VITROS XT 3400生化分析系统测定8种新型复合干片项目的性能验证*

于正麟,王扣琼,王蓓丽,2,潘柏申,2,郭玮,2(.复旦大学附属中山医院检验科,上海 200032;2.复旦大学附属中山医院厦门医院检验科,福建厦门 3605)

干式生化分析仪具有运行稳定、检测高效、标本用量少、低需保养和无需供排水等优点,是各大医院急诊检验常用的生化检测设备。目前,美国Ortho公司推出了新一代VITROS XT 3400全自动干式生化分析仪(以下简称“VITROS XT 3400”),其配置了全新LED光源、数字反射光度计,并且系统采用了创新的复合干片技术,通过将两种生化检测试剂固化在一张干片上,在保留传统干式生化分析仪优点的基础上,进一步提升检测效率。但是,至今未有关于VITROS XT 3400的临床性能和应用评估报道。本研究根据国家卫生行业标准、中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)和美国临床和实验室标准协会(The Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的文件要求[1-7],首次对该系统的复合干片项目进行正确度、精密度、线性范围、参考区间、抗干扰及方法学比对性能验证,旨在进一步满足急诊检验“快准稳”的临床需求并为VITROS XT 3400全面质量管理提供依据。

1 材料和方法

1.1标本来源 选取复旦大学附属中山医院急诊科和体检中心就诊的患者及体检健康者标本共76例,其中16例标本用于线性范围验证,40例标本用于参考区间验证和抗干扰实验,20例标本用于方法学比对。使用含促凝剂的惰性分离胶真空采血管采集静脉血5 mL,静置30 min后4 ℃ 1 500×g离心10 min上机检测。所有检测标本均为无溶血、黄疸、脂血的临床剩余血清。

正确度测定样品为国家卫生健康委临床检验中心(National Center for Clinical Laboratories,NCCL)5个水平的2022年第1次室间质量评价(external quality assessment,EQA)样品。精密度测定样品为高、低两个水平的厂商质控品(批号D5955、C8811)。测定前均分装冻存。抗干扰实验使用日本希森美康公司干扰检查A试剂盒,批号为ZR1504,试剂盒中包括结合胆红素(胆红素-C)、未结合胆红素(胆红素-F)、乳糜和血红蛋白4种干扰物质。

1.2仪器与试剂 Ortho VITROS XT 3400、Ortho VITROS 4600全自动生化分析仪(以下简称“VITROS 4600”);VITROS XT 3400使用复合干片清蛋白(Alb)-总蛋白(TP)(批号691600116321)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)-丙氨酸氨基转移酶(ALT)(批号661300114405)、肌酐(Cr)-尿素(Urea)(批号721300096401)、三酰甘油(TG)-总胆固醇(TC)(批号681300094645)及配套质控品。VITROS 4600使用普通干片Alb(批号093433823124)、TP(批号061232802142)、AST(批号732834065271)、ALT(批号560632314254)、Cr(批号153935141551)、Urea(批号013134492035)及配套质控品。

1.3方法

1.3.4参考区间验证 参考CLSI C28-A3c[5]文件,随机选取本院体检中心18～65岁、男女例数大致相等、无基础疾病且表观健康的体检健康者血液标本20例,20例标本中不超过2例(10%)的检测值在预设的参考区间之外,判定为合格。

1.3.5抗干扰实验 参考CLSI EP7-A2[6]文件,混匀2.7 mL健康体检者的新鲜标本和试剂盒空白/干扰物质0.3 mL作为样品A/B,按以下比例混合:4B,3B+1A,2B+2A,B+3A,4A。每份混合样品测定5次取均值,记录结果,计算混合样品与样品A的相对差值(%)并进行点对点线段拟合,参考既往研究[8]及厂商标准,以10%相对偏差为临床有意义临界点。

1.3.6方法学比对 参考CNAS-GL047[7]文件,选取尽量覆盖比较项目范围的标本20例且标本范围需涵盖所比对项目的医学决定水平,结果正常标本占40%～60%,结果异常标本占40%～60%。测定2次取均值,计算两种不同方法的检测偏倚。要求20例样本中,至少90%样本测量的偏差小于TEa。

1.4统计学分析 采用SPSS 23.0统计软件进行。数据处理过程中不对中间结果做修约处理。

2 结果

2.1正确度验证 正确度验证结果见表1,Alb水平Ⅳ、TP水平Ⅲ和水平Ⅴ、AST水平Ⅳ、Cr水平Ⅲ和水平Ⅴ、TC水平Ⅱ、TG 5个水平的检测均值均在VI的范围内,其余检测结果的偏差均≤1/2TEa,正确度验证符合要求。

