XN1000-B4 全自动血液分析仪Q-Flag 报警在判断血小板聚集中的应用

张景逍，张晗钰（通信作者），张金彪

河北省沧州中西医结合医院 （河北沧州 061000）

自动化血液分析仪的可疑报警信号Q-Flag 是XN 系列血液分析仪提示标本异常并产生报警信息的根本原因，其原理是通过仪器在白细胞散点图的可疑区域抓点充池产生白细胞及血小板（platelet，PLT）相关报警值，并通过对红细胞部分参数的计算充池产生红细胞相关报警值[1]。图1为XN1000-B4 全自动血液分析仪Q-Flag 界面，包含10 个报警池，在分析标本后，每个报警池的下方均会显示该报警的充池数值（0～300），仪器默认Q-Flag 报警值超过100 时自动提示报警信息。而“PLT Clumps”报警值的产生则是通过在WDF、WNR 及高端机型的PLT-F 散点图的疑似PLT 聚集区域进行抓点充池（图2），若存在PLT-F 通道，则优先选取PLT-F 通道的充池数值作为最终结果，反之则选取WDF 及WNR 通道充池数值较高者作为最终结果。在日常检验工作中，对低值PLT 的纠正是检验科每天都会接触的工作，在影响PLT 数值的因素中，PLT 聚集是较常见的情况[2]。为了探究XN1000-B4 全自动血液分析仪“PLT Clumps”的Q-Flag 报警的临床应用价值，本研究对仪器报警信息与人工推片镜检结果进行比对分析，现报道如下。

图1 XN1000-B4 全自动血液分析仪Q-Flag 界面

图2 “PLT Clumps”报警在不同散点图中的抓点区域

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2021 年1—3 月我院的800 份低值PLT（PLT＜125×109/L）血常规标本，每份标本均为30 min内完成上机检测及人工推片镜检并相应记录了“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值及对应的PLT 聚集情况，其中，200 份为已完成人工推片镜检确定聚集的标本，用于研究镜检PLT 聚集阳性标本的Q-Flag 报警值分布情况；400 份随机标本用于进行灵敏度分析；200 份随机标本用于进行特异度分析。

1.2 仪器与试剂

仪器：XN1000-B4 全自动血液分析仪（日本希森美康株式会社）；Olympus CX31 显微镜（日本奥林巴斯株式会社）。试剂：瑞氏-吉姆萨复合染液，包含试剂A Wright-Giemsa 和试剂B 磷酸盐缓冲液（试剂A、B 均来自北京雷根生物技术有限公司）。

1.3 质量控制

采用XN1000-B4 全自动血液分析仪配套质量控制方法每日进行低、中、高3 个水平的监测，所有程序均符合国家卫生健康委员会临检中心的室间质量评价要求，待质量控制结果在控后进行标本检测。

1.4 标本选取及判断标准

标本选取：选用日常检测中的低值PLT（PLT ＜125×109/L）标本进行人工推片镜检，在标本膜上首先加入A 液（试剂A）使其完全覆盖标本膜，静置5 min 后加入B 液（试剂B）混匀（A 液与B 液的比例约为2 ∶1），静置10 min，自然风干，记录该标本“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值。

判断标准[3]：以血涂片片尾中每堆PLT 聚集数量＞20，且至少出现1 次，或每堆PLT 聚集数量＞10 且至少出现2 次，或每堆PLT 聚集数量＞5 且至少出现4 次为标准，判断标本PLT 的聚集会影响检验结果。

1.5 统计学处理

采用SPSS 25.0 统计软件分析数据。灵敏度研究中，5 组不同参数值阳性率的差异性分析采用R×Cχ2检验。Q-Flag 报警值对应PLT 聚集阳性率的变化采用趋势性χ2检验。此外，以1-特异度为横坐标，灵敏度为纵坐标绘制Q-Flag 报警值预测标本PLT 聚集情况的ROC 曲线，并得出最佳临界值及曲线下面积。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阳性标本的Q-Flag 报警值分布情况

200 份PLT 聚集阳性标本的Q-Flag 报警值分布于20～300 之间，见表1。

表1 PLT 聚集阳性标本的Q-Flag 报警值分布情况

2.2 Q-Flag 报警值在判断PLT 聚集中的灵敏度分析

收集“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值＞20 的标本进行人工推片镜检，选择400 份随机标本平均划分5 个区间，标本聚集情况见表2。将不同Q-Flag 报警值分组的PLT 聚集情况（阴性、阳性）进行χ2检验，结果显示，不同Q-Flag 报警值分组的PLT 聚集情况（阴性、阳性）比较，差异有统计学意义（χ2=97.547，P=0.000）；进一步进行两两比较，结果显示，30～90 组与100～140 组的检出阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），100～140 组与150～190 组的检出阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），150～190 组与200～240 组的检出阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05），200～240 组与≥250 组的检出阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；将Q-Flag 报警值30～90、100～140、150～190、200～240、≥250 组的阳性率进行趋势性χ2检验，结果显示，差异有统计学意义（趋势性χ2=0.494，P=0.000）；当Q-Flag 报警值≥250 时，PLT 聚集阳性的灵敏度为95.0%，见表3。

表2 Q-Flag 报警值＞20 时标本对应PLT 聚集的阳性情况

表3 5 组不同Q-Flag 报警值分组的阳性率比较[份（%）]

