外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶膜脂过氧化水平的影响

卢绍浩，刘崇盛，许利平，谢永恒，许高燕，吴兆明，张丽娜，高阳

浙江中烟工业有限责任公司，杭州 310000

雪茄是一种用烟叶卷制成的特殊烟草制品，优质的雪茄烟叶具有颜色均匀、油分足、香味浓厚、劲头较大的特点，是卷制高端雪茄的基础[1]。烟草调制是烟叶品质形成的重要环节，在调制过程中，烟叶内部发生生理变化，会产生吡嗪、吡啶等对烟草品质起重要作用的杂环化合物[2]。同时，在调制阶段由于水分散失对烟叶内部造成了逆境胁迫，导致了细胞膜的逐渐氧化，最终产生了对烟叶有毒害作用的丙二醛（MDA）[3]。MDA 作为膜脂过氧化的最终产物，常将其含量作为衡量烟叶膜脂过氧化水平的重要指标[4]。一般认为烟叶发生黄化褐变是由于膜脂过氧化水平的加剧，烟叶细胞衰老死亡，细胞膜间的分隔作用被打破导致酶和底物结合受抑制[5]。范宁波等[6]研究发现，晾制期间雪茄烟叶膜脂过氧化水平过高，将加快膜脂代谢和色素降解，导致烟叶衰老进程加快，内含物质转化不充分，杂色烟比例升高。宫长荣等[7]研究发现，烟叶内在品质与膜脂过氧化水平呈负相关。杨虹琦等[8]研究表明，烟草在调制阶段膜脂过氧化反应发生的越早或越剧烈都不利于烟叶品质的形成。因此合理调控调制阶段烟叶膜脂过氧化水平，有利于延缓晾制期间雪茄烟叶衰老进程，促进烟叶内含物质转化，对提高烟叶品质具有重要意义。

褪黑素是植物生命活动所必要的色氨酸吲哚衍生物，被认为是一类新的植物生长调节剂，具有维持细胞活性氧代谢平衡的作用，能提高植物抗氧化酶基因的表达，降低超氧阴离子及过氧化氢的含量，是植物体内重要的抗氧化剂[9]。前人研究了赤霉素、水杨酸、茉莉酸、油菜素内酯及褪黑素等外源激素对植物抗氧化系统的影响，结果发现在不同种类的非生物胁迫中，施加外源褪黑素处理的植物膜脂过氧化水平最低，抗氧化能力最好[10-11]。因此，选用外源褪黑素作为处理，对提高植物抗氧化能力效果较为显著。辛丹丹等[12]研究发现，外源褪黑素可降低采后黄瓜MDA 含量、活性氧含量和乙烯释放量，提高抗氧化酶活性，延缓采后黄瓜的衰老。贺嘉豪等[13]研究发现，外源褪黑素可显著增强烟草幼苗在干旱胁迫下的光合作用以及抗氧化能力。目前，褪黑素对提高植物抗胁迫能力的相关研究主要集中在果蔬方面[14-15]，而对雪茄烟这类特殊的烟草研究较缺乏。本研究通过探究不同浓度外源褪黑素对雪茄烟叶晾制过程中抗氧化系统的影响，旨在明确外源褪黑素处理与雪茄烟叶晾制期间衰老机制的关系，为外源褪黑素在雪茄烟叶晾制时期的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验于2021 年在四川省什邡市雪茄烟叶种植基地（东经104°12′，北纬31°12′，海拔545 m）进行，试验地土壤为水稻土，肥力均匀，地势平坦，土壤pH 6.56，有机质含量35.02 g/kg，速效钾含量84.20 mg/kg，速效磷含量42.85 mg/kg，速效氮含量117.02 mg/kg。种植的雪茄烟叶为当地主栽品种德雪1 号。试验所用的褪黑素为索莱宝生物有限公司生产。

