一例蛋鸡传染性支气管炎的诊断与防治

文│刘婷婷 马妍 吕宗德（江苏省南京市畜牧兽医站）

朱冠全（江苏省扬中市三茅街道畜牧兽医站）

鸡传染性支气管炎（A v i a n infectious bronchitis）是由冠状病毒科冠状病毒属鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。其潜伏期短、发病快，具有非常强的传染性，雏鸡的死亡率可达30%及以上，但6周龄以上的死亡率很低。

该病一年四季均可发生，但在冬季和春季发生概率较高。该病主要通过呼吸道传播，也可通过饲料、饲喂用具、污染的饮水经消化道感染。此外，鸡群过于拥挤，鸡舍内温度太热或太冷、通风不畅、鸡群缺乏维生素和矿物质，以及饲料配比不当或饲料供应不足都会导致该病的发生。

各年龄的鸡都会发病，其中雏鸡的发病率最高，死亡率也高，多以40日龄以内的雏鸡最常见。雏鸡感染会继发其他病菌感染，以张口呼吸、发出啰音、咳嗽等呼吸道症状和生产性能下降为主要特征，临床上多表现为假母鸡、肾炎及产蛋量和蛋品质下降。产蛋鸡感染通常表现产蛋量降低，蛋品质下降。因为该病分为多种血清型，并会不断有新的变异株出现，给该病诊断及后期的治疗效果带来一定难度。此前，国内就有鸡传染性支气管炎病的报道，在不同地区均有发生，且鸡传染性支气管炎病毒的血清型众多，流行毒株也有地域差异。

一、发病情况

某蛋鸡养殖场190日龄海兰褐壳蛋鸡2.1万羽，开产后产蛋率一直上不去，最高仅达75%，蛋壳质量异常，次品蛋数量多、比例高，软壳蛋、沙皮蛋多见，破蛋率高。场内其他批次的蛋鸡开产后无此类情况发生。

经询问得知，该批次蛋鸡非本场育雏，引进的70日龄青年鸡。引入鸡群时供应商仅提供了育雏期间的免疫程序，并无相关免疫抗体检测证明，鸡场也未对鸡群开展相关疫病病原学抽检。

二、临床观察

鸡群整体精神状态良好，群体采食量略低于正常。部分鸡可见鸡冠硕大鲜红、羽毛光亮、体型健硕。解剖可见内脏器官无明显异常，但输卵管发育不全，大部分病鸡的输卵管纤细且薄，有的输卵管内含白色或透明的液体，并混有白色絮状物；有的输卵管内面形成盲端，与腹腔不通；有的输卵管成为只有5～7厘米的纤细柱状物。大部分病鸡的卵巢正常，个别病鸡的卵巢萎缩或变性。

三、实验室诊断

依据临床发病情况和病理剖检可初步判断该批蛋鸡在育雏早期感染了传染性支气管炎病毒，进一步确诊需进行实验室RT-PCR诊断。

1.样品的采集。无菌采集了4份公鸡特征明显的病鸡咽喉-肛门双拭子，放入盛有病毒保存液的离心管中，4～8℃冷藏箱保存，运送至实验室。

2.仪器与试剂。核酸提取仪（美国应用生物系统公司（ABI），型号：MagMAX Express）、荧光PCR仪（罗氏（Roche），型号：LightCycler 96）、病毒核酸提取试剂盒（美国应用生物系统公司（ABI），批号：01077982）、鸡传染性支气管炎病毒核酸测定试剂盒（北京森康生物科技有限公司，批号Q02-014-220520）。

3.试验方法。

（1）病毒RNA的提取。采用磁珠法进行核酸提取，具体操作方法如下：在96孔提取板中，A排孔中各加20微升Bead Mix，130微升Lysis/Binding Solution，50微升样品；B排孔和C排孔中各加入150微升Wash Solution 1；D排孔和E排孔中各加入150微升Wash Solution 2；F排孔中各加入50微升Elution Buffer。放入提取仪，选择试剂盒匹配的程序，按“START”键，结束后F排中吸取核酸样本。

