奶牛细管冻精人工授精技术要点

文│刘芬（西藏自治区拉萨市畜牧兽医总站）

欧珠措姆（西藏自治区墨竹工卡县扎雪乡人民政府）

人工授精在奶牛配种中被广泛应用，更多的是用于加速新品种扩繁，一般采用直肠把握输精法。

一、奶牛发情鉴定

人工授精过程中最基本的是要判断母牛是否发情和发情后母牛的最佳授精时间。有的母牛在发情后表现明显，有的母牛发情后表现不明显，甚至不会表现出发情症状，实际生产中常用无生育能力的公牛进行试情。

1.奶牛的发情特征。发情是母牛性活动的表现，大致分为3个时期：发情初期、发情盛期和发情末期，准确掌握发情规律是提高人工授精受胎率的关键。

（1）发情初期。母牛表现出兴奋不安、喜叫、反应敏感，喜欢爬跨其他牛，但不愿意让其他牛爬跨；阴门开始肿胀，流出鸡蛋清样、透明的黏液，黏性差；阴道壁充血而潮红。

（2）发情盛期。母牛接受爬跨，被爬跨时主动举尾拱背，四肢站立不动，排尿频繁；阴门肿大饱满，柔软而松弛，阴唇黏膜充血、潮红、有光泽，从阴道排出的黏液增多，像玻璃棒状，具有很强的牵缕性，俗称“吊线”，易黏着于尾根、臀端或后肢飞关节处的被毛上；子宫颈红润，颈口开张，约能容纳一个手指。

（3）发情末期。母牛性欲逐渐消失，转入平静期，不再接受爬跨，子宫颈口慢慢闭合；阴道黏膜充血、潮红现象逐渐消退，从阴道流出的黏液逐渐变白且浓厚黏稠，量减少，牵缕性差。

2.奶牛发情鉴定。确定母牛发情的方法称为发情鉴定，母牛发情鉴定的主要方法有外部观察法、直肠检查法和阴道检查法3种。

（1）外部观察法。发情早期，母牛阴门开始肿胀，阴门湿润，流出黏液量逐渐增多，呈丝缕状挂在阴门下方。发情末期，外阴部肿胀稍微减退，流出较黏的乳白色浑浊状黏液，此时是人工授精的最佳时期；再往后黏液量少并黏稠，逐渐从乳白色变为浅黄红色。如果观察到母牛排出较多的血液（俗称“排红”），通常在发情后的2～3天。

（2）直肠检查法。检查者穿好工作服，衣袖挽起，戴长臂手套，将五指并拢成锥形伸进母牛的直肠内，隔着直肠壁触摸检查卵泡的发育情况，以便确定配种时期。

（3）阴道检查法。用开腔器打开母牛阴道，借助一定光源观察阴道黏膜的色泽、黏液性状及子宫颈口开张情况，判断母牛发情程度。发情母牛阴道黏膜充血潮红，表面光滑湿润；子宫颈外口充血、松弛、柔软开张，排出大量透明、具有牵缕性的黏液，不易挂断。

二、细管冻精的解冻

冻精的解冻操作关系到配种后的受胎率。在掌握标准解冻操作的同时也应学会冻精活力的检测。如果因为冻精活力不达标，而我们又没有及时检测，也会对受胎率造成非常大的影响。

1.解冻前的准备工作。物品的准备：存放好冻精的液氮罐、长镊子、冻精剪刀、解冻杯、两只不同厂家的温度计、卫生纸、计时器、输精枪、输精枪外套等。

2.冻精的保存。冻精必须存放在充满液氮的生物容器（液氮罐）内。

3.冻精的解冻。

（1）在干净的解冻杯中加入适量的热水和凉水，插入两只不同厂家的温度计，搅拌均匀，将水温调至37～40℃。

（2）用长镊子从液氮罐内提取精液时，提桶的顶端提取高度要低于罐口8厘米，或者控制在霜白线以下。

（3）尽量在5秒钟内取出冻精细管，未能取出再放入液氮中至少10秒后重试；向另一液氮罐转移冻精时，提筒离开液氮面的时间不能超过5秒。

（4）水浴解冻的容器最好能将细管冻精横置，如果需将细管垂直放入，应将棉塞端朝下；取出冻精细管后轻甩尾部，或者在空气中停留2～3秒，然后放入解冻杯中解冻15～45秒。

（5）拿干净的纸巾或毛巾擦拭输精枪顶端，将输精枪温度预热到与体温接近，并贴身保存。

（6）将解冻好的细管冻精用纸巾（毛巾）包裹吸干水分，核对种公牛信息，将细管绵塞端插入预热好的输精枪内。

（7）用冻精剪刀将装好的细管冻精封口端水平剪开，注意不要剪错方向。

（8）将输精枪外套套在装好冻精的输精枪上，下拉使细管卡在枪套顶部，推动枪芯，使精液到达输精枪套顶端。

（9）将装好冻精的输精枪贴身存放，3～5分钟之内完成输精操作。

（10）注意事项：全程避光操作，防止紫外线杀死精子。

4.冻精的活力检测。冻精活力检测前期冻精解冻操作与授精解冻操作一致，区别在于检测冻精活力需要准备好显微镜、剪刀、载玻片、盖玻片等物品。在解冻前把显微镜的电源连接上，使恒温板预热到38℃左右，同时将载玻片和盖玻片也放在恒温板上预热。此时方可进行标准的解冻操作。