1.2 试验设计

烟苗于2021 年4 月30 日进行移栽，行距1.2 m，株距0.4 m，烟田施氮量为180 kg/hm2（烟草专用复合肥）。采收时选取叶片成熟度及长势相一致的烟株，以10～12 叶位的中部叶为试验材料，将采后烟叶编杆挂入规格为30 m×10 m×8 m 的晾房，烟竿长2 m，每竿挂烟叶45 片，每个处理标记30 竿，其它生产管理按照当地优质雪茄烟叶生产技术规范统一进行。试验设置4 个处理，分别为：CK，叶面喷施蒸馏水；T1，叶面喷施浓度为60 μg/mL 的褪黑素溶液；T2，叶面喷施浓度为120 μg/mL 的褪黑素溶液；T3，叶面喷施浓度为180 μg/mL 的褪黑素溶液；每个处理重复3 次。晾制开始时向各处理雪茄烟叶的叶面上先喷施pH 5.50～6.35 的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液调节酸碱度（防止外源褪黑素的喷施破坏了原有的酸碱平衡，导致烟叶细胞活性降低[16]），之后再将配置好的各浓度褪黑素溶液均匀地喷施在雪茄烟叶上，喷施量以叶重的25%为准。分别在晾制的鲜烟叶期S1（晾制0 d）、凋萎期S2（晾制5 d）、变黄后期S3（晾制10 d，此时雪茄烟叶表面颜色为黄色和褐色共存，主要以黄色为主，故将S3 设定为变黄后期。）、定色期S4（晾制15 d，相关研究发现，雪茄烟叶变褐过程在变黄期就已经启动，在晾制13 d 左右烟叶基本完成变褐过程[17]，因此，将S4 设定为定色期。）、干筋期S5（晾制20 d）进行烟叶的取样（本研究设定的5 个时期并未完全契合雪茄烟叶的晾制时期，主要是因为各时期的分界点未能有效界定，同时本研究的取样时间跨度略大，导致了个别晾制时期被忽略），各处理每次选取30 片烟叶，将其分为3 份：一份用纱布和锡箔纸包裹后置于液氮中用于酶活性、MDA 含量和脯氨酸含量的测定；一份用于含水率的测定；一份去除主脉和叶尖，杀青后烘干磨碎过孔径250 μm 筛用于多酚类物质含量的测定。当烟叶晾制结束时，各处理选取30 片烟叶烘干磨碎过孔径250 μm 筛用于化学成分含量的测定。

1.3 测定指标与方法

1.3.1 含水率测定方法

将整片烟叶叶尖1/3 处和叶基1/3 处去除后，采用加热烘干法测定烟叶含水率[18]。

1.3.2 丙二醛和脯氨酸含量测定方法

丙二醛（MDA）和脯氨酸含量利用氨基酸含量测定试剂盒（苏州科铭生物技术有限公司）采用可见分光光度法测定。

1.3.3 酶活性测定方法

过氧化物酶（peroxidase，POD）、多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）过氧化氢酶（catalase，CAT）活性利用POD、PPO、SOD 及CAT 活性测定试剂盒（苏州科铭生物技术有限公司）采用可见分光光度法测定。

1.3.4 多酚类物质含量测定方法

采用YC/T 202—2006[19]方法测定雪茄烟叶中多酚类物质含量。

1.3.5 化学成分含量测定方法

总糖、还原糖、淀粉、总氮、烟碱、蛋白质含量采用流动分析法测定[20]。

1.3.6 感官质量评价方法依据《YC/T415—2011 烟草在制品感官评价方法》进行感官评吸鉴定[21]。

1.4 数据分析处理

采用Microsoft Excel 2007 进行数据整理及作图，运用SPSS 21.0 分析数据。

2 结果

2.1 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶含水率的影响

由表1 可知，随着晾制时期的推移，各处理雪茄烟叶含水率均呈下降趋势。处理间相比较，烟叶含水率整体表现为T2＞T3＞T1＞CK，且整个晾制时期T2 与CK 处理均达到了显著差异水平，表明了喷施一定量的外源褪黑素溶液对调控晾制过程中雪茄烟叶水分散失有一定影响。在晾制前期各处理烟叶含水率降幅稍平缓，而变黄后期至定色阶段各处理雪茄烟叶含水率下降较快，其中以T1 处理降幅最大，T3 处理降幅最小，各处理降幅分别为56.13%（CK）、58.15%（T1）、48.43%（T2）和47.46%（T3），之后各处理失水速率又趋于平缓。因此整个晾制时期，雪茄烟叶的失水速率呈现出“慢-快-慢”的变化，表明了变黄后期至定色期是烟叶水分散失的关键阶段。

表1 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶含水率的影响Tab.1 Effects of exogenous melatonin on moisture content of cigar tobacco leaves during air-curing stage

