超声造影与乳腺癌组织中BRMS1、ING4 表达的相关性研究

陈金笑，王瑶，柯林燕

乳腺癌的发病率和死亡率在女性恶性肿瘤中位列首位。超声检查是临床进行乳腺筛查的首选方式，虽可及时发现病灶，但鉴别性质有所不足。超声造影通过增强血液和气体声阻抗差[1]，清晰显示病灶的灌注模式显示度，从而提高病灶良恶性的诊断能力。生长抑制因子4（ING4）是主要发挥抑癌基因功能、抑制肿瘤血管新生和促进肿瘤细胞凋亡的重要生长抑制因子，可参与调控恶性肿瘤细胞的周期、凋亡等过程。唐卉等[2]指出，乳腺癌转移抑制基因（BRMS1）的表达直接参与乳腺癌发生及进展，其表达水平与临床病理分期和淋巴结转移均呈负相关，不仅可抑制机体乳腺癌细胞的远处转移，而且还能参与其他恶性肿瘤细胞的远处转移。基于此，本研究旨在探讨超声造影与乳腺癌组织中BRMS1、ING4 表达的关系，为乳腺癌临床干预提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年2月至2023年2月丽水市人民医院收治的乳腺癌患者68 例，设为乳腺癌组，年龄30 ～60 岁，平均（38.4±4.3）岁；肿块大小（10.30±9.75）mm。另选同期收治的68 例乳腺良性肿瘤为对照组，年龄25 ～58 岁，平均（36.3±5.3）岁；肿块大小（10.00±10.23）mm，且每位患者均仅单乳1个结节。所有患者均签署了相关知情同意书，且本研究经丽水市人民医院科研伦理委员会审批通过。

乳腺癌组纳入标准：（1）符合乳腺癌诊断标准[3]；（2）首次确诊；（3）接受乳腺癌改良根治术。对照组纳入标准：（1）符合《乳腺疾病诊疗学》中乳腺结节诊断标准[3]；（2）行超声下微创旋切手术，病理学诊断为纤维瘤等良性结节；（3）触诊可触及乳腺结节。排除标准：（1）心肺功能异常；（2）合并其他恶性肿瘤；（3）超声造影图像不清晰或不完整；（4）处于哺乳期；（5）对超声对比剂过敏。

1.2 BRMS1、ING4 检测 对照组行超声下微创旋切手术。采用美国强生公司的麦默通（MaIIlIIlotome，MMT）真空辅助旋切系统，系统由远端微电脑控制。嘱患者取仰卧位，健侧上肢抓住对侧床头，使用日本日立（HITACHI）公司生产的HV VISION Preirus（大二郎神）超声诊断仪（频率3 ～10.0 MHz）扫查乳腺肿块及周围血管情况，用标记笔标明，尽量避免乳晕等血流丰富区域进针。在病灶约5 cm 范围行皮肤消毒、铺巾，使用注射器抽取5 ml 的1%盐酸利多卡因，在病灶周边进行局部麻醉。使用一次性尖刀切约3 mm 的微创切口，将旋切刀头（8 G）置于病灶深面，使头端凹槽完全对准病灶并调节至取样模式反复多次切割，切割完毕后使用抽吸模式将肿块和残腔渗血吸尽，抽出刀头，最后使用弹力绷带加压包扎伤口72 h。将旋切后的肿瘤送病理检查。

乳腺癌组接受乳腺癌改良根治术去除病灶。术中取病灶组织，经8% SDS-PAGE 电泳后转至PDVF膜，封闭非特异结合位点，加入BRMS1、ING4 一抗（1∶500），37℃温育2h，再加入二抗（1∶5000），37℃温育2 h，ECL 发光液显色。

1.3 超声造影检查 采用法国Aixplorer 新声威特种兼备诊断仪（生产厂家：SuperSonic Imagine 法国声科医疗有限公司；探头型号：12-5 浅表探头；超声波频率：4 ～15 MHz）。HFR CEUS 的对比剂采用意大利Bracco 公司的SonoVue（六氟化硫气体59 mg/瓶，白色冻干粉25 mg/瓶）。

使用常规超声对肿块进行连续多切面扫查，选取乳腺病灶血流信号最丰富的切面切换至CEUS模式。经肘正中静脉团注SonoVue 4.8 ml，随即推注5.0 ml 0.9%氯化钠注射液，同时启动图像存储功能，存储时间2 min，造影结束后将图像转存至移动硬盘。勾画2 个感兴趣区：病灶内增强最显著的区域和病灶周围同一深度的正常腺体组织。分析生成时间一强度曲线，比较曲线中达峰强度（PI）和曲线下方面积大小（AUC）。

CEUS 由2 名具有3年以上浅表疾病超声诊断经验的医师进行操作，操作结束后独立观看造影动态图像进行评估。若判断结果不一致，则由科内副主任医师盲审判断最终结果。CEUS 乳腺癌判断标准参考乳腺疾病超声检查质量控制专家共识（2019 版）[4]。

