老年子宫内膜癌患者HER2、P53及DNA错配修复蛋白表达特点和临床意义

李会敏 井水 李媛媛 吴玲玲

(宿州市立医院妇科,安徽 宿州 234000)

子宫内膜癌的发病率仅次于宫颈癌和卵巢癌,多发于围绝经期和绝经后的中老年女性〔1〕。相关研究显示,高龄是子宫内膜癌患者预后的独立影响因素,老年患者的复发率和死亡率明显高于中年患者〔2〕。随着治疗技术的进步,子宫内膜癌的治愈率和生存时间明显提升,但仍存在一定的转移和复发风险,是患者死亡的主要原因〔3〕。准确预测子宫内膜癌患者的生存情况对治疗方案的个体化制定具有重要意义。人表皮生长因子受体(HER)2的研究多集中在乳腺癌,其过表达不但促进乳腺癌的发生与发展,而且是靶向治疗的一个重要靶点〔4〕,但其在子宫内膜癌中作用的研究十分少见。抑癌基因P53能够编码一种分子量为43.7 kD的蛋白质,低表达会失去对细胞增殖的控制,导致细胞癌变〔5〕。DNA错配修复蛋白包括MSH2、MLH1、PMS2,能够纠正碱基错配,修复DNA复制过程中的碱基对错误,维持基因组稳定性〔6〕。本研究探讨预后较差的老年子宫内膜癌患者HER2、P53及DNA错配修复蛋白的表达特点和临床意义。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2019年1月至2020年6月安徽省宿州市立医院收治的老年子宫内膜癌患者50例。年龄60～78岁,平均年龄(69.15±6.39)岁。国际妇产科联盟(FIGO)分期:Ⅰ期20例,Ⅱ期15例,Ⅲ期13例,Ⅳ期2例;分化程度:高分化18例,中分化24例,低分化8例;肌层浸润:无9例,<1/2肌层23例,≥1/2肌层18例;淋巴结转移15例。收集同期行刮宫术的22例子宫内膜癌患者正常增生期子宫内膜标本。年龄60～75岁,平均(68.41±5.80)岁。两组年龄差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究符合本院伦理委员会相关要求,患者均签署知情同意书。

1.2纳入及排除标准 纳入标准:①年龄≥60岁,符合2015年FIGO子宫内膜癌诊治指南〔7〕中的诊断标准;②行子宫内膜癌手术治疗,并经术后病理检查确诊;③认知功能正常,完成2年随访且资料完整。排除标准:①术前有放疗、化疗、激素类药物治疗史;②凝血功能异常;③合并免疫系统疾病,严重感染。

1.3免疫组化法检测HER2、P53及DNA错配修复蛋白表达 取子宫内膜癌组织标本和正常增生期子宫内膜标本,使用石蜡包埋,5～6 μm连续切片,转移到预先清洗过的载玻片上,常规脱蜡至水,微波法修复抗原约20 min,静置到温度恢复至室温,使用磷酸缓冲液去除内源性过氧化物酶,加入1∶20倍稀释的正常兔血清封闭。清除血清后滴加兔抗人HER2单克隆抗体(1∶500倍稀释),兔抗人P53单克隆抗体(1∶300倍稀释),鼠抗人MSH2单克隆抗体(1∶1 000倍稀释),鼠抗人MLH1单克隆抗体(1∶500倍稀释),鼠抗人PMS2单克隆抗体(1∶1 000倍稀释),放入4 ℃冰箱中过夜,次日取出后室温下复温约15 min,滴加山羊抗兔IgG、山羊抗鼠IgG,均为1∶2 000倍稀释,放入37 ℃保温箱中40 min,滴加二氨基联苯胺(DAB)显色液后显微镜下观察显色情况,苏木素复染后封片。

1.4结果判断 将切片放于显微镜下,随机选择4个视野观察,计数100个子宫内膜癌细胞。根据染色强度和阳性细胞比例进行判断。其中无染色0分、浅黄色1分、黄色或棕黄色2分、深棕黄色3分;阳性细胞比例<25%为1分、25%～49%为2分、50%～74%为3分、75%～100%为4分。二者乘积0～4分为阴性,5～12分为阳性。

1.5资料收集与随访 收集患者年龄、FIGO分期、分化程度、肌层浸润、淋巴结转移。术后对老年子宫内膜癌患者进行2年的随访,采用电话、门诊复查、家访相结合的方式进行,记录生存情况。

1.6统计学分析 采用SPSS25.0软件进行LSD-t检验、χ2检验、Kaplan-Meier曲线分析及受试者工作特征(ROC)曲线分析。

2 结 果

2.1不同组织中HER2、P53及DNA错配修复蛋白表达 HER2、MSH2、MLH1、PMS2蛋白阳性表达于子宫内膜癌组织中的肿瘤细胞膜和细胞质中,呈散在、弥漫性两种分布形式;P53阳性表达于细胞核。子宫内膜癌组织中HER2阳性表达率明显高于子宫内膜正常组织,P53、MSH2、MLH1、PMS2阳性表达率明显低于子宫内膜正常组织(P<0.01)。见图1、表1。

表1 不同组织中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2蛋白阳性表达比较〔n(%)〕

图1 免疫组化检测不同组织中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2蛋白表达(×200)