2.2 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶MDA 和脯氨酸含量的影响

由图1A 可知，晾制期间各处理雪茄烟叶MDA 含量随着晾制时期的推移总体呈上升趋势。处理间相比，随着褪黑素浓度的增加MDA 含量而呈先下降后上升的变化，凋萎期（S2）后，4 个处理MDA 含量差异逐渐增大，相同时期内MDA 含量以T2 处理最低，CK 处理最高，T1 与T3 处理居中，至干筋期（S5）时，各处理MDA 含量相较晾制初期（S1）分别升高2.81（CK）、2.20（T1）、2.02（T2）和2.17（T4）倍，以T2 处理含量最低，这说明T2 处理外源褪黑素溶液浓度更利于降低晾制期间膜脂过氧化程度。

图1 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶MDA(A)和脯氨酸(B)含量的影响Fig.1 Effects of exogenous melatonin on MDA(A) and proline(B) contents of cigar tobacco leaves during air-curing stage

晾制期间各处理雪茄烟叶脯氨酸含量变化相一致，均呈先升高后降低的变化趋势（图1B）。在S1时期，各处理脯氨酸含量均处于较低水平，且均未达到显著差异；之后脯氨酸含量迅速增加，至S3 时期各处理脯氨酸含量达到峰值，CK、T1、T2 和T3 处理分别为0.43 μg/mg、0.56 μg/mg、0.62 μg/mg 和0.51 μg/mg，且处理间均达到了差异显著；之后含量略有下降，至S5 时期含量趋于稳定。整个晾制期间，T2处理脯氨酸含量均最高，CK 处理最低，并且二者始终达到显著差异水平。因此，喷施合适浓度褪黑素溶液对雪茄烟叶脯氨酸含量的积累具有促进作用。

2.3 雪茄烟叶含水率与膜脂过氧化水平的相关性

对晾制过程中雪茄烟叶含水率与烟叶膜脂过氧化水平进行相关分析，由表2 可知，不同处理雪茄烟叶含水率与膜脂过氧化水平呈极显著负相关，且相关系数均较高，表明雪茄烟叶含水率的降低与膜脂过氧化水平升高紧密相关。

表2 晾制过程中烟叶水分与膜脂过氧化水平的相关分析Tab.2 Correlation analysis between leaf moisture and lipid peroxidation level during air-curing stage

2.4 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶抗氧化酶活性的影响

POD、CAT、SOD 和PPO 是植物体内的主要抗氧化酶，其活性的高低对植物抗氧化能力有重要影响。不同处理雪茄烟叶POD 和CAT 活性变化相同（图2A和图2B），呈单峰变化趋势，均在S3（变黄后期）达到峰值。其中4 个处理POD 活性在变黄后期分别比晾制初期升高了1.92（CK）、2.19（T1）、2.18（T2）和1.81（T3）倍，之后POD 活性开始降低，凋萎期（S2）后T2 处理POD 活性始终大于其它处理，除S5 时期外均达到了显著差异；T1 与T3 处理活性居中，二者无显著差异，但均与CK 处理达到了显著差异。各处理CAT 活性也在S3 时期达到峰值，此时CK、T1、T2 和T3 处理CAT 活性分别为904.18 U/g、1032.83 U/g、1183.89 U/g 和1065.33 U/g；处理间相比，烟叶从凋萎期（S2）至定色期（S4），T2 处理CAT 活性一直保持较高水平，与CK、T1 和T3 达到了差异显著，而T1 与T3 二者之间未达到显著差异，但均显著高于CK 处理。

图2 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶POD(A)、CAT(B)、SOD(C)、PPO(D)活性的影响Fig.2 Effects of exogenous melatonin on the activities of POD(A), CAT(B), SOD(C) and PPO(D) in cigar tobacco leaves during air-curing stage

图2C 显示，不同处理SOD 活性均呈下降趋势，至干筋期（S5）活性最低。整个晾制期间各处理SOD活性降幅分别为88.63%（CK）、75.09%（T1）、65.82%（T2）和73.74%（T3），其中以CK 处理降幅最大，T2 处理降幅最小。整个晾制期间，SOD 活性以CK 处理最低，与其它3 个处理均达到差异显著，T2 处理SOD 活性高于T1 和T3 处理，除S4 时期外均达到显著差异水平。由图2D 可知，各处理PPO 活性在晾制过程中呈先升高后降低的变化趋势，于凋萎期（S2）活性最高，此时CK、T1、T2 和T3 处理相较S1 时期分别升高了4.46%、29.99%、35.89%和17.60%。晾制期间PPO 活性始终以T2 处理最高，T1 和T3 处理次之，CK 处理最低；T2 处理除S4 时期与T1 未达显著外，其余时期均与T1 和T3 处理达到差异显著水平。总体而言，在不同处理下4 种抗氧化酶活性总体以T2处理活性最高，T1 和T3 处理活性居中，CK 处理活性最低，表明了喷施不同浓度的外源褪黑素对雪茄烟叶抗氧化能力影响显著。