（2）荧光RT-PCR扩增。选择25微升反应体系，每个PCR反应管内分别加入19微升荧光RT-PCR反应液、1微升酶混合物和5微升核酸样本，设置阴、阳性对照各1个，盖紧管盖，500转/分钟离心30秒。加样后的PCR管放入荧光PCR仪，记录样品位置。反应参数设置：

反转录42℃/15分钟；

预变性95℃/3分钟；

延 伸9 5 ℃/1 5 秒，5 3 ℃/1 0秒，60℃/30秒（采集荧光），循环40次。

选定F A M 检测通道读取检测结果。

4.结果判定。

（1）质控标准。阴性对照：无Ct值并且无扩增曲线；阳性对照：Ct值应≤32，并出现典型的扩增曲线。仅阴、阳对照同时满足以上条件时试验才成立。

（2）判定标准。无Ct值，且无特征性扩增曲线的样品判为阴性；Ct值应≤36，且出现典型的扩增曲线的样品判为阳性；Ct值＞36，且出现典型的扩增曲线的样品需进行复检，复检仍出现上述结果判为阳性，否则判为阴性。

（3）检测结果。阴、阳对照均成立，4份样品中有1份阳性，Ct值为32.08。说明该鸡群确实感染过鸡传染性支气管炎病毒，且目前还存在带毒的情况。

四、结果分析与处置

通过临床表现和实验室检测结果可判断，该鸡群在育雏阶段感染过鸡传染性支气管炎病毒，且鸡群仍然带毒，部分鸡只愈后输卵管发育不良，导致不可逆的损伤，所以鸡群产蛋率一直上不去。建议养殖场根据鸡只外貌特征及时将疑似假母鸡挑出单独饲喂，确认不产蛋后及时剔除，同时做好鸡群的隔离与消毒工作，避免病毒传播至其他鸡舍。

五、防治措施

1.鸡苗把控。选择从优质的种鸡场购买鸡苗，了解种鸡场动物疾病净化情况和流行病学情况；引入青年鸡的更要小心谨慎，了解育雏场的鸡苗来源、鸡群健康状况、预防用药情况，以及免疫过的疫苗，包括疫苗的名称、种类和免疫时间。有条件的养殖场引入前可开展相关疾病免疫抗体水平和常见病病原的抽检，以确保鸡群质量。

2.疫苗免疫。选择与当地流行毒株相匹配的疫苗开展鸡群免疫，雏鸡的基础免疫一定要选用活疫苗，加强免疫可用活疫苗和灭活疫苗联合免疫。蛋鸡传染性支气管炎病的免疫程序建议如下：1～3日龄，新支二联活疫苗1倍剂量滴鼻或点眼或喷雾免疫；20日龄，新支二联活疫苗1倍剂量滴鼻或点眼免疫；50～60日龄，新支二联苗2倍量饮水免疫；105日龄新支减流四联苗1倍量注射免疫；135日龄新支流三联苗1倍剂量注射免疫；以后每2个月做1次新支二联苗2倍量饮水免疫。

3.育雏管理。育雏前要对育雏鸡舍做好消毒工作，尤其是发生过鸡传染性支气管炎的鸡舍，至少要空舍2～3个月，彻底清扫消毒，减少持续感染的可能。做好育雏舍保温工作，湿度也要恒定，定期通风，防止有害气体浓度超标，控制好饲养密度，避免鸡群生存空间狭小、过挤。饲料营养要全面，配比要合理，不同日龄的鸡对营养的需求也不同，要根据生长情况及时做出调整，必要时可添加维生素或微生态制剂等营养物质，提高鸡群抵抗力。

4.消毒灭源。重视场内消毒工作，严格落实消毒制度。对进出人员、车辆、场内道路、器具、蛋筐及鸡舍内部都要定期开展消毒工作，场内至少配备2种消毒药，交替使用，并定期更换消毒药的种类。有条件的鸡场可以开展消毒效果试验，评估每次的消毒效果。