加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响

郝洪丹，刘冠慧，张议心，尚佳静，罗娟

（ 河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北 邯郸 056038 ）

腹泻是常见的动物消化系统疾病。腹泻病属于中医“泄泻”范畴，以排便次数增加为主要症状，大便呈溏薄状或水状[1]。泄泻证型不同治疗方法也不同，但临床中通常不辨证，普遍只给予抗生素治疗。目前，随着抗生素的广泛应用，其引起的耐药情况在全球范围内已十分普遍，且兽用抗生素滥用问题也日渐凸显[2]。抗生素过度使用会造成肠道菌群失调，使免疫系统和代谢紊乱，引起慢性腹泻、抗生素耐药及其他临床并发症[3-4]。中药具有耐药性低、多靶点、天然低毒等治疗特点，可用于代替抗生素治疗人类和动物各种疾病。已有研究表明，中药对于肠激惹综合征、溃疡性结肠炎、慢性腹泻等多种病因引起的腹泻[5-9]均具有很好的疗效。

张景岳主张泄泻病位在脾胃，呈现脾虚邪实[10]，脾虚和湿邪是主因。畜禽临床中，由于饲养不当、营养过剩导致脾胃亏虚，且多食寒凉，脾虚寒湿泄泻证常见。《伤寒论》中的理中汤是治疗脾胃虚寒的代表方剂。为更好地治疗泄泻造成的津伤气虚及腹痛，本研究针对脾虚寒湿泄泻，在理中汤中加入茯苓、山药，加强祛湿作用兼而保护津液；加木香、桂枝、砂仁增加行气止痛和助阳止泻的功效。番泻叶为苦寒之品，是建立脾虚泄泻模型常用的苦寒泻下法药物[11-12]。本试验通过建立脾虚泄泻小鼠，研究理中汤加减对其血常规、血糖及脏器指数等指标的影响，为后续理中汤加减应用于兽医临床治疗腹泻提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

无特定病原体级ICR小鼠72只，体重（20±2） g，购自北京斯贝福生物技术有限公司，许可证号为SCXK（京）2019-0010。动物饲养于河北工程大学动物房，雌、雄分笼饲养，在适宜的饲养环境下（室温约22 ℃，相对湿度为50%～70%，室内清洁且安静），光照12 h、黑暗12 h交替进行，自由采食标准饲粮及饮用纯净水，每日清理鼠笼1次。

1.2 试剂与仪器

本研究所用中药均购自北京同仁堂邯郸药店，包括干姜（批号：22051101）、党参（批号：391210701）、白术（批号：117220601）、茯苓（批号：325220701）、山药（批号：220622002）、木香（批号：211017005）、桂枝（批号：261220701）、砂仁（批号：348200701）、甘草（批号：27220802）。恩诺沙星片（KVP Kiel有限责任公司，生产批号：KV03CRF）。

主要仪器：FA1104电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、XFH-75CA高压灭菌锅（浙江新丰医疗器械有限公司）、DHG-9070A电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）、BC-2800自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、BCD-182LTMPA冰箱（青岛海尔生物医疗股份有限公司）、582血糖仪（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）。

1.3 试验用药物制备

1.3.1 恩诺沙星溶液的制备

取恩诺沙星片50 mg加入灭菌蒸馏水41.41 mL中，配制成浓度为1.21 g/L的溶液，4 ℃冰箱保存。

1.3.2 中药复方提取物的制备

取中药干姜15 g、党参15 g、白术15 g、茯苓15 g、山药20 g、木香5 g、桂枝5 g、砂仁5 g、甘草5 g（生药量为100 g）。中药加蒸馏水1 L，浸泡1 h后煎煮30 min，使用12层纱布过滤；药渣加蒸馏水0.5 L再煎煮20 min，再次使用12层纱布过滤。两次滤液合并后加热蒸发浓缩至50 mL（按生药计2 g/mL），冷却至室温后分装5份，每份10 mL，高压灭菌后4 ℃冰箱保存。

1.4 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规、血糖及脏器指数的影响

1.4.1 试验设计

无特定病原体级ICR小鼠72只，适应性饲养3 d，试验前一晚禁食不禁水12 h后称空腹体重，根据体重将小鼠随机分为6组，即空白对照组（C组）、泄泻模型组（M组）、恩诺沙星治疗组（A组）、中药低剂量组（ZL组）、中药中剂量组（ZM组）、中药高剂量组（ZH组），每组12只小鼠，雌、雄各半。除C组外，其余各组小鼠按照30 g/kg灌胃番泻叶提取物，C组小鼠灌胃同体积的生理盐水，均每日1次，连续9 d，建立脾虚泄泻模型[13-16]。试验第10 d停用番泻叶，前一晚禁食不禁水12 h，A组小鼠按24.15 mg/kg灌胃恩诺沙星水溶液治疗，各中药组分别给予低剂量（6.5 g/kg）、中剂量（13.0 g/kg）、高剂量（26.0 g/kg）灌胃治疗（分别对应正常治疗剂量的0.5倍、1.0倍、2.0倍），C组和M组采用同体积的生理盐水灌胃，均每日1次，连续治疗3 d。