2.5 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶多酚类物质含量的影响

晾制期间雪茄烟叶主要多酚类物质有绿原酸和芸香苷，在喷施不同浓度外源褪黑素溶液的影响下其含量如图3 所示。由图3A 可知，绿原酸含量随着晾制时期的推移呈先上升后下降的变化，在凋萎期（S2）达到最高，此时各处理绿原酸含量分别为3.13 mg/g（CK）、3.95 mg/g（T1）、3.55 mg/g（T2）和3.75 mg/g（T3）。晾制初期4 个处理绿原酸含量并无差异，S2至S4 时期含量迅速降低，此阶段4 个处理绿原酸含量整体表现为T3＞T1＞T2＞CK，且CK、T2 和T3 均达到差异显著；至S5 时各处理绿原酸含量最低，此时T1、T2 和T3 处理之间差异不显著，但均显著高于CK 处理。由图3B 可知，晾制过程中芸香苷含量也呈现先升高后下降的变化，其中CK 处理芸香苷含量在S2 时期最高，为1.19 mg/g，而T1、T2 和T3 处理芸香苷含量均在S3 时期最高，分别为1.47 mg/g、1.36 mg/g和1.54 mg/g。在晾制过程中T1、T2 和T3 处理芸香苷含量除S3 时期外差异均不显著，但3 个处理均与CK 达到显著差异，表明了喷施外源褪黑素可减缓芸香苷含量的降解，但外源褪黑素溶液的浓度对芸香苷含量的影响较小。

图3 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶绿原酸(A)和芸香苷(B)含量的影响Fig.3 Effects of exogenous melatonin on chlorogenic acid(A) and rutin(B) content in cigar tobacco leaves during air-curing stage

2.6 外源褪黑素对晾制后雪茄烟叶化学成分的影响

由表3 可知，随着外源褪黑素浓度的增加总糖和还原糖含量呈先升高后降低的变化，总糖含量变化范围在0.84%～1.60%，还原糖含量变化范围在0.61%～0.84%，处理间除T1 与T3 处理无显著差异外，其它处理均达到显著差异。与总糖和还原糖含量变化相反，淀粉含量呈先下降后上升的变化，T2 处理含量最低，CK 含量最高，且CK 与其它处理均达到差异显著，表明适宜浓度的外源褪黑素能促进雪茄烟叶淀粉的降解，有利于糖含量的积累。蛋白质含量表现为CK＞T1＞T3＞T2，处理间差异较显著，这可能是因为膜脂过氧化水平不同影响了氮代谢相关酶活性，导致蛋白质在晾制期间降解程度不同[22]；总氮和烟碱含量处理间差异不显著。氮碱比作为烟叶感官质量的重要指标，比值越接近1 烟叶质量越优。本研究中，氮碱比的变化范围为1.11～1.28，其中CK 处理显著高于其它3个处理。糖碱比表现为T2＞CK＞T1＞T3，表明喷施合适浓度的外源褪黑素，有利于改善晾制期间雪茄烟叶碳氮代谢，促进内在化学成分更为协调地转化。

2.7 外源褪黑素对雪茄烟叶感官质量的影响

由表4 可知，喷施外源褪黑素处理的雪茄烟叶感官质量均好于CK 处理，不同浓度外源褪黑素处理的雪茄烟叶香气质、香气量、刺激性、甜度和总分呈现先升高后降低的趋势。表明晾制期间喷施浓度为120 μg/mL 的褪黑素溶液（T2）有利于提升雪茄烟叶的感官质量，主要特征表现为香气质好、香气量足、刺激性小及甜度好。

表4 外源褪黑素对雪茄烟叶感官质量的影响Tab.4 Effects of exogenous melatonin on sensory quality of cigar tobacco leaves

