邯郸市女性高危型HPV感染情况分析

董志玲，王志刚，姚 利，陈朝英，胡 敏，王 蕾，*

(1.邯郸市中心医院，河北 邯郸 056002；2.邯郸市中西医结合医院，河北 邯郸 056005；3.邯郸市中心医院新兴院区，河北邯郸 056300)

宫颈癌是引起女性死亡的主要原因之一，2020年，全球大约有60.4万妇女被诊断为宫颈癌，其中约34.2万妇女因宫颈癌死亡。宫颈癌是23个国家最常见的癌症，也是36 个国家癌症死亡的主要原因。近年来，我国宫颈癌的发病率和死亡率均呈上升趋势，且趋于年轻化[1]。高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持续感染是引起宫颈癌变的主要原因[2-3]，尤其是HPV16 型和HPV18 型。宫颈癌是唯一个知道其病因的癌症，并可以通过三级预防进行清除的恶性肿瘤[4]。接种9 价HPV 疫苗可以有效预防HPV 感染，9 价HPV 疫苗直接针对7 种高危型HPV 基因型(HPV16、18、31、33、45、52和58)[5]。但由于疫苗价格昂贵，中国疫苗接种覆盖率仍然很低，在预防宫颈癌方面，筛查优先于疫苗接种[6]。目前，高危型HPV检测被用作早期发现宫颈癌的辅助诊断手段。

本文对64 317 例女性患者HPV 结果进行研究，可以对邯郸市女性由HPV感染引起的疾病的一级预防起到指导作用，为邯郸市女性宫颈癌筛查方案的制定和疾病防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 病例资料

将2014年1月1日—2021年12月31日到邯郸市中心医院就诊的64 137位女性纳入本研究，她们因各种原因行HPV检测，包括体检、阴道炎、不规则阴道出血、宫颈炎和不明原因的腹痛等。年龄10～96 岁，平均(37±5)岁，纳入标准：①采样前72 h 避免进行阴道冲洗和药物治疗；②采样前48 h内避免性接触；③采样时为非月经期。排除标准：接受过疫苗接种、妊娠期、哺乳期。病例信息纳入包括患者姓名、年龄、筛查日期及HPV检测结果。

1.2 方 法

1.2.1 样本采集以专用宫颈脱落细胞采集器采集，医护人员以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用拭子将宫颈口过多的分泌物擦拭去。取出宫颈刷置于宫颈口，绕一个方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，再将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，并旋紧洗脱管盖，保持洗脱管直立放置。标本室温保存不超过12 h，4 ℃保存不超过7 d。

1.2.2 检测方法采用多重荧光PCR 体外扩增核酸，试剂盒由潮州凯普生物化学有限公司提供，采用罗氏480 PCR 仪进行HPV 基因分型检测。检测步骤包括：①HPV DNA 的提取。取0.5～1 mL 采集的标本13 000 r/min离心1 min。弃上清后，加入0.5 mL细胞保存液重悬细胞。再次13 000 r/min 离心1 min，尽量弃净上清。每样本加入50 μL细胞裂解液，充分振荡重悬细胞，煮沸10 min。再次13 000 r/min 离心10 min，保留上清备用(上清中即为释放的DNA)。②PCR 扩增。将17.5 μL PCR 混合液和0.5 μL DNA 聚合酶混合配制成扩增试剂，取2 μL 扩增模板加至扩增试剂，反应总体积为20 μL，每个标本需要配置6 支管的反应体系，将反应管移至PCR仪进行扩增(同时设置1 个阳性对照以及1 个空白对照)。共可检测23 种HPV基因型，包括17 种高危型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6 种低危型(HPV6、11、42、43、44、81)。③结果判断。空白对照在各荧光检测通道CT值均应显示为Undet，阳性对照在对应荧光检测通道CT值≤36。符合以上两个条件，此次实验视为有效。样本中globin在Cy5荧光检测通道CT值≤40，其他荧光检测通道CT值显示为Undet，判断为阴性。如果仅一个基因型CT值≤40，则可判断为相应基因型的单一感染；若多个基因型CT值≤40，则可判断为相应基因型的混合感染。

1.2.3 年龄分组将64 137 例行宫颈癌筛查的女性按照年龄分为≤20 岁、>20～30 岁、≥30～40 岁、>40～50岁、≥50～60岁和>60岁共6个年龄组。

1.2.4 不同高危HPV 感染的自然转归规律调查初始16 096 例高危HPV 感染患者，分别统计自然消退、持续感染以及进展中的病例数。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计软件行数据分析，计数资料以例/率表示，各组率的比较和趋势性检验采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高危型HPV感染率及各亚型分布情况