各组末次给药后禁食不禁水12 h，禁水1 h，眼球取血后断颈处死。试验流程见图1。

图1 试验流程Fig.1 Experimental process diagram

1.4.2 测定指标及方法

1.4.2.1 血常规检测

试验结束后，每组随机选取5只小鼠眼球取血1 mL，注入EDTA抗凝管中，混匀后使用全自动血细胞分析仪进行血常规检测[15]。检测指标包括：白细胞数目、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、中性粒细胞百分比、红细胞数目、血红蛋白以及血小板数目。

1.4.2.2 血糖含量

试验第10 d灌胃前和试验最后1 d眼球取血前，每只小鼠尾根静脉采血1滴，使用血糖仪试纸条检测小鼠空腹血糖含量并记录结果。

1.4.2.3 肝脏、肾脏脏器指数

记录试验最后1d眼球取血前的空腹体重，此为治疗末体重。解剖1.4.1中处死的小鼠，摘取肝脏和肾脏，在精密天平中称重，分别计算肝脏指数、肾脏指数。

1.5 数据统计与分析

试验数据采用IBM SPSS Statistics 25软件进行分析，单因素方差分析（ANOVA）进行组间比较，LSD法（假定等方差）及塔姆黑尼法（不假定等方差）进行两两比较，卡方检验进行不同性别间验证。结果以“平均值±标准误”表示，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规指标的影响（见表1）

表1 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血常规指标的影响Tab.1 Effect of Jiawei Lizhong Decoction on blood routine indexes of mice with diarrhea due to spleen deficiency

由表1可知，与C组相比，M组小鼠白细胞数目、中性粒细胞百分比分别升高了171.18%、384.25%（P＜0.01），淋巴细胞百分比、单核细胞百分比、红细胞数目、血小板数目分别降低了88.25%（P＜0.01）、51.04%（P＞0.05）、8.17%（P＞0.05）、37.58%（P＜0.05）。与M组相比，各组小鼠白细胞数目差异均不显著（P＞0.05）；A组、ZL组、ZM组、ZH组淋巴细胞百分比分别升高了818.81%、662.26%、722.17%、803.47%（P＜0.01），中性粒细胞百分比分别降低84.50%、68.57%、73.99%、83.05%（P＜0.01）；ZH组血小板数目升高85.90%（P＜0.01）。与A组相比，ZL组小鼠淋巴细胞百分比显著降低（P＜0.05），中性粒细胞百分比极显著升高（P＜0.01）；ZH组血小板数目显著升高（P＜0.05）。各组小鼠单核细胞百分比、红细胞数目、血红蛋白等指标差异均不显著（P＞0.05）。结果表明，加味理中汤方可恢复部分脾虚泄泻小鼠血常规异常指标，且ZH组小鼠血小板数目恢复的情况优于A组。

2.2 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠血糖含量的影响（见图2、图3）

图2 各组小鼠治疗前后空腹血糖含量Fig.2 Fasting blood glucose content of mice in each group before and after treatment

图3 各组小鼠治疗前后血糖含量变化量Fig.3 Changes of blood glucose content before and after treatment in each group of mice

由图2可知，治疗前，与C组相比，其余各组小鼠血糖含量显著下降（P＜0.05），但各组间差异不显著（P＞0.05）。治疗后，与C组相比，M组小鼠血糖含量显著下降48.14%（P＜0.05）；与M组相比，A组、ZL组、ZM组和ZH组小鼠血糖含量分别升高了45.14%、55.38%、79.48%、102.55%（P＜0.05）；与A组相比，ZL组、ZM组和ZH组小鼠血糖含量分别升高了7.06%（P＞0.05）、23.66%（P＜0.05）、39.56%（P＜0.05）。治疗后各组小鼠血糖含量由低到高排序为M组＜A组＜ZL组＜ZM组＜C组＜ZH组。

由图3可知，与C组相比，M组小鼠治疗前后血糖含量变化量降低34.72%（P＜0.05）；与M组相比，A组、ZL组、ZM组和ZH组小鼠治疗前后血糖含量变化量分别升高23.42%、27.35%、44.89%、62.65%（P＜0.05）；与A组相比，ZL组、ZM组、ZH组小鼠治疗前后血糖含量变化量分别升高3.93%（P＞0.05）、21.47%（P＜0.05）、39.23%（P＜0.05）。治疗前后各组小鼠血糖含量变化量由低到高排序为M组＜A组＜ZL组＜C组＜ZM组＜ZH组。

结果表明，加味理中汤方可改善脾虚泄泻造成的血糖下降，且ZM组和ZH组效果优于A组。

2.3 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠肝脏指数、肾脏指数的影响（见表2）

表2 加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠肝脏指数、肾脏指数的影响Tab.2 Effect of Jiawei Lizhong Decoction on liver index and kidney index of splenic deficiency diarrhea mice 单位：%

