巴迪泰（广西）C1500 全自动化学发光免疫分析仪检测血浆D- 二聚体的性能评估

韦嫔（通信作者），梁亚运，陆建伟，李康，庄子槟，李登红，王洪涛

1 巴迪泰（广西）生物科技有限公司 （广西南宁 530031）；2 广西中医药大学第一附属医院 （广西南宁 530022）

D-二聚体临床主要用于诊断肺栓塞和深静脉血栓[1-5]，对弥散性血管内凝血（disseminated intr-avascular coagulation，DIC）、恶性肿瘤、脑血管疾病和肝脏疾病等也具有重要诊断意义[6-9]。巴迪泰（广西）生物科技有限公司采用磁微粒化学发光法检测血浆中的D-二聚体，16.8 min 即可得到结果，为保证结果的可靠性，本研究使用巴迪泰（广西）C1500 全自动化学发光免疫分析仪及其配套的试剂和校准品、质控品进行关键性能验证，对精密度、准确度、线性范围、空白限、抗干扰进行验证[10-11]，同时与思塔高的STA Compact Max凝血分析仪的临床样本检测结果进行相关性验证，现报道如下。

1 资料与方法

选取广西中医药大学第一附属医院2022 年11—12 月心血管内科的75 例枸橼酸钠抗凝血浆样本为研究对象。采用巴迪泰（广西）C1500 全自动化学发光免疫分析仪，原装配套的D-二聚体试剂，D-二聚体质控品，D-二聚体校准品，试剂均在有效期内。思塔高STA Compact Max 凝血分析仪，原装配套的D-二聚体试剂，试剂均在有效期内。

1.1 方法

采用巴迪泰（广西）C1500 全自动化学发光免疫分析仪及其配套的试剂和校准品质控品进行精密度、准确度、线性范围、空白限和抗干扰的评估；同时选取广西中医药大学第一附属医院2022 年11—12 月心血管内科的75 例经枸橼酸钠抗凝的静脉血浆样本，采用巴迪泰C1500 全自动化学发光免疫分析仪检测样本中的D-二聚体，并与思塔高STA Compact Max 凝血分析仪检测结果进行相关性验证，具体如下。

1.1.1 批内精密度验证

根据相关行业标准[10]，取正常和异常浓度水平的质控品，按常规方法重复检测10 次，计算检测结果的平均值M和标准差SD，按以下公式计算变异系数（coefficient of variation，CV），若正常和异常质控的CV不大于10.0%，则验证通过。CV=SD/M×100%式中，SD为10 次测量结果的标准差，M为10 次测量结果的平均值。

1.1.2 准确度验证

将1 ml D-二聚体人源阴性血浆样本平均分为3 份，并标记为1 号、2 号、3 号样本。在2 号样本中加入0.1 ml 的3.65 μg/ml 的DD 标准液，混匀制备成待回收分析样本1；在3 号样本中加入0.1 ml的35.23 μg/ml 的DD 标准液，混匀制备成待回收分析样本2。在1 号样本中同样加入0.1 ml 的无待测物的人源阴性血浆 （广西中医药大学第一附属医院）作为基础样本。用C1500 全自动化学发光免疫分析仪及配套试剂对待回收分析样本和基础样本分别进行测试，每个样本测试3 次并计算平均值，然后按以下公式计算回收率，如果回收率为[85.0%，115.0%]，则验证通过。加入浓度n=标准液浓度n×[标准液加入体积/（样本体积+标准液体积）]。式1：A=（B-C）/D×100%；其中，A 为回收率n，B 为测定待回收分析样本浓度均值n，C 为测定基础样本浓度均值；D 为加入浓度n。式2：A1=（B1+B2+…+Bn）/C×100%，其中，A1为平均回收率，B 为回收率n，C 为回收率测试样本总数。

1.1.3 线性范围验证

根据相关行业标准和文件[10-11]，取1 份D-二聚体值接近线性范围上限的血浆作为高值（H）样本（20.64 μg/ml）和1 份接近线性范围下限的血浆作为低值（L）样本（0.11 μg/ml），按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H 和4H 的比例配制5 份标本，将标本按浓度由低到高，再由高到低进行测试，2 次测试结果的平均值即为实测值。按稀释比例计算各样本的理论值，再按以下公式对实测值和理论值进行回归分析，若线性回归方程的斜率K在1±0.05 范围内，相关系数r≥0.975，且稀释后标本实际测试值与其理论值百分偏差≤15%，则验证通过[10]。

式中X 为测定的浓度均值，Y 为与测定浓度相对应的理论浓度。

1.1.4 空白限验证

重复测定零浓度校准品20 次，得出20 次测定的相对发光单位（RLU），计算RLU 值的平均值M和标准差SD，得出（M+2SD）对应的RLU 值。同时测定相邻浓度的校准品（主校准品S1），重复测试3 次，计算3 次测试结果的均值M，先将零浓度与相邻校准品之间的浓度-RLU 值进行两点回归拟合得出一次方程，再将（M+2SD）的RLU 值带入进行计算，得出对应的浓度，就是空白限的值。