2.3 Q-Flag 报警值在判断PLT 聚集中的特异度分析

随机选取“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值＜30 的低值PLT 标本进行人工推片镜检，结果显示，Q-Flag 报警值＜20 时标本未发生PLT 聚集的特异度为100.0%，见表4。

2.4 Q-Flag 报警值对应PLT 聚集情况的ROC 曲线分析

以灵敏度及特异度分析选择的600 份随机标本汇总Q-Flag 报警值对应的PLT 聚集情况，绘制ROC 曲线，以Q-Flag 报警值预测PLT 聚集情况（阴性、阳性），结果显示，ROC 曲线下面积为0.900，标准错误a 为0.012，渐近显著性b 为0.000，渐近95% 置信区间为0.876 ～0.923，灵敏度为86.5%，特异度为75.6%，最佳临界值为100，见图3。

图3 Q-Flag 报警值预测PLT 聚集情况（阴性、阳性）的ROC 曲线图

3 讨论

XN 系列血液分析仪的自动化程度较高，操作简便，分析结果较为可靠，已被广泛用于全国各实验室。其中，自动化血液分析仪的报警信号可以为检验工作者做出标本异常的相应提示，从而用于复检规则中[4]。而仪器的异常报警提示均存在灵敏度和特异度，若检验工作者能将其掌握，则可减少日常推片复检的数量，节省工作时间，提高检验效率。

在血常规检验中，PLT 聚集可导致PLT 结果假性减低，从而给临床带来错误信息，导致误诊[5-6]。通常情况下，若标本不存在PLT 大片聚集情况，则可以发出检验报告。高值PLT 由于PLT 数量较多会出现不可避免的自发小堆聚集情况，因此实际工作中“PLT-Clumps”的Q-Flag 报警值普遍高于低值PLT，故对于正常值以上的PLT 聚集的研究意义有限。但是，低值PLT 的标本由于PLT 数量较少，其自发聚集的概率也较小，若不借助仪器报警信息的提示，则每份低值PLT 标本均需要接受推片复检排除干扰因素[7]。本研究在针对发生了PLT 聚集标本的Q-Flag 报警值的分布研究中，初步得到了200 份PLT 聚集阳性标本的Q-Flag 报警值分布于20～300 之间，通过将Q-Flag 报警值与PLT 聚集程度进行比对，发现PLT 大片聚集的标本Q-Flag 报警值均为300，但报警值＜300 的标本其报警值与PLT 聚集的程度不存在规律，因此当确定标本发生PLT 聚集时，无法根据“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值判断PLT 聚集程度[8]。

本研究在针对“PLT Clumps”的Q-Flag 报警灵敏度研究中，发现Q-Flag 报警值≥250 的76 份标本中，存在4 份未发生PLT 聚集，Q-Flag 报警值分别为270、290、300、300，在1 份Q-Flag 报警值为270 和1 份Q-Flag 报警值为300 的标本中发现了大PLT，纠正大PLT 后，实际值也高出了初始测定值，分析可能是仪器将大PLT 判定为小堆聚集的PLT 导致，另外2 份未见异常，但在后续的工作中同样挑选了100 份存在大PLT 的低值PLT 标本进行了分析，结果发现，Q-Flag 报警值的分布较为分散，无规律可循。故“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值越高，检验工作者越需警惕，仪器无法给出100%的灵敏度，异常标本均需要接受人工推片镜检排除干扰。在针对“PLT Clumps”的Q-Flag 报警特异度研究中，发现当“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值为0 或10 时，128 份低值PLT 标本均未发生聚集，从而得到当“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值＜20 时可认为血小板未发生聚集的结论。故在针对低值PLT 的检测中，如Q-Flag 报警值＜20，则可排除PLT 聚集，在排除其他影响因素后，无须人工推片镜检即可发出报告。ROC 曲线提示，判断PLT 聚集最佳临界值的Q-Flag 报警值为100，此时灵敏度与特异度尚可，并与仪器默认的报警值100 完全匹配。但是，本研究得出的最佳临界值及特异度的结论与曹科等[9]、李宝青等[10]的研究结果不一致，可能是本研究标本的选择为低值PLT 标本所致，可排除高值PLT 数量较多导致人工推片镜检的假阳性。

本研究因WDF 及WNR 通道适用于XN 系列血液分析仪的所有机型而选择XN1000-B4 全自动血液分析仪进行标本检测，由于仪器通道的原理不同，故本研究结论不适用于PLT-F 通道产生的Q-Flag 报警值，但PLT-F 通道产生的Q-Flag 报警值也一定存在其判断低值PLT 聚集的灵敏度及特异度，有待后续研究。在Q-Flag 报警值对应PLT 聚集的灵敏度研究中尚存在一些未知因素，影响着仪器的Q-Flag 报警值，从而导致Q-Flag 值达到250 以上但镜下未见PLT 聚集情况发生，还需进一步对未知因素进行研究以对灵敏度进行完善。

综上所述，通过XN1000-B4 全自动血液分析仪“PLT Clumps”的Q-Flag 报警值判断低值PLT标本是否发生PLT 聚集中具有较高的可行性，其应用不仅利于检验工作者提高工作效率，而且能更好地保证检验质量。