照山白浸膏片的快速多信息梯度薄层鉴别

刘 勇，安丽娜，安 静，王立伟，石岩硕，申玉龙，董占军△

（1. 河北省人民医院，河北 石家庄 050051； 2. 承德燕峰药业有限责任公司，河北 石家庄 050051）

照山白浸膏片为部颁标准［1］收载品种，主成分为照山白单味药材。原标准项下仅收载了照山白浸膏片的显微鉴别和显色反应，无法全面控制制剂的质量。崔小丽等［2］对照山白浸膏片进行了薄层色谱鉴别，采用2种展开剂分别鉴别了制剂中金丝桃苷、槲皮素和山柰素3 种成分。王志轩等［3］采用高效液相色谱法，以梯度洗脱的方式同时测定了照山白浸膏片中上述3 种成分含量。多信息梯度薄层鉴别将中药指纹图谱［4-5］的内涵引申到薄层鉴别领域，按脂溶性、中极性、水溶性的梯度顺序，以薄层鉴别的形式检视药材中多种成分信息斑点。本研究中参照文献［6-9］，对照山白浸膏片进行了多信息梯度薄层色谱（TLC）鉴别研究。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KQ3200E 型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ZF-2型三用紫外分析仪（上海市安亭电子仪器厂）；AX205DU型电子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为0.1 mg）；ST16R 型高速冷冻离心机（德国Thermo Fisher Scientific公司）。

1.2 试药

照山白浸膏片样品（承德燕峰药业有限责任公司，批号为20210618）；照山白对照药材（河北省保定市安国药材批发市场，批号为20201002），由河北省药品检验研究院段吉平主任药师鉴定为正品；硅胶GF254薄层板（青岛海洋化工有限公司）；甲醇、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、浓氨试液等均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

取样品（除去包衣，研细）0.7 g，精密称定，加70%甲醇3 mL，超声（功率120 W、频率40 kHz，下同）处理15 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液，即得供试品溶液；取照山白对照药材细粉0.5 g，精密称定，加70%甲醇2 mL，超声处理15 min，离心，取上清液，即得对照药材溶液。

2.2 薄层鉴别

脂溶性成分：吸取2.1 项下供试品溶液4µL、对照药材溶液6 µL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨水（7.2∶2.2∶3.4∶1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图1 A）；喷以1%三氯化铝乙醇溶液（第1次显色），热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图1 B）；再喷以10%硫酸乙醇溶液（第2 次显色），105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图1 C）；置暗室内透光检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图1 D）。结果共获得27个脂溶性成分斑点。

图1 脂溶性成分薄层色谱图1，3 - 5.Test solution 2.Reference medicinal solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.After the first color development under UV lamp（365 nm） C.After the second color development under UV lamp（365 nm） D.After the second color development under darkroom light transmissionFig.1 TLC chromatograms of liposoluble components

中极性成分：吸取2.1项下供试品溶液4µL、对照药材溶液5µL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨水（3∶5∶4∶1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图2 A）；置紫外光灯（254 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图2 B）；喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图2 C）；置暗室内透光检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液相应位置显相同颜色斑点（图2 D）。结果共获得26个中极性成分斑点。

图2 中极性成分薄层色谱图1 - 3，5.Test solution 4.Reference medicinal solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.Under UV lamp（254 nm） C.After the color development under UV lamp（365 nm） D.After the color development under darkroom light transmissionFig.2 TLC chromatograms of medium - pola components

水溶性成分：吸取2.1 项下供试品溶液3µL、对照药材溶液4 µL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨水（2∶3∶5∶1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图3 A）；置紫外光灯（254 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图3 B）；喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图3 C）；置日光灯下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点（图3 D）。结果共获得21个水溶性成分斑点。

图3 水溶性成分薄层色谱图1.Reference medicinal solution 2 - 5.Test solutionA.Under UV lamp（365 nm） B.Under UV lamp（254 nm） C.After the color development under UV lamp（365 nm） D.After the color development under daylight lampFig.3 TLC chromatograms of water - soluble components

3 讨论

采用3 种极性梯度展开剂，以各自4 种条件下检视，薄层色谱图中呈现的斑点形状、大小、比移值均不同，且互不干扰，在各自的层次上均呈现出特有的斑点。3块薄层板在多检视条件下进行多成分累加，分别检出脂溶性、中极性、水溶性成分斑点27，26，21 个，归属15，16，13种化学成分，去除因极性间的衔接产生的重复斑点后共归属约26种化学成分。斑点颜色各异、清晰、直观，易于识别、对比和判断。

综上所述，本研究中建立的多信息梯度薄层鉴别方法简便、快捷，成本低、效率高，且检测的成分信息斑点多，优于指纹图谱法［10-13］，可为照山白浸膏片的质量控制提供参考。