1.1.5 抗干扰验证

选用线性范围内的低、高浓度血浆样本作为基质样本，各测试3 次，计算平均值；再将其分为4 份，其中3 份分别添加不同浓度的干扰物质（血红蛋白、胆红素、三酰甘油）。分别测试3 次，计算平均值。若测定结果均值介于基质样本 ±10.0%范围内，则判为无显著干扰。若测定结果均值超出规定范围，则判为存在显著干扰。按以下计算方式计算添加干扰物后测值与未添加样本测值的偏差。偏差=（加入干扰物结果-未加干扰物样本结果）/未加干扰物样本结果×100%。

1.1.6 临床样本相关性验证

随机选取广西中医药大学第一附属医院2022年11—12 月心血管内科的75 例经枸橼酸钠抗凝的静脉血浆样本，采用巴迪泰C1500 全自动化学发光免疫分析仪检测样本中的D-二聚体水平，并与医院采用思塔高STA Compact Max 凝血分析仪检测的结果进行相关性验证，若r＞0.975，则认为2 种检测方法相关性较好。

2 结果

2.1 批内精密度验证结果

正常和异常浓度水平质控品重复性验证CV分别为4.04 %和2.96 %，验证通过，性能满足要求，见表1。

表1 批内精密度验证结果（μg/ml）

2.2 准确度验证结果

两个分析样本的回收率分别为104.57%和101.10%，平均回收率为102.83%，均在[85.0%，115.0%]范围内，准确度验证通过，见表2。

表2 准确度验证结果（μg/ml）

2.3 线性范围验证结果

以理论值为横坐标，实测值为纵坐标，进行直线回归分析，D-二聚体水平为0.11～20.64 μg/ml，线性范围良好，R2=0.9991，r=0.99953，相关方程为y=0.9588x+0.0613，斜率K为0.9588，实测值与理论值的百分偏差均小于15%，故验证的线性范围为0.11～20.64 μg/ml，满足厂家说明书要求，验证通过，见表3 和图1。

图1 线性验证结果

表3 线性范围验证结果

2.4 空白限验证结果

空白限验证结果为0.002 μg/ml，符合产品说明书对空白限不高于0.100 μg/ml 的规定，验证通过，见表4。

表4 空白限验证结果

2.5 抗干扰验证结果

高低浓度样本中胆红素≤40 mg/dL、血红蛋白≤150 mg/dL、三酰甘油≤1 000 mg/dL 时，与未添加组的偏差均在±10.0 %范围内，因此胆红素≤40 mg/dL、血红蛋白≤150 mg/dL、三酰甘油≤1 000 mg/dL 对D-二聚体测试结果无显著干扰，见表5。

2.6 临床样本相关性验证结果

巴迪泰（广西）D-二聚体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）与思塔高D-二聚体定量检测试剂盒（免疫比浊法）测试75 例枸橼酸钠抗凝血浆结果的一元线性回归方程为y=0.9158x-0.1529，r=0.9925 ＞0.975，2 种检测方法相关性较好，如图2 所示。

图2 两种检测方法结果的线性相关图

3 讨论

血液中D-二聚体水平检测方法包括胶体金免疫渗透法、乳胶凝集法、酶联免疫法、免疫比浊法、免疫荧光法、化学发光免疫分析法等。胶体金免疫渗透法和胶乳凝集法由于为定性或半定量检测，结果差异较大，且不适用于大批量检测，目前已逐渐被淘汰；酶联免疫法操作复杂且检测时间较长；免疫荧光法易受本底荧光干扰而精密度不高；免疫比浊法易受黄疸、乳糜等样本干扰，这些局限性导致这些方法临床使用受限[12-14]。化学发光免疫分析法灵敏度高、线性范围宽，可自动化批量分析，已广泛应用于临床。

巴迪泰（广西）采用磁微粒化学发光免疫分析夹心法，使用碱性磷酸酶和生物素标记D-二聚体抗体，在与待测标本中的D-二聚体发生反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体的夹心复合物，经清洗液洗涤后，加入AMPPD 底物，AMPPD 底物在碱性磷酸酶的催化下发射光子，产生的光子数量与样本中D-二聚体水平成正比。通过计算机数据处理系统的RLU 校准曲线，即可计算出样本中D-二聚体的水平。此测试方法只需10 μl 样本量且16.8 min 即可出结果，空白限可以达到0.002 μg/ml，线性可达0.11～20.64 μg/ml，重复性验证的变异系数CV分别为4.04 %和2.96 %。本研究结果显示，巴迪泰（广西）C1500 全自动化学发光免疫分析仪检测血浆D-二聚体的精密度、准确度、线性、空白限验证均通过；胆红素≤40 mg/dl、血红蛋白≤150 mg/dL 和三酰甘油≤1 000 mg/dl 对D-二聚体测试结果无显著干扰；测试75 例临床样本与思塔高STA Compact Max 凝血分析仪检测结果的相关系数r=0.9925，2 种检测方法相关性较好。

综上所述，巴迪泰C1500 全自动化学发光免疫分析仪检测血浆D-二聚体的性能可达到实验室质量要求，满足临床应用需求。