表1 VITROS XT 3400正确度验证结果

2.2精密度验证 精密度验证结果见表2, 8种复合干片检测项目的实验室内变异系数均在1.66%以下,符合实验室允许的精密度质量要求。

表2 VITROS XT 3400精密度验证结果

2.3线性范围验证 8种复合干片项目线性范围验证结果如表3所示,所有项目检测结果的线性偏差90%CI均与1/2TEa相交,证明项目在厂商声明的范围内线性良好。

表3 VITROS XT 3400线性范围验证结果

2.4参考区间验证 8种复合干片检测项目的参考区间验证结果如表4所示,所有项目符合率均大于90%,参考区间验证通过。

表4 VITROS XT 3400参考区间验证结果

表5 VITROS XT 3400和VITROS 4600结果比对

2.5抗干扰实验 结果见图1,以10%检测偏差作为有临床意义的标准[8],拟合得到Alb和TP添加的血红蛋白浓度为286.76 mg/dL和207.84 mg/dL。说明书声明血红蛋白在200 mg/dL时,Alb和TP的相对偏差分别为13%和9%,与厂商声明相符合。ALT和AST易受溶血干扰,在临床检测中应避免使用溶血标本。乳糜不计入对TG干扰。其余干扰物质对复合干片造成的相对偏差均在10%内。

图1 VITROS XT 3400抗干扰试验结果

2.6方法学比对 相关性分析显示,装载在VITROS XT 3400上的复合干片与装载于VITROS 4600的干片的相关性良好,20例标本中100%的结果都在TEa范围内,两系统之间的偏倚可接受。

3 讨论

干化学技术的原理是将检测所需的试剂固化于特定的固相载体上,以待检样品中的液体作为反应介质与载体上的试剂进行反应。当干片的厚度、光吸收系数和散射系数不变时,光源照射在反应区的反射率与待测物的浓度成正比,从而可以通过检测反射率的大小计算出待测物的浓度。传统的生化检测仪主要以卤素灯和氙灯为主,当其使用时间接近或达到预期使用寿命时,发出的光强会发生能量衰减,进而影响到仪器检测结果。而急诊检验报告能及时提示临床患者的病情变化,检验质量和效率显得尤为重要。VITROS XT 3400配置了LED光源,使用寿命在6～10万小时,高于传统光源的7 000小时,且具有稳定、低功耗、维护成本低、安全性高的优点,稳定的光强能大幅减少光学检测系统带来的系统误差,提高整个仪器测量的正确度和精密度。

本研究参考国家卫生行业标准、CLSI和CNAS系列指南文件[1-6]对VITROS XT 3400及配套复合干片试剂Alb-TP、AST-ALT、Cr-Urea和TG-TC进行性能验证。本研究使用EQA样品验证正确度,结果显示,检测均值均在VI的范围内或检测偏差小于等于1/2TEa,检测正确度良好。精密度验证结果显示,8种复合干片实验室内变异系数均符合实验室要求,相比于VITROS 4600,精密度有所提升[9]。所有项目检测结果的线性偏差90%CI均与1/2TEa相交,线性范围验证通过。参考区间验证结果显示,Alb、TP、TG和TC各20例表观健康者,AST、ALT、Cr和Urea男女各20例表观健康者,所有项目均有90%以上的检测结果位于厂家说明书提供的参考区间内,表明可以沿用厂家声明的参考区间。

由于干化学与湿化学方法之间的检测原理不同:湿化学遵循朗伯比尔定律,采用透射光度法,浓度标准曲线为直线;干化学采用的是反射光度法,浓度标准曲线为对数标准曲线[10]。此外,同一检测项目干湿方法溯源到的参考方法和参考物质也不尽相同。基于以上两点,本研究的方法学比对试验选用了同为干化学检测方法的VITROS 4600和VITROS XT 3400,而没有选择传统的湿化学生化检测仪。结果显示,两台仪器之间的相关性良好,20例标本中,所有检测结果都在允许的偏差范围内。临床标本的检测结果与VITROS 4600一致性较好,证明VITROS XT 3400可在日常临床工作中使用。

多层涂膜结构的高分子膜结构具有优秀的抗干扰能力,能将溶血、脂血、黄疸和异常蛋白的影响降至更低[11]。此外,VITROS XT 3400还增加了数字反射光度计,能进一步降低异常物质的干扰。本研究显示,以10%检测偏差作为有临床意义的标准[7],不计乳糜对TG的影响,TG、TC、Cr和Urea添加干扰物后偏差较小,均在10%的标准内。TP和Alb添加血红蛋白干扰物的偏差与说明书声明范围相符合。ALT、AST项目易受溶血干扰,临床上应避免使用溶血标本检测或提示临床结果受溶血影响[12]。需要注意的是,本研究具有一定的局限性,试验中添加的是外源性干扰物质,在临床应用中还要与实际情况结合,判断检测结果是否受血清内源性干扰物质影响。