抗-Ce、抗-Jka伴抗-Wra抗体联合检测致交叉配血困难原因分析*

陈敏洁,杨红梅,张建伟△

1.江苏省常州市中心血站,江苏常州 213000;2.江苏省常州市临床输血重点专科实验室,江苏常州 213000

不规则抗体是导致临床交叉配血不合的主要原因。不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的抗体,包括非ABO血型系统抗体和ABO亚型抗体[1]。引起临床困难配血最主要的抗体是Rh血型系统不规则抗体,该系统抗体可单独存在,也可联合其他抗体存在,尤其是多次输血患者可能会产生多种不规则抗体,导致鉴定抗体特异性困难。本实验室在工作中发现1例抗-Ce、抗-Jka和抗-Wra抗体联合检测致交叉配血不合,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者,女,53岁,临床以消化道出血、红斑狼疮、肾功能不全及重度贫血入院,血红蛋白39 g/L,既往有多次输血史,有妊娠史,抗体筛查阳性,特配悬浮少白红细胞4 U,送至本实验室进行相关检测。

1.2试剂与仪器 抗-A/B单克隆抗体、抗-C(IgM)抗体、抗-c(IgM)抗体、抗-E(IgM)抗体、抗-e(IgM)抗体、ABO血型反定型红细胞(上海血液生物医药有限责任公司,批号:20201221、20201221、20203002、20203102、20203202、20203301、20225309);多抗试剂、抗-IgG和抗-C3d试剂(上海血液生物医药有限责任公司,批号:20205001、20205101、20215201);进口抗筛细胞、进口谱细胞(匈牙REAGENS公司,批号:702205、732205);Sanquin谱细胞(上海起发实验试剂有限公司,批号:8000455637);Anti-Jka、Anti-Jkb(德国CE公司,批号:OJkaM208-1、OJkbM133-2);抗人球蛋白检测卡(上海润普生物技术有限公司,批号:10210801);抗人球蛋白检测卡(长春博迅生物技术有限责任公司,批号:20210307);酸放散试剂(上海申型医学科技有限公司,批号:20202101);聚凝胺试剂(珠海贝索生物技术有限公司,批号:A210701)。久保田KA-2200血清学专用离心机;珠海贝索生物技术有限公司2020-2低速离心机;上海铂温仪器有限公司37 ℃恒温水浴箱;长春博研科学仪器有限责任公司FYQ型试剂卡孵育器;长春博研科学仪器有限责任公司TD-A医用离心机;上海润普生物技术有限公司TXK4医用离心机;珠海贝索生物技术有限公司毛细管离心机2403。

1.3试验方法 采用试管法进行ABO血型鉴定,采用毛细管离心法进行Rh系统鉴定,三介质(盐水、凝聚胺、抗人球蛋白卡)联合应用结合多套谱细胞进行抗体特异性鉴定和交叉配血试验,采用抗人球蛋白卡进行酸放散试验。全部试验依据文献[2]的方法和试剂操作说明书进行。

2 结 果

2.1患者血型 试管法鉴定患者血型:O型RhD阳性。试管法鉴定患者Rh分型:CcEe中C和e抗原呈混合视野2+mf。因患者有输血史,所以取患者洗涤后的压积红细胞转入2支毛细管,毛细管外侧橡皮泥封堵后以毛细管离心机超速离心10 min后即可获取患者近心端和远心端红细胞(封闭端即为远心端),分别配置成2%～4%红细胞悬液备用。近心端和远心端红细胞分别进行Rh抗原检测和直接抗人球蛋白试验。由于患者新鲜红细胞富集于近心端,根据近心端Rh抗原检测结果确定患者Rh分型为ccEE。患者近心端直接抗人球蛋白试验阴性,远心端多抗和抗-IgG为弱阳性,远心端富集输入红细胞,提示红细胞因输入不合血液而致敏,存在IgG类抗体。

2.2抗体筛查试验 在抗人球蛋白介质中,患者血清与1号和3号筛选细胞有不同强度凝集,1号筛选细胞凝集强度2+,3号筛选细胞凝集强度1+S。2号筛选细胞为-。提示患者血清中含有不规则抗体,根据剂量效应推测存在抗-Ce或合并其他抗体。