3 讨论

3.1 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶膜脂过氧化水平的影响

雪茄烟叶的晾制是利用光、水、热等自然资源，使烟叶内部缓慢脱水，进行生理生化反应的过程[23]。晾制期间，雪茄烟叶的自身衰老使叶肉细胞中活性氧自由基的产生与清除失衡，自由基的积累将导致膜脂过氧化反应的启动，膜的透性增加，膜结构被破坏[24]。丙二醛（MDA）作为植物膜脂过氧化反应的重要产物，其含量可反映植物膜脂过氧化程度[25]。本研究发现，晾制期间各处理雪茄烟叶MDA 含量均呈上升趋势，是因为随着晾制时间的推移，烟叶凋亡逐渐加深，导致膜脂过氧化程度加大，MDA 含量逐步积累。处理间相比，CK 处理MDA 含量显著高于喷施外源褪黑素处理，过高或过低浓度的外源褪黑素缓解膜脂过氧化效果下降，MDA 含量高于适宜浓度的T2 处理。这是因为外源褪黑素在烟叶体内具有较好的抗氧化作用，对缓解烟叶在逆境条件下的伤害具有重要作用[26]，但褪黑素浓度过低对提高植物抗胁迫能力较弱，而褪黑素浓度过高可改变其它蛋白的氧化性，对植物的正常生命活动同样有抑制作用[27]。雪茄烟叶在晾制期间，由于烟叶内部水分的散失，导致细胞膜发生皱缩、破裂，最终被完全氧化，因此烟叶含水量与细胞膜脂过氧化程度关系密切[3]。黄山等[28]研究发现，调制期间烤烟K326和红花大金元的含水率大幅下降与MDA含量大幅度升高同时发生。本研究结果表明，各处理雪茄烟叶在变色至定色阶段含水率降速加快，此时MDA含量增速加快，处理间相比，当烟叶MDA 含量较高时，其含水量较低。相关性分析表明，不同处理条件下烟叶含水率与MDA 含量均呈极显著负相关，且整体相关系数较高，说明随着晾制的进行，雪茄烟叶含水率逐渐降低，伴随着MDA 含量的逐步升高，该结果进一步证明了二者之间的相关性，且本结果与赵松超等[29]的研究结果基本一致，说明了晾制期间烟叶水分的散失程度是导致MDA 含量升高的重要原因[30]。

3.2 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶渗透调节物质的影响

脯氨酸作为植物的重要渗透物质，在稳定大分子物质结构以及清除细胞内活性氧自由基等方面都发挥着重要作用[31-32]。谢良文等[33]研究发现，烤烟在烘烤过程中脯氨酸含量呈现出先升高后降低的趋势。本研究结果呈现出相似的变化规律，在变黄后期达到峰值。这是由于晾制开始时烟叶水分缺失造成生理状态失衡，此时通过合成更多的脯氨酸等渗透调节物质可维持烟叶内部的代谢平衡[34]。而在烟叶变色阶段，脯氨酸作为美拉德产物的重要前体物参与棕色化反应，造成了其含量的相对降低[35]。与CK 处理相比，晾制期间施加不同浓度外源褪黑素处理的雪茄烟叶脯氨酸含量均显著提高，且随着褪黑素浓度的增加脯氨酸含量先升高后降低。说明晾制期间喷施外源褪黑素能增强脯氨酸合成相关酶类的活性[36]，但褪黑素浓度超过阈值时，将会对烟叶内部脯氨酸的合成产生一定抑制作用。

3.3 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶多酚类物质的影响

多酚类物质是雪茄烟叶中重要的次生代谢物，其含量对雪茄烟叶的色泽、抗氧化能力以及香吃味都有重要影响[37]。前人研究发现，晾制期间雪茄烟叶多酚类物质被降解，其含量整体呈下降趋势[38]。本研究表明，多酚类物质含量在晾制期间表现出先升高后降低的变化。其含量在晾制前中期的升高可能是由木质素发生热解反应所导致[39]，晾制后期由于膜脂过氧化程度的加剧，活性氧自由基含量的增多，并且PPO 还保持着一定活性，因此多酚类物质在PPO 以及活性氧分子的双重作用下含量持续降低[40]。其中绿原酸含量在凋萎期后迅速降低，这与PPO 活性在凋萎期达到峰值有关。晾制期间芸香苷含量变化与绿原酸略有差异，虽然其含量也呈先升高后降低的变化趋势，但由于棕色化反应主要以绿原酸为底物[41]，因此芸香苷含量的峰值相较绿原酸后移。处理间相比，CK 处理多酚类物质含量均低于其它处理，并且该处理芸香苷含量的峰值也早于其它处理，这主要是因为褪黑素能诱导烟叶体内抗氧化酶活性增强，有效清除活性氧，保持了烟叶内在稳定性，缓解了部分多酚类物质与自由基作用[42]。不同浓度褪黑素处理下的绿原酸与芸香苷含量以T2 处理最低，主要是因为该浓度下烟叶内部环境最为稳定，PPO 活性最高，促进了多酚类物质的氧化。同时，绿原酸与芸香苷的氧化也是雪茄烟叶褐变的主要原因，但由于烟叶褐变过多或褐变不充分均不利于烟叶的定色，也不利于提升烟叶品质；因此，喷施适宜浓度的外源褪黑素能减少多酚类物质被活性氧氧化，促进多酚类物质充分转化，对提高雪茄烟叶的品质有重要意义。