1.4 统计方法 采用SPSS 22.0统计软件进行分析，满足正态分布且方差齐的计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t 检验；相关分析采用Pearson相关性分析或Spearman 相关性分析。P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组和对照组BRMS1、ING4 相对蛋白表达水平比较 乳腺癌组患者BRMS1 和ING4 表达均低于对照组（均P ＜0.05），见表1。

表1 乳腺癌组和对照组BRMS1、ING4 相对蛋白表达水平比较

2.2 乳腺癌组和对照组超声造影参数比较 乳腺癌组患者PI 和AUC 超声造影参数均高于对照组（均P ＜0.05），见表2。

表2 乳腺癌组和对照组超声造影参数比较

2.3 BRMS1、ING4 蛋白表达与超声造影参数的相关性分析 BRMS1、ING4 蛋白表达与PI和AUC超声造影参数均呈负相关（均P ＜0.05），见表3。

表3 BRMS1、ING4 蛋白表达与超声造影参数的关系

2.4 乳腺癌不同临床分期患者BRMS1、ING4 蛋白表达比较 乳腺癌组中I～II期患者BRMS1、ING4蛋白均高于乳腺癌组中III ～IV 期患者（均P ＜0.05），见表4。

表4 乳腺癌不同临床分期患者BRMS1、ING4 蛋白表达比较

2.5 乳腺癌不同临床分期患者超声造影参数比较

乳腺癌组中I ～II 期分期患者PI 和AUC 超声造影参数均低于乳腺癌III～IV期患者（均P＜0.05），见表5。

表5 乳腺癌不同临床分期患者的超声造影参数比较

2.6 乳腺癌组患者BRMS1、ING4 蛋白表达和超声造影参数与临床分期的相关性 乳腺癌组患者不同临床分期与BRMS1、ING4 蛋白表达均呈负相关（r=-0.364、-0.471，均P ＜0.05），与PI、AUC 超声造影参数均呈正相关（r=0.671、0.586，均P ＜0.05）。

3 讨论

乳腺癌的发生、进展和侵袭机制涉及多基因和多阶段，超声造影可利用血流灌注的强度和血流消退的顺序，对病灶内微血管分布及灌注特征进行可视化呈现，具有实时和便捷的特点。

BRMS1 基因作为肿瘤转移抑制因子中的新兴因子，对恶性肿瘤起到抑制作用；ING4 基因编码的蛋白主要定位于细胞核内，可通过抑制缺氧诱导因子的表达而抑制肿瘤血管的新生，其蛋白表达缺失可与恶性肿瘤的发生和进展存在密切联系。因乳腺癌组患者中癌组织的不断增殖和进展，BRMS1 和ING4 蛋白对机体的恶性肿瘤起到抑制作用，所以蛋白表达低于乳腺良性肿瘤患者。在超声造影中PI、AUC 参数描述的是整个动态增强周期肿瘤组织对比剂浓度变化的趋势，可反映病灶组织的血流灌注和通透性。陈沛芬等[5]研究显示，乳腺癌患者在行超声造影检查时PI 和AUC 参数高于良性结节患者，这提示乳腺癌患者癌组织中的血流灌注高于良性结节，且与肿瘤特性所相吻合。本研究结果显示，乳腺癌组患者的BRMS1 和ING4 表达均低于对照组（均P ＜0.05），PI 和AUC 超声造影参数均高于对照组（均P ＜0.05），相关性分析显示，BRMS1、ING4 蛋白表达与PI 和AUC 超声造影参数均呈负相关（均P ＜0.05）。这说明造影的PI 和AUC 参数对评估乳腺癌患者具有一定的诊断意义。

肿瘤转移抑制基因指一些基因编码的蛋白酶，其能够直接或间接地抑制具有促进转移作用的蛋白，从而降低癌细胞的侵袭和转移的一类基因。BRMS1 已被反复证实在多种肿瘤中表达，并抑制肿瘤的远处转移。ING4 基因在大多数已被检测的正常组织中均有表达[6]，但在肿瘤组织中表达突变或者下调。乳腺癌是一种血管依赖性病变，癌细胞会向血液循环中释放，且因机体的新生血管缺乏肌层，管壁较薄且走形不规则，极易形成高速血流，超声造影检查所使用的对比剂为大分子物质，仅存在于机体血管内，并不会渗入细胞间隙内，因此在直接反映病灶血供状态的同时并不会受到细胞通透性的影响[7-9]。本研究结果显示，乳腺癌组中I ～II 期患者的BRMS1、ING4 蛋白均高于乳腺癌III ～IV 期患者（均P ＜0.05），PI 和AUC 超声造影参数均低于乳腺癌III ～IV 期患者（均P ＜0.05）；乳腺癌患者不同临床分期与BRMS1、ING4 蛋白表达均呈负相关，与PI、AUC超声造影参数均呈正相关（均P＜0.05）。这说明不同分级的乳腺癌，其造影指标参数也会有不同的变化，而造影指标参数也与BRMS1、ING4 蛋白具有一定的关系。

利益冲突 所有作者声明无利益冲突