高危型HPV 各亚型阳性构成比见图1。纳入研究的64 137例女性患者，共检出高危型HPV感染16 096例，感染率为25.1%[95%CI(0.248，0.254)]，17种高危亚型均有检出，共检测出高危亚型21 816项次，以单一高危亚型感染为主，单一型感染率达73.9%(11 902/16 096)；双重及以上型别感染率为26.1%(4 194/16 096)。感染率排名前5 的亚型为HPV16、HPV52、HPV58、HPV53、HPV51，分别占检出阳性项次的比例为16.5%、14.5%、10.5%、7.9%、7.2%。

图1 高危型HPV各亚型阳性构成比

2.2 不同年龄组高危型HPV感染情况

2.2.1 各年龄组高危型HPV 感染状况各年龄组高危型HPV 感染率见表1。6 个年龄组高危型HPV 感染率最高为≤20 岁年龄组，感染率为70.6%[95% CI(65.0%，75.9%)]，其次为>60年龄组，感染率为29.4%[95%CI(28.0%，30.9%)]，各年龄组感染率比较差异有统计学意义(χ2=497.47，P<0.01)。由于≤20岁年龄组行宫颈癌筛查女性患者病例数在6 个年龄组中最少，仅有286 人，因此除对6 个年龄段感染率进行了统计学分析外，剔除≤20 岁年龄组以后对其他5 个年龄组高危型感染率也进行了统计学分析，感染率在不同年龄组间差异亦具有统计学意义(χ2=181.61，P<0.01)。

表1 各年龄组高危型HPV感染率

2.2.2 各年龄组单一型和多重型高危型HPV 感染情况分析各年龄组单一、多重型高危型HPV感染率分布情况见表2。单一型高危型HPV 感染率最高的年龄组为41～50 岁，感染率构成比为77.8%[95%CI(76.6%，79.0%)]，各年龄组单一型高危型HPV感染率呈逐年上升趋势，感染率构成比组间差异具有统计学意义(χ2=17.10，P<0.01)；各年龄组多重型高危型HPV感染率最高的年龄组为≤20 岁，感感染率构成比为39.1%[95%CI(32.3%，45.9%)]，各年龄组多重型高危型HPV感染率呈逐年下降趋势，感染率构成比组间差异具有统计学意义(χ2=415.55，P<0.01)，

表2 各年龄组单一、多重型高危型HPV感染率分布情况

2.3 2014—2021年高危型HPV感染率发展趋势

2014—2021 年高危型HPV 感染率见图2。2014—2021年，除2020年因新冠疫情爆发影响病例稍有下降外，进行宫颈癌筛查女性患者病例呈逐年增加趋势，各年度高危型HPV 感染率呈下降趋势(χ2=582.34，P<0.01)。

图2 2014—2021年高危型HPV感染率

2.4 不同型别高危HPV感染的自然转归

16 096例单一型HPV感染女性在为期8年的随访当中，自然消退为74.45%、持续感染为17.35%、进展率为5.19%。不同型别高危HPV感染的自然转归见表3。

3 结论

HPV 是一类特异感染人类上皮的小的环状双链DNA 病毒[7]，主要存在于人的皮肤、黏膜和女性宫颈上皮细胞中，属于乳头瘤空泡病毒。已发现200 多种HPV。临床根据其致癌性主要分为两类：低危型HPV，常引发低度宫颈鳞状上皮内瘤变及生殖器湿疣等良性病变；高危型HPV，与高度宫颈鳞状上皮内瘤变及宫颈癌的发生关系密切。根据世界卫生组织(WHO)的数据，每年约有50万新的宫颈癌病例。在癌症死亡率中排名第四，在女性癌症中排名第二[8]。人体感染HPV后，在不进行干预的情况下，可以由宿主自行清除，此外，治疗后几乎所有的低危型HPV感染可以根除。然而，但仍有10%的高危型HPV感染无法被宿主清除[9]，发展为持续感染，进而导致宫颈癌的发生。随着宫颈癌筛查常识的普及和宣传，越来越多的女性意识到宫颈癌筛查的重要性，每年行宫颈癌筛查的女性数量呈直线上升趋势。随着大众对于宫颈癌筛查的重视程度越来越高，近8 年前来我院行高危型HPV筛查人数从2014年的1 051人次增加到2021年的14 829 人次，筛查人数增加了10 倍，高危型HPV 感染阳性率从2014 年的46.4%下降到2021 年的21.7%，呈逐年下降趋势。高危型HPV感染阳性率逐年下降的原因不排除前来医院行HPV 筛查女性就诊目的不同：早期大众对于宫颈癌筛查的了解程度较低，前来进行宫颈癌筛查女性多为有临床症状，以诊断为目的；而近年来，行筛查女性以体检为目的人数显著增加，因而造成基数增大，阳性率降低，但总感染例数仍是逐年增加，由2014 年的488 例增加到了2021 年的3 217例，因此可见，进行HPV 筛查的重要性还是不容忽略的。