2.3抗体特异性鉴定 患者血清与进口匈牙谱细胞反应结果见表1,患者血清在抗人球蛋白及凝聚胺介质中与谱细胞有不同程度凝集。患者直接抗人球蛋白试验呈阳性反应,表明患者红细胞上吸附有一定量抗体,患者红细胞经酸放散后放散液与谱细胞反应。根据抗人球蛋白卡中凝集强度剂量效应吻合积分原则(纯合子积2分,杂合子积1分,0即为0分),1～11号谱细胞积分分别为5、2、4、3、4、3、5、2、4、4、2分,判断患者血清中存在抗-C、抗-e和抗-Jka抗体。用毛细管离心法取得的近心端患者红细胞进行血型分型,患者血型为ccEE、Jk(a-b+),与患者血清中存在相应抗体吻合。考虑患者抗体复杂性,用Sanquin谱细胞再次进行抗体特异性鉴定,结果见表2。根据Sanquin谱细胞剂量效应吻合积分原则,1～16号Sanquin谱细胞积分分别为6、4、2、4、5、0、4、4、2、4、4、0+W、3、4、2、4+Wra(+),进一步判断患者血清中存在抗-C、抗-e和抗-Jka抗体,且16号谱细胞[ccee,Jk(a+b-),Wra(+)]凝集强度明显高于4、7、8、10、14号[ccee,Jk(a+b-),Wra(-)],因此判定该患者还存在抗-Wra抗体。

表1 患者血清与进口谱细胞反应格局及结果(REAGENS,732205)

表2 患者血清再次与进口谱细胞反应格局与结果(Sanquin,8000455637)

2.4吸收放散试验 吸收放散试验可以验证抗体特异性。9号Sanquin谱细胞[ccee,Jk(a-b+)]对患者血清进行第1次热吸收酸放散试验,放散液格局符合抗-e。9号谱细胞吸收后血清用3号Sanquin谱细胞[ccEE,Jk(a+b-)]进行第2次吸收放散试验,酸放散液格局符合抗-Jka。2次吸收后的血清用REAGENS谱细胞鉴定格局符合抗-C;且用Sanquin谱细胞鉴定同样符合抗-C,16号谱细胞出现凝集确定存在抗-Wra抗体。

2.5交叉配血试验 2022年4月17、4月19、4月20和4月21日4次共计筛选出5袋[ccEE,Jk(a-)]O型2 U悬浮少白细胞红细胞与患者进行交叉配血。主侧在盐水、凝聚胺、抗人球蛋白介质中均无凝集、无溶血。由于Wra是低频抗原,且本实验室没有购买相应抗体,主侧交叉配血试验阴性确认筛选红细胞无相应抗原。

3 讨 论

Rh血型系统是人类已知红细胞系统中最复杂和多态的血型系统,具有高度免疫原性及复杂多态性[3]。Rh血型系统免疫原性强度由强到弱依次为D、E、C、c、e[4]。Rh血型系统抗体多为IgG类抗体,多由妊娠及输血免疫产生。通常情况下医院输血科只对D抗原进行检测并进行匹配性输注,其他抗原不进行匹配性输注,导致每一次输血均有产生同种免疫性抗体的可能。结合患者同时具有输血史、妊娠史,其C和e抗原均存在混合视野,判断患者近期可能输注有C(+)、e(+)的红细胞,从而产生了抗-C抗体和抗-e抗体。通过毛细管离心法可以区分患者自身红细胞及献血者红细胞,近心端患者自身红细胞抗原分型为ccEE。通过抗体特异性鉴定、积分制原则及吸收放散试验确定患者同时存在抗-C抗体和抗-e抗体。根据报道,Rh表型为ccDEE在我国人群的频率为4.70%～6.46%[5-6],随机配血相合输注的血液Rh抗原匹配率只有4%～6%。所以,对于需要反复多次输血的患者,Rh分型检测及同型输注至关重要。

抗-Jka抗体是Kidd血型系统抗体,多为IgG类抗体,通常结合补体且与其他抗体合并存在。长期不受抗原刺激抗体会迅速减少甚至消失,再次输注抗原阳性血液会迅速引发记忆反应,抗体效价快速升高,结合补体引起严重溶血反应[7]。通过剂量效应及吸收放散试验确认患者含有抗-Jka抗体,并且与患者基因型Jk(a-b+)相吻合,进行输血时应挑选相应抗原阴性的红细胞输注,以免引起严重的迟发型溶血性输血反应,危及患者生命。

Wra是Diego血型系统的低频抗原,在中国人群中频率<0.01%[8]。抗-Wra抗体一般合并其他血型系统抗体存在,且随着进口谱细胞的应用,抗-Wra抗体的检出率也逐年提高。

随着医疗技术的提升,临床上遇到复杂抗体的患者越来越多,特别是需要多次输血的患者同种抗体产生的风险增加,抗体鉴定困难。不规则抗体筛查应该作为输血前检测的一部分,它提供了比交叉配血更为可靠和灵敏的检测方法(剂量效应等)[9]。在抗体特异性鉴定时出现血清与谱细胞反应强度存在明显差异时,要充分应用积分制原则和剂量效应,以及应用多组谱细胞,同时考虑多种抗体的存在。尤其是类似Kidd血型系统抗体,该类抗体消失快、恢复快且容易联合存在,容易造成漏检而引起严重的迟发型溶血性输血反应。吸收放散试验能很好地提炼单个抗体,提高抗体鉴定的准确性。

综上所述,准确鉴定多次输血患者体内多种抗体特异性尤为重要,漏检和误检均会导致患者输血效果不佳,以及出现输血反应。