两种国产化学发光测试系统测定乙型肝炎病毒表面抗体的一致性评价

曹春玲，张润锋，严诗云，潘晓芳，吴静标（通信作者）

广东省医疗器械质量监督检验所 （广东广州 510663）

乙型肝炎病毒表面抗体（hepatitis b virus surface antibodies，HBsAb）浓度高于10 mIU/ml 时能对患者进行有效保护，也可以此判断乙型肝炎病毒感染后体内抗体的反应和直观了解接种疫苗后的机体免疫状态[1]。化学发光法由于具有灵敏度高、快速、自动化、可定量、可降低人为误差、可用于乙肝病毒感染的动态监测等优势，被广泛应用于临床，日渐成为主流的HBsAb 检测方法[2-4]。由于不同测试系统特别是当测试系统量值溯源不同时，检测结果的差异可能影响对患者免疫状态的评估结果。因此，本研究比较2 种国产化学发光测试系统间结果的一致性和统计学关系，并与临床使用广泛的测试系统A 的结果进行一致性评价，分析系统间的一致性和互换性。

1 材料和方法

1.1 测试样本

采用乙肝五项全阴性血浆的HBsAb 国家标准品1 号样本（中国食品药品检定研究院，批号：300015-201802，浓度：160 mIU/ml），按比例稀释为100、50、30、20、12、6 mIU/ml。使用全自动化学发光免疫分析仪（雅培公司，型号：Alinityi）及配套HBsAb 检测试剂盒（Anti-HBs Reagent Kit）对6 个样本进行测试，均值分别为108.12、55.33、35.79、25.70、16.45、9.12 mIU/ml。

1.2 测试系统

测试系统1：采用全自动化学发光免疫分析仪（深圳市新产业生物医学工程股份有限公司，型号：Maglumi 4000 Plus）及配套的HBsAb 测定试剂盒（化学发光免疫分析法，批号：12422011）测定样品浓度。

测试系统2：采用全自动化学发光免疫分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：CL 2000i）及配套的HBsAb（Anti-HBs）测定试剂盒（化学发光免疫分析法，批号：2022010111）和HBsAb 校准品（批号：2021110100）测定样品浓度。

测试系统A：采用型号为Alinityi 的全自动化学发光免疫分析仪（雅培公司，型号：Alinityi）及配套HBsAb 检测试剂盒（Anti-HBs Reagent Kit）测定样品浓度。

1.3 样品检测

试验前调试仪器，确定仪器状态良好，设置仪器参数信息。测试系统装载试剂后进行定标，对样品进行上机测试。测试系统1、测试系统2 分别对每份样品平行检测2 次。

1.4 统计学处理

对2 个测试系统采用配对t检验进行统计学分析和相关性分析。P<0.05 为差异有统计学意义。将测试系统1 和测试系统2 的结果分别与测试系统A 的结果采用加权最小二乘法进行直线拟合，得到线性回归方程，分别计算测试值均值（Y）、标准差（SD）、权重（W），根据权重公式计算斜率（a）和截距（b），将测试系统A 的结果代入回归方程Y=aX+b计算预测值、绝对线性偏差和相对线性偏差，上述代入测试系统的结果与预测值计算绝对线性偏差和相对线性偏差。

2 结果

2.1 测试系统结果的统计学分析和相关性分析

测试系统1 和测试系统2 的结果均值和信号值均值作为变量，测试系统1 和测试系统2 间HBsAb 定量检测结果比较，差异有统计学意义[υ=8，ABS（t）=2.535，t0.05（8）=2.306，P<0.05]。两直线斜率比较，差异有统计意义（|t|≥t0.05（8），P≤0.05），不平行，见表1。对测试系统1 和测试系统2 的结果进行线性二次回归拟合，相关系数r=0.99341，拟合曲线图见图1。

