不同发情阶段冻精配种对辽宁绒山羊受胎率的影响

张兴会,韩 迪,刘兴伟,张庆治

(辽宁省现代农业生产基地建设工程中心,沈阳 110032)

采取人工授精时,羊不能像牛、驴、马那样通过直肠检查卵泡判断发育状态和排卵的具体时间,无法取得高受胎率。需通过观察母羊的发情行为、生殖道黏膜变化等推断输精时机。为探索母羊排卵的具体时间、提高细管冻精的配种受胎率,试验将绒山羊母羊发情期分为4期,分别进行细管冻精配种,并对受胎情况进行分析。

1 材料与方法

1.1 时间、地点及试验动物

2022年9月25日—10月 25日,在辽宁绒山羊原种场有限公司科技示范场,选择生殖机能正常、可自然发情的3～6周岁经产空怀母羊146只。

1.2 公羊试情

所有母羊均在原饲养圈舍进行试情,选择性欲旺盛、体质强健的试情公羊。试情时给试情公羊戴好试情布,以1∶40的比例放入母羊群,接受公羊爬跨的母羊即转入待配母羊群。

1.3 发情期划分

根据母羊生殖道的状态,将母羊发情期划分为4个期,即第1,2,3,4期。

在发情初期,产道内有少量透明而稀薄的液体,阴道黏膜和子宫颈口的黏膜呈淡粉红色,大部分母羊子宫颈口开张不充分或未开张,母羊接受公羊爬跨,此期为“第1期”。

母羊的阴道和子宫颈口的黏膜呈粉红色,黏液量逐渐增加,并有一部分黏液流出阴道口,风干后黏附于尾根或阴道口周围,形成淡黄色结痂,阴道黏液变得黏稠、呈鸡蛋清样,子宫颈口多开张,母羊接受公羊爬跨,此期为“第2期”,以此期为对照。

母羊子宫颈口和阴道黏膜略呈深红色,阴道和子宫颈口的黏液由鸡蛋清样逐渐变成含有少量白色黏液的鸡蛋清样状态,子宫颈口往往开张良好[1],母羊接受公羊爬跨,此期为“第3期”。

母羊产道的黏液变成不流动的白色黏液状,黏液将子宫颈口封堵,产道黏膜变得苍白,只有用开膣器刺激一定时间后才出现一定程度的充血(粉红色),母羊不愿接受公羊爬跨,此期为“第4期”。

1.4 细管冻精

取辽宁绒山羊原种场优秀种公羊的库存细管冻精,解冻后37 ℃条件下活力≥0.3,每剂有效精子数>1.5×107个/ mL[2]。

1.5 试验仪器及用品

双孔恒温数显水浴锅、200～600倍带恒温板的光学显微镜、羊用不锈钢开膣器,羊用细管冻精输精枪;10 L液氮罐、长镊子、手电筒等。

1.6 细管冻精解冻

从液氮罐中取出细管冻精,迅速投入38～40 ℃的恒温水浴锅中,并使冻精细管浸没于水下,不断晃动冻精细管,待细管内冻精融化至透明状时取出,去掉棉塞端,镜检合格后装入输精器[3]。

1.7 输 精

母羊用呈前低后高与地面呈30°的保定架保定,进行常规的清洗、消毒,然后将细管冻精输入母羊子宫颈口的隐窝内,倒控 1 min,放开母羊。所有待配母羊上午输精1次,下午输精1次,每次输精1剂,两次输精间隔7 h。

1.8 妊娠母羊的鉴定方法

母羊输精后的第20天没有出现再次发情,并且在输精后第30天B超直肠探查发现胚泡,即诊断为妊娠,统计受胎率。

1.9 数据的统计分析

采用样本百分数差异显著性t检验法进行统计和分析比较,P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

各期母羊配种受胎率见表1。

表1 不同发情阶段的母羊细管冻精配种受胎率统计

从表1可以看出,第3期的受胎率最高,达到77.50%(31/40);第2期的受胎率次之,达44.00%(22/50);第1期的受胎率低于第3期和第2期,达8.33%(3/36);第4期的受胎率最低,为0(0/20)。与第2期相比,第1,4期受胎率显著降低(P<0.05),第3期受胎率显著提高(P<0.05)。说明在母羊发情的第3期进行细管冻精配种较为适宜。

3 讨 论

3.1 试验原理

从母羊各发情期产道变化来看,处于发情第3期的产道内,母羊子宫颈口和阴道黏膜略呈深红色,表明母羊发情进入旺盛阶段,黏膜充血程度最高,阴道和子宫颈口的黏液由鸡蛋清样逐渐变成含有少量白色点状黏液的鸡蛋清样状态,子宫颈口开张良好。鸡蛋清状黏液即母羊体内电解质和蛋白质类物质有利于精子的存活和运行。黏液中含有的少量白色点状分泌物,表明发情母羊出现由发情旺期向发情结束方向转化的趋势,少量的白色点状分泌物并没有影响精子的存活和运动。而下一期生殖道内的黏液由液态变为不流动的固态,并且有大量固态白色黏堵塞子宫颈口,生殖道内的黏膜变为苍白色,无法输入精液并且不利于精子的存活和运行。据此推断,当发情母羊生殖道出现子宫颈口开张、黏膜变为深红色的黏稠鸡蛋清样并有少量白色点状分泌物时,母羊可能已经排卵,推测此时为冻精配种输精的适宜时机。本研究中,母羊上述表现出现在发情第3期,此期的冻配受胎率均高于其他3个期,即验证了这一推论。

3.2 各期受胎率差异分析

本研究中,第1期母羊受胎率为8.33%(3/36),第2期为44.00%(22/50),第3期为77.50%(31/40),第4期为0(0/20)。说明越接近第3期,母羊的冻精配种受胎率越高,而第4期无配种母羊受胎,说明第4期的生殖道状态不利于精子存活,不适于配种。第1期有少量母羊受孕,原因可能是母羊发情期较短,发情由第1期很快经过第2期,转入第3期;母羊发情四期中,第2期受胎率高于第1期,也与上述原因有关。

3.3 结果验证

据报道,牛细管冻精配种的受胎率平均达到了91.2%、情期受胎率71.3%的水平[4],而本研究中最高配种受胎率在第3期,为77.50%,与牛冻精配种的受胎率接近,但本试验的样本数较小,有待于进一步加大试验样本进行统计。简泽锋等[5]认为,除发情初期和发情后期外,发情母牛可见黏液被牵拉而产生一条或多条黏液线,黏液呈灰白浓稠,可牵拉成多条缝纫线粗细的5～8 cm长黏液线时,可进行第一次输精,说明牛的发情鉴定同样可以根据产道黏液的变化精确判断输精时间。羊与牛均为反刍动物,其发情规律有较多的相似之处,从而在一定程度间接验证了本试验的推断结论。

3.4 不足之处

对于辽宁绒山羊,在母羊发情第3期进行冻精配种,取得了较高的受胎率,说明第3期是冻精配种的适宜期,但是否能找到更准确的输精时刻,还有待于进一步开展相关试验。另外,根据观察推断的母羊排卵时间,还需结合母羊生殖道状态并利用腹腔镜观测结果对试验结果进行校正。

4 结 论

当母羊发情进入第3期,即子宫颈口开张、生殖道黏膜呈深红色、生殖道内分泌大量黏液,并且黏液呈鸡蛋清样黏稠状、有少量白色点状分泌物时在子宫颈口输入细管冻精,可取得较好的受胎效果。