2.2不同临床病理特征子宫内膜癌HER2、P53阳性表达 HER2、P53阳性表达率在不同FIGO分期、分化程度、肌层浸润、淋巴结转移的子宫内膜癌患者间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中随着FIGO分期、肌层浸润程度的增加,分化程度降低,HER2阳性表达率逐渐升高,P53阳性表达率逐渐降低;有淋巴结转移患者HER2阳性表达率明显高于无淋巴结转移的患者,P53阳性表达率明显低于无淋巴结转移的患者(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床病理特征子宫内膜癌HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2阳性表达率比较〔n(%)〕

2.3不同临床病理特征子宫内膜癌MSH2、MLH1、PMS2阳性表达 MSH2、MLH1、PMS2阳性表达率在不同FIGO分期、分化程度、肌层浸润、淋巴结转移的子宫内膜癌患者间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中随着FIGO分期、肌层浸润程度的增加、分化程度的降低,MSH2、MLH1、PMS2阳性表达率逐渐降低;有淋巴结转移患者MSH2、MLH1、PMS2阳性表达率明显低于无淋巴结转移的患者(P<0.05)。见表2。

2.4不同HER2、P53及DNA错配修复蛋白表达老年子宫内膜癌患者生存分析 Kaplan-Meier生存曲线分析显示,HER2阳性表达的老年子宫内膜癌患者生存率明显低于HER2阴性表达患者(Log-rankχ2=16.528,P=0.000)。P53、MSH2、MLH1、PMS2阴性表达的老年子宫内膜癌患者生存率明显低于P53、MSH2、MLH1、PMS2阳性表达者(Log-rankχ2值分别为19.708、21.094、15.831、24.655,均P=0.000)。见图2。

图2 不同HER2、P53及DNA错配修复蛋白表达的子宫内膜癌患者Kaplan-Meier生存曲线

2.5HER2、P53及DNA错配修复蛋白对老年子宫内膜癌患者生存的预测价值 ROC曲线显示,HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2单独和联合检测对老年子宫内膜癌患者生存情况均具有较高的预测价值(P<0.05);其中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2联合检测的预测价值最高,特异度和阳性预测值明显高于各指标单独检测(P<0.05)。见图3、表3。

表3 HER2、P53及DNA错配修复蛋白对老年子宫内膜癌患者生存的预测价值

图3 HER2、P53及DNA错配修复蛋白对老年子宫内膜癌患者生存预测的ROC曲线

3 讨 论

目前子宫内膜癌的病因仍未明确,无法做到准确预防,对其治疗预后的评估也较为困难。探寻能够预测和评估子宫内膜癌患者病情的分子标志物对改善预后、延长生存时间具有重要意义。HER2是一种原癌基因,能够调节细胞生长、增殖及分化〔8〕。正常生理状态下 HER2表达于人体胚胎发育期,与人体中多个组织器官的生长发育密切相关〔9〕。成年人体内正常组织器官中,HER2呈单拷贝形式存在,表达水平较低〔10〕。相关研究显示,HER2基因癌变的机制较为复杂,先通过蛋白过表达和基因扩增激活酪氨酸激酶,增强蛋白酪氨酸激酶参与调控的信号通路,通过经典信号通路磷脂酰激酶-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活核转录因子(NF)-κB信号,刺激细胞无限制的生长和增殖,诱发正常细胞癌变〔11〕。P53基因是人体的抑癌基因,分为野生型和突变型,野生型能够抑制细胞癌变,促进肿瘤细胞凋亡,修复有缺陷的细胞基因;突变型则会促进细胞发生癌变〔12〕。研究发现,P53基因主要通过干扰细胞周期G/S转化,抑制细胞增殖,激活凋亡相关DNA表达,诱导细胞凋亡;当P53基因发生突变后,其抑癌作用消失,促使细胞恶性病变〔13〕。

相关研究显示,乳腺癌、卵巢癌等多种实体瘤中HER2基因呈过表达,P53基因呈低表达,其中卵巢癌中HER2基因的过表达率分别为25%、30%,P53基因的低表达率分别为28%、42%〔14〕。结合本研究结果,子宫内膜癌患者中HER2高表达、P53低表达,且与病理指标密切相关,可反映患者的病情严重程度。研究发现,携带DNA错配修复基因突变的女性患子宫内膜癌的风险约为70%,普通人群中仅为3%〔15〕。DNA错配修复蛋白以配对组成异物二聚体发挥作用,可通过修复DNA复制过程中产生的错误碱基对,维持基因组的完整性和稳定性,避免突变和恶性肿瘤的发生〔16〕。国外研究报道显示,子宫内膜癌患者中MSH2基因突变率为52%～65%,MLH1基因突变率为37%～48%,PMS2基因突变率为20%～40%〔17〕;目前国内相关研究报道仍十分少见。

本研究提示,MSH2、MLH1、PMS2在子宫内膜癌患者中表达缺失,且与患者病理改变严重程度密切相关。Kaplan-Meier生存曲线提示,临床中可将HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2联合检测,不仅能够准确评估患者的病情严重程度,还能够预测患者生存情况,指导个体化治疗方案的制定。