图1 两测试系统结果的线性二次回归拟合曲线

表1 测试系统结果的统计学分析和相关性分析

2.2 测试系统的一致性和相关性分析

以测试系统A 的结果为自变量，以测试系统1和测试系统2 的结果为因变量进行线性拟合，测试系统1 与测试系统A 的相关系数r=0.99814，绝对线性偏差为-8.70～9.24 mIU/ml，相对线性偏差为-7.53%～6.09%；测试系统2 与测试系统A的相关系数r=0.98821，绝对线性偏差为-3.46～1.00 mIU/ml，相对线性偏差为-18.16%～10.03%，测试系统1、测试系统2 与测试系统A 不同浓度点间的结果一致性良好，见表2～3。

表2 测试系统1 与测试系统A 的线性拟合计算结果

表3 测试系统2 与测试系统A 的线性拟合计算结果

3 讨论

感染乙型肝炎病毒是慢性肝炎的主要病因，感染者可进展为肝硬化、肝衰竭，甚至可引发肝癌[5-6]。HBsAg 作为乙型肝炎病毒标志物之一，是检测乙型肝炎病毒的常用指标，可准确反映人体的免疫状态和乙型肝炎病毒的含量。乙型肝炎病毒感染的1～2 个月，在感染者血清中会出现HBsAg，当HBeAg 结果呈阳性时，提示受检者患有乙型肝炎，若患者HBeAg 结果长期呈阳性，乙型肝炎转变为慢性肝炎的风险增加，并提示病毒复制活跃、传染性强，因此感染者需定期监测HBeAg 水平[7-8]。目前，临床主要采用酶免疫法和化学发光法检测HBeAg 水平。由于化学发光法是对体系化学发光强度进行检测，受化学反应过程均匀性和完整性影响，结果存在一定误差，导致检测可能不准确，但误差不可避免，因此在变系数模型的基础上再考虑协变量存在测量误差的问题，使估计结果更具有参考性[9]。

本研究结果发现，测试系统1 和测试系统2间HBsAb 定量检测结果比较，差异有统计学意义；测试系统1 和测试系统2 结果的相关系数r=0.99341，提示在整个线性区间内具良好相关性。表明配对样本t检验对随机误差检出不敏感，对系统误差检出敏感，对浓度集中组数据间差异有统计学意义的结果存在假阳性，不建议单独使用[10]。故本研究采用配对样本t检验，组内相关系数，线性回归模型对数据进行综合评价，以期得到更准确的结果。统计数据分析中首选模型之一即为经典的线性回归模型，此模型的估计和推断体系较为系统。本研究选择测试系统A 结果作为参比值，结果显示，测试系统1 与测试系统A 的相关系数r=0.99814，绝对线性偏差为-8.70～9.24 mIU/ml，相对线性偏差为-7.53%～6.09%；测试系统2 与测试系统A 的相关系数r=0.98821，绝对线性偏差为-3.46～1.00 mIU/ml，相对线性偏差为-18.16%～10.03%，测试系统1 和测试系统2 的结果与测试系统A 结果间的相关系数r均大于0.95，说明测试系统1 与测试系统A、测试系统2 与测试系统A 均具有良好的相关性。绝对线性误差均在临界值时分别为-2.11、0.11 mIU/ml，在参考区间的范围中HBsAb 的结果100%落在正常参考范围内。结果阴、阳性定性判断均一致，结果总体一致性较为良好。因不同测试系统的量值溯源性不完全一致，故在线性回归分析中存在一定偏差，在实际临床应用中此类偏差对临床判断影响不大。需要特别关注的是，临界值样本检测难度较大，但本研究中定性结果均能达到一致性判定。测试系统A 为雅培化学发光测试系统，一直是欧洲肝病学会、美国肝病学会及亚太肝病学会指南明确提出并认可的测试系统[11-12]，本研究所用的两组国产化学发光法测试系统结果与雅培化学发光测试系统的线性相关性良好，定量的浓度值差值在可接受范围内，包括临界值样本在内的系列浓度样本结果阴、阳性判定均达到一致，故可认为2 种国产化学发光法测试系统与被欧洲肝病学会、美国肝病学会及亚太肝病学会指南明确提出并认可的测试系统的结果有较好的一致性。

综上所述，2种国产测试系统的结果具有良好的可比性，与雅培化学发光测试系统的结果一致性较好，均可用于HBsAb 检测，其定性判断结果均能达到一致，临床可根据实际选择合适的测试系统。