为Eppendorf(德国)。
试剂使用前需要恢复室温(18~26 ℃),待检血清样品、阴阳性对照用稀释液做5倍稀释,混匀。将100 μL 预孵育的样品加入至包被有抗原的微量反应板,封板在18~26 ℃条件下孵育45 min,每孔用300 μL洗涤溶液洗涤3次,加入100 μL稀释好的酶标抗体,封板在18~26 ℃条件下孵育30 min,再次洗涤,加入100 μL TMB 底物液避光在18~26 ℃条件下孵育10 min,加入100 μL 终止液,450 nm 波长下进行检测,计算结果。
计算样品的S/N值:
若样品的S/N≥0.8,判定为BTV抗体阴性;
若样品的S/N<0.7,判定为BTV抗体阳性;
若样品 的0.7≤S/N<0.8,判定为BTV 抗 体可疑。
待检样品BTV抗体检测为阳性,判定该样品为阳性;场群内有1份及以上样品检测为阳性,则该场群判定为阳性场。个体阳性率为该场阳性样品数量占抽样数量的百分比;群体阳性率为阳性场点数量占抽样场点数量的百分比。
共采集13 个奶牛场,血清样品383 份,采用ELISA 方法进行蓝舌病抗体检测(表1),其中,2 个场点检测到阳性样品,群体阳性率15.38%;383份样品中2 份样品为阳性,个体表观阳性率为0.52%(95%CI:0.06%~1.87%)。从检测结果来看,个别奶牛场检测到蓝舌病抗体阳性样品,群体阳性率和个体阳性率均不高。
表1 奶牛场蓝舌病抗体检测结果
共采集12 个肉牛场,血清样品355 份,采用ELISA 方法进行蓝舌病抗体检测(表2),其中,1 个场点检测到阳性样品,群体阳性率8.33%;355 份样品中1 份样品为阳性,个体表观阳性率为0.28%(95%CI:0.01%~1.56%)。从检测结果来看,仅1个肉牛场检测到蓝舌病抗体阳性样品,群体阳性率和个体阳性率均不高。
表2 肉牛场蓝舌病抗体检测结果
采用IDEXX 蓝舌病抗体检测试剂盒对待检的25 个牛场738 份样品进行抗体检测,群体阳性率和个体阳性率分别为12.00% 和0.41%(95%CI:0.08%~1.18%),由于待检的牛均未进行蓝舌病的免疫,抗体阳性表明牛感染过蓝舌病,说明在山东省部分规模化牛场存在蓝舌病感染的风险。
奶牛场的群体阳性率和个体阳性率分别为15.38%和0.52%,肉牛场的群体阳性率和个体阳性率分别为8.33%和0.28%。从牛的不同品种来看,奶牛的群体阳性率和个体阳性率均高于肉牛场,可能与奶牛对蓝舌病的易感性较肉牛高有关。由于采样场点和采样数量的局限性,本研究不能完全反映2022年山东省规模化牛场蓝舌病的流行情况,但是也能反映部分牛场蓝舌病的感染状况。
牛感染蓝舌病症状较轻,主要表现为口腔黏膜充血、溃疡、流涎、口鼻分泌物增加,乳房浅表性坏死、渗出等,小牛可表现出严重的神经症状[8]。该病呈全球性分布,主要疫区分布在欧洲,2015—2020年,欧洲累计因蓝舌病疫情死亡的牛羊2.5 万头(只),亚洲、非洲和美洲累计病死的牛羊1.8 万头(只)[9]。我国目前已经分离到16 个血清型,其中BTV-1、BTV-8和BIT-16已经在我国广泛流行,尤其是云南等蚊虫密集的省份以及新疆、内蒙等与蒙古国、中亚国家陆地连接的地域,由于其气候特点或养殖模式的原因,BTV的流行较为严重。
由于血清型较多,不同血清型之间交叉保护力较差,虽然目前已经有弱毒苗和灭活疫苗供临床应用,但是防控效果不佳,而且BTV 的传播方式多元化,除了通过带毒牛、器具的传播外,还可以通过精液、胎盘、初乳等感染犊牛,也可以通过库蠓、蜱、蚊虫等节肢动物进行传播,因此,该病的防控也需要采取综合的防控措施。①做好引种检测,避免从疫区或者感染蓝舌病的牛场引种,引种后做好疫病或抗体的检测,检测合格后隔离45 d 才可混群饲养;②强化疫病检测,牛感染BTV 多呈隐性感染,一旦出现症状,BTV 已经在牛群中流行,因此,需要定期或不定期地对牛群进行血清学或病原学检测,一旦检测到阳性牛,立即采取措施;③避免不同畜种混养,BTV 可以感染羊、牛、骆驼等在内的多种反刍动物,如同时饲养其他反刍动物,一旦发生蓝舌病,BTV 容易在场群中不断复制,难以消除;④做好消毒灭源工作,牛场内勤消毒,将病毒及时杀灭,夏秋雨水季节,做好蚊虫等虫媒的防范工作,避免蚊虫携带病毒传播给健康牛。