本研究结果显示，近8 年来邯郸市女性高危型HPV 感染阳性率为25.1%，略低于河北省女性高危型HPV感染阳性率(27%)[10]，但与海口地区9.2%[11]；湖州地区15.26%[12]和巴中地区24.36%[13]等地区相比，均明显高于上述文献中报道地区的高危型HPV 感染阳性率。可能是各文献报道HPV检测时间节点不同，更值得注意的是，HPV 核酸检测过程存在一些影响因素，例如病毒裂解与DNA提取和纯化效率、引物探针的通用性等；对于荧光定量PCR过程，标准曲线的准确性将直接影响检测结果[14]。上述多种影响因素可能导致检测结果缺乏可比性，另外筛查人群范围选择差异也可能造成筛查结果的差异。

研究显示，HPV 类型因地理位置和宿主背景而异。HPV亚型分布在国家和国家之间，甚至在一个国家内的不同区域之间是显著不同的[14]，世界范围内以HPV16和HPV18亚型感染率最高。我们的研究显示高危型HPV 感染率排名前5 位的亚型分别为HPV16(16.5%)、HPV52(14.5%)、HPV58(10.5%)、HPV53(7.9%)、HPV51(7.2%)。这与余艳琴等[15]等报道的中国北方地区女性人群高危型HPV 常见亚型为HPV16、52、58、33、18和赵宇倩等[16]报道的常见高危HPV亚型HPV16、58、52、18、33，除感染前3 位16、52、58 亚型相同外，其他两种亚型有所不同。16 096 例HPV 感染女性在为期8 年的随访当中，自然消退为74.45%、持续感染为17.35%、进展率为5.19%。且HPV53 和HPV51 在邯郸市HPV 感染患者中具有较高的感染率，但并未被目前已上市的HPV九价疫苗所涵盖，因此，定期进行HPV分型的研究有助于了解基因分型的分布，并选择最佳类型进行疫苗的覆盖[17]。也不排除本研究并未能完全体现邯郸市女性高危HPV感染情况，因此还需更全面的数据来验证邯郸市高危HPV亚型感染情况。

年龄作为HPV 感染的相关因素之一[18]，不同年龄段的感染往往呈U 型表现，年轻女性(年龄小于25 岁)和老年女性(年龄在55 岁以上)两个年龄阶段感染率相对其他年龄段的要高[19]，本研究结果显示邯郸市女性HPV 高危型感染率也是在两个年龄段女性(小于20 岁)和(大于60岁)呈U型分布。年龄小于20岁女性的研究样本极少，这跟此年龄段已婚或有性生活女性人数较少有关。此年龄段行HPV筛查的女性大多为有临床相关症状前来就诊人群，因此造成此年龄段女性高危型HPV感染率较高。年龄大于60岁女性感染率高与此年龄段女性免疫力低下和激素水平下降有关，故此年龄阶段女性感染高危型HPV更容易转变为持续感染，而高危型HPV持续感染是导致宫颈癌变的主要因素，因此对于此年龄段女性的宫颈病变筛查，建议合并液基薄层细胞学检查。另外本研究显示本地区各年龄段高危型HPV 感染以单一型为主，感染率最高的亚型为HPV16，多重感染的比率虽然不高，但目前对于多重感染是否会促进宫颈病变发展的论点不一致，因此需要更多数据去验证多重高危型HPV感染对于女性宫颈病变的影响。

综上所述，邯郸市女性高危型HPV 感染率较高，感染率最高的基因型为HPV16，小于20岁年龄段女性感染率在各年龄段中最高，需对此年龄段女性的宫颈癌筛查加以重视，但鉴于本研究近8 年来此年龄段筛查样本数较少，因此需要此年龄段更多数据来验证。2014—2021各年度感染率呈下降趋势，与大众对于宫颈癌筛查的重视程度越来越高有关，我们应加强宫颈癌筛查的宣传。