3.4 外源褪黑素对晾制期间雪茄烟叶抗氧化酶活性的影响

PPO 存在于烟叶叶绿体中，是烟草抗病机制中一种重要的防护酶，同时也直接参与烟叶酶促棕色化反应，晾制期间适当提高PPO 活性不仅能提高雪茄烟叶的抗病性，也对雪茄烟叶品质提升起到关键作用[43]。本研究结果表明，晾制期间各处理PPO 活性均呈先升高后降低的变化。这可能是由于PPO 活性与烟叶含水率紧密相关[44]，晾制初期烟叶水分散失，致使活性氧自由基积累，细胞膜被破坏[43]，导致细胞中的自由水向叶绿体内流动，PPO 所在环境的水分相对升高，促进PPO 活性升高，晾制后期由于烟叶水分迅速散失，使其活性快速降低。处理间，由于烟叶含水率的差异，导致PPO 活性主要表现为T2 处理最高，T1 和T3 处理居中，CK 处理最低。

POD、CAT、SOD 普遍存在于植物中，是植物体内活性氧自由基清除机制的关键酶，对提高植物的抗逆能力发挥着重要作用[45]。本研究发现，晾制过程中POD 和CAT 活性呈先升高后降低的变化，而SOD 活性呈下降趋势，这可能是由于晾制期间烟叶内活性氧自由基逐渐积累，膜脂过氧化水平逐渐加强，烟叶酶促防御系统被激活，诱导POD 和CAT 活性升高，以清除烟叶内多余的活性氧自由基，从而减轻逆境胁迫带来的伤害[46]，而SOD 活性与植物衰老关系密切，晾制过程又是雪茄烟叶的二次衰老过程[47]，因此SOD 活性在晾制期间逐渐降低。处理间相比较，喷施不同浓度褪黑素处理的POD、CAT、SOD 活性较CK 处理显著加强，这可能是由于褪黑素通过加强雪茄烟叶体内抗氧化酶相关基因的表达，提高了相关酶活性，从而增强了烟叶对活性氧自由基的清除能力[48]。然而随着褪黑素浓度的升高，3 种酶活性呈先升高后下降的变化，这是因为褪黑素浓度过低促进作用弱，浓度过高则抑制了烟叶正常代谢活动[49]。

本研究通过测定抗氧化酶活性等指标表明了外源褪黑素处理能提高晾制期间雪茄烟叶的抗氧化能力，并且在一定程度上延缓了烟叶的衰老，但由于取样时间的限定，以及未收集晾制期间不同处理烟叶状态的图片，因此喷施外源褪黑素处理能否延长雪茄烟叶的晾制时间有待进一步研究，在后续的研究中将进一步细化晾制时期，结合烟叶色差、烟叶状态图片，为褪黑素对延缓晾制期间雪茄烟叶衰老进程提供更为客观的依据。

4 结论

雪茄烟叶在晾制期间，喷施不同浓度外源褪黑素处理下烟叶POD、CAT 和PPO 活性均呈先升高后下降趋势，而SOD 活性呈下降趋势；烟叶含水率呈降低趋势，MDA 含量逐渐升高，脯氨酸含量呈先升高后降低的变化趋势，在变黄后期达到峰值。处理间相比，喷施外源褪黑素处理能显著减少MDA 的积累，提高脯氨酸和烟叶水分含量，维持了晾制期间雪茄烟叶的渗透调节平衡，同时提高了抗氧化酶活性，增强了烟叶的抗氧化能力，其中褪黑素浓度在120 μg/mL 条件下，烟叶抗氧化能力最好，烟叶多酚类物质降解充分，晾制后烟叶化学成分更协调。