（1）将解冻好的细管冻精用纸巾（毛巾）吸干水分后平放，用冻精剪刀将细管前后三分之一处剪掉，留取细管中间三分之一段备用。

（2）将备用细管倾斜，一端精液流出，均匀地滴3滴在载玻片上，再将盖玻片从一端轻轻地压上去；将载玻片放在恒温板上平衡30秒左右。

（3）平衡好以后调整目镜，多寻找几个活力视野点，找到最佳活力视野，将3片盖玻片下方的活力都检测一遍。

（4）如果显微镜没有恒温板需提前预热，操作时间尽量在3分钟之内完成。

（5）普通常规冻精国家标准：冻精活力点35，畸形率小于18%，有效精子数不低于800万。达不到标准的为不合格产品。

（6）及时将检测结果进行登记存档。

作为学习资源的微课程，提升了资源的实用性.对学生而言，微课程可满足学生对不同知识点的个性化学习、按需选择学习，既可查缺补漏又能强化巩固知识，是传统课堂学习的一种重要补充和拓展资源.对教师而言，微课程既使得教师的备课、教学和反思方面的资源更具有针对性和实效性，又成为校本研修、区域网络和教师专业发展的重要途径.由于微课程具有灵活性，资源建成之后并非一成不变，而是呈现半开放的形态，在不断使用中动态更新，适应新的环境需求.

三、适时输精

（1）一般母牛发情的外部表现持续时间为18～24小时，排卵发生在发情结束后的6～12小时，精子在母牛生殖道的存活时间为12～20小时；卵子排出后能保证正常受精的时间为6～12小时。

（2）母牛适宜输精时间为发情后9～24小时，也可以在6～27小时内配种。

（3）凌晨或上午发情的牛可在下午或傍晚配种，下午或傍晚发情的牛可在第2天上午配种。约12小时后再次检查，必要时再次输精，有些发情持续时间长、排卵延迟的牛需第3次输精，以确保精卵能结合受精。

四、输精操作

1.输精操作原则。输精前对母牛和冻精进行检查鉴定，严格执行无菌操作规程，确定最佳输精时间，正确的解冻处理技术，细致准确的输精操作，做到“轻插、适深、慢推、缓出”，尽量缩短输精时间。

2.输精前的准备。

（1）物品的准备。存放好冻精的液氮罐、长镊子、冻精剪刀、解冻杯、两只不同厂家的温度计、卫生纸、计时器、输精枪、输精枪外套等。

（2）配种牛的准备。青年牛：13.5月龄以上，身高130厘米以上，体重380千克以上的发情牛；泌乳牛：头胎牛产后61天，经产牛产后51天以上的发情牛。

（1）先把母牛保定在配种架内，尾巴用细绳拴好拉向一侧。

（2）左手套上输精手套，涂上润滑剂或少量水，轻柔触摸肛门，使肛门肌肉松弛。

（3）并拢左手手指形成锥形插入母牛直肠，边塞边转动，以使手背和肛门周围充分润滑，触摸子宫、卵巢、子宫颈的位置。

（4）分次掏出粪便，清洗消毒母牛外阴。避免努责，避免与直肠蠕动相逆的方向移动，避免空气进入直肠引起直肠膨胀。

（5）左手插入母牛直肠向盆腔底部前后、左右探索子宫颈，纵向握在手中，手心朝右柔和握住子宫颈（宫颈外口在手中）。

（6）用前臂下压会阴，使阴门开张；也可先将阴唇掰开（或由助手协助），把输精器插入阴道后再将左手伸入直肠，这样输精器头部不会碰到阴唇外部，不易被污染。

（7）右手趁势将输精枪约向上40°角插入10～15厘米越过尿道口，再转为平插。

（8）向左手心中探插（可将宫颈靠在骨盆边，并轻轻挤压宫颈周围的阴道壁，使输精器只能进入子宫颈口，不会误入阴道穹窿），或将宫颈拉向阴道方，凭手指感觉将输精器套入子宫颈。

（9）插入颈口前扯出输精器薄膜防尘软外套。

（10）输精器进入子宫颈外口后，可用改变方向、回抽、摆动、滚动等方法向前探插。

（11）左手将子宫颈前端稍作抬高，并向输精器上套。

（12）感到畅通无阻后可触摸到输精器前端。

（13）向后抽退一点，勿使子宫壁堵住输精器尖端出口。

（14）缓慢地将精液注入子宫体与子宫角结合部。熟练者可注入排卵侧子宫角大弯处。

（15）轻轻抽出输精器，完成操作。

五、结语

综上所述，在奶牛配种中人工授精技术应用非常广泛，通常使用直肠把握输精法。在奶牛养殖过程中，使用人工授精技术可以迅速改良奶牛群基因库，还能对很多偏远地区的牛群进行品种改良，提高良种覆盖率；应用的精液量较少，一次公牛射精量可分成多份对母牛进行人工授精；购买精液不仅能选择优良品种，还可以减少公牛饲养数量，为养殖场节省成本；同时可以有效避免公母牛之间的接触，减少某些疾病通过直接接触、消化道或呼吸道等进行传播，有效控制疾病传播。本文着重介绍了奶牛细管冻精人工授精的技术要点，希望为该人工授精技术的快速推广提供支持，进而为奶牛养殖提供更好的技术支持。