由表2可知，与C组相比，M组小鼠肝脏指数降低19.34%（P＜0.01）。与M组相比，A组、ZL组、ZM组、ZH组小鼠肝脏指数分别升高了0.21%（P＞0.05）、15.42%（P＞0.05）、21.20%（P＜0.05）、23.77%（P＜0.01）。与A组相比，ZL组、ZM组、ZH组小鼠肝脏指数分别升高15.17%（P＞0.05）、20.94%（P＜0.05）、23.50%（P＜0.01）。各组小鼠肾脏指数差异均不显著（P＞0.05）。各组小鼠肝脏指数由低到高排序为M组＜A组＜ZL组＜ZM组＜ZH组＜C组，肾脏指数由低到高排序为A组＜M组＜C组＜ZL组=ZM组＜ZH组。

结果表明，加味理中汤方可改善脾虚泄泻造成的肝脏及肾脏指数降低，且ZH组效果最佳。

3 讨论

腹泻的病因复杂，主要包括传染性因素如病毒、细菌、寄生虫，非传染性因素如营养因素、饲养管理因素等[17]。畜禽临床中，饲养不当、营养过剩导致动物脾胃亏虚，脾虚则运化无力而湿邪内生，又因多食寒凉食物，脾阳受损又湿邪困脾，脾胃升降失常，清浊不分水谷顺肠而下，造成脾胃虚寒泄泻。《脾胃论》中言明，“大忌苦寒之药，损其脾胃”。番泻叶性味甘苦寒，归属大肠经，是建立脾虚动物模型的常用药物[18-19]，主要泻下成分为蒽醌类化合物及其衍生物[20]。研究表明，番泻叶还具抑菌、止血、降血糖、增强平滑肌收缩、肌肉松弛与解痉等作用，大剂量或长期使用会导致低钾血症、肠部炎症、肠黏膜损伤，甚至致死等[21-22]。

有研究表明，理中汤可治疗抗生素相关性腹泻，且只对寒湿泄泻有效，对实热泄泻则无效[23-24]。本试验在理中汤基础上添加了茯苓、山药、木香、桂枝、砂仁，其中茯苓、山药增强了补脾祛湿功效，木香可健脾和胃、行气止痛，桂枝、砂仁温通可增强助阳止泻效果。干姜、党参、白术、茯苓、山药、木香、砂仁均具有调节免疫、调节胃肠功能、调节肠道菌群、抗炎等作用，木香、桂枝、砂仁还具有止痛、抗菌等药理作用[25-32]，为加味理中汤方治疗脾虚泄泻提供良好的理论基础。

本研究中采用小鼠连续灌胃番泻叶的方法造成脾虚泄泻，脾虚而气血虚，导致M组小鼠红细胞数目和血红蛋白略有下降，血糖含量显著下降；脾虚而卫气不固，外邪易侵入，机体免疫力下降，M组小鼠血小板数目、淋巴细胞百分比均下降，白细胞数目、中性粒细胞百分比均升高；脾虚影响肝肾，因而肝脏指数显著降低、肾脏指数略有降低。治疗后，与M组相比，ZH组小鼠红细胞数目、血红蛋白均升高，血小板数目、肝脏指数、淋巴细胞百分比均显著升高，中性粒细胞百分比显著下降。与A组相比，ZH组小鼠血糖含量、肝脏指数均显著升高，血小板数目、肾脏指数均有所升高。

有研究表明，番泻叶造成的脾虚泄泻可导致血小板数目显著下降，红细胞数目、血红蛋白有下降趋势，其余项目无显著差异[15]。李锦灵等[33]研究表明，番泻叶可显著降低小鼠白细胞数目、淋巴细胞数目、脾脏指数、胸腺指数。番泻叶提取物会造成大鼠肝脏指数下降、肾脏指数升高[34]，大量给予抗生素后会造成小鼠血小板数目下降[35]。上述研究均与中医泄泻病位在脾胃肠，与肝肾相关的理论一致。本研究中，M组小鼠的肝脏指数、红细胞数目、血红蛋白以及血小板数目下降等变化趋势与文献一致，但白细胞数目、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比的变化趋势与上述文献存在差别，可能与造成腹泻的微生物不同有关。根据本试验结果分析，腹泻小鼠可能伴有细菌感染和炎症反应，而恩诺沙星并未造成血小板进一步降低，可能与本试验中恩诺沙星剂量为正常治疗量有关。治疗后，恩诺沙星组小鼠血常规指标和血糖含量也得到一定改善，可能与恩诺沙星的抗菌作用有关；各剂量组的中药组方均很好地回调了小鼠的血常规指标、血糖含量及肝肾脏器指数等指标，可能是由于干姜、党参、白术、茯苓、山药、木香、砂仁提高了泄泻小鼠的免疫力，以及干姜、木香、桂枝、砂仁抗菌的药理作用有关。

4 结论

本研究结果表明，加味理中汤方对脾虚泄泻小鼠的血常规、血糖及肝肾脏器指数的指标异常均具有一定的改善作用，且高剂量组效果优于恩诺沙星组。本研究结果可为加味理中汤方在临床诊疗中代替抗生素治疗脾虚泄泻提供一定参考。