羊传染性脓疱病毒和支原体混感的诊治

赵 雄，颜兴琼，陈 英，胡永翠，尤正荣，朱泽娥，杜文用，黄 伟

（昭通市畜牧兽医技术推广站，云南 昭通 657000）

羊传染性脓疱病分为唇型、蹄型和外阴型，临床上常见感染羊口、唇、舌、鼻、乳房、蹄冠、蹄叉或系部、阴唇等部位的皮肤和黏膜形成丘疹、水疱、脓疱、溃疡和结成疣状厚痂，常有坏死杆菌等继发感染，少数严重病例可因继发性肺炎而死亡。本病只危害绵羊和山羊，以羔羊最敏感，每个季节都可发生，但最常发于气候炎热、干旱及枯草的季节。病毒有较强的的抵抗力，可存活几个月甚至几年。

羊支原体肺炎又称羊传染性胸膜肺炎是由支原体引起的一种高度接触性传染病，临床表现为高热、咳嗽、浆液性或脓性鼻液，病理变化主要局限于胸部，呈现纤维素性肺炎病变。根据其临床症状和病理变化，做出初步诊断较容易，实验室采取PCR病原检测方法可快速确诊。

由于羊传染性脓疱病和羊支原体肺炎都有较强的传染性，掌握它们的预防、诊断和治疗技术，对减少养殖场户的经济损失有重要意义。

1 病例陈述

2021 年11 月23 日，某绵羊场反映其所饲养的绵羊有多头患病，患羊不愿吞咽，精神沉郁，嘴唇、口腔、舌头等部位的皮肤有多个黄色水疱及溃疡，已发病半个月。该养殖场存栏200 余头，发病共计30 头，死亡2 头，多数病例为羔羊，羊场近半年以来未从外地引进山羊，由于环境和经济条件，以放养方式饲养。

2 诊 断

该病例结合了多种诊断方式，包括临床诊断。病理解剖、常规PCR 及实时荧光定量PCR 诊断。

2.1 临床诊断多数病羊症状较轻微，严重病例视诊见病羊精神沉郁，鼻镜干燥，口腔内有大量黄色水疱，与脓疱、溃疡互相融合，形成龟裂、易出血的污秽痂垢，且口腔发出恶臭，部分病例出现体温升高，呼吸困难，食欲废绝，流脓鼻涕、按压胸壁敏感等症状（见图1）。

图1 口腔（溃疡和黄色水泡）

采集病羊血液、OP 液（食道-咽部分泌物）、黄色水泡液、鼻腔和口腔棉拭子，肛门棉拭子、环境棉拭子待检

2.2 病理剖检选发病羊群中最严重病例进行剖检，依次观察口腔、软腭、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠和淋巴结，发现病羊口腔黏膜潮红，软腭有大量灰白色水泡和烂斑，心肌松弛、变软，肝脏颜色由红色变成灰色，有少数包囊化的坏死灶，纵膈淋巴结肿大，肺部呈纤维素性病变，胃内排空，只有大肠内有极少量粪便，其他脏器无明显肉眼可见病变（见图2和图3）。取肺脏、脾脏和淋巴结各1 份待检。

图2 肝脏（灰白色）

图3 心脏（心肌松软）

2.3 病原检测结合临床症状和病理剖检，该羊场疑似支原体感染、羊口疮病毒，但确诊需借助实验室检测方法，采集该羊场样品共8 份，包括症状轻微的样品6 份，症状严重病例的样品2 份（组织和棉拭子各1 份），分别检测这3 个病毒。

2.3.1 检测所用仪器和设备 核酸提取试剂盒，高低速离心机，高通量组织研磨仪TL2020，TAdvand Gragient 96 PCR 扩增仪，生物安全柜，核酸提取仪GeneRoTex 96，凝胶成像系统，PE 管，电泳仪，移液器，实时荧光定量PCR 仪，外科手术剪，qPCA 检测试剂盒。

2.3.2 样品处理 先将采集的肺脏、脾脏和淋巴结分别用外科手术剪剪成碎块，倒入装有4 mL 双抗稀释液的PE 管中混匀，放进组织研磨仪中充分研磨，提取上清液待用。

2.3.3 核酸提取 将每个样品取200 μL 分别加入核酸提取试剂盒对应孔中，直接放进核酸提取仪内，由机器自动完成核酸的提取，20min 后，用移液枪将核酸提取至V 型管中待用。

2.3.4 支原体检测（RT-PCR 法） （1）配制体系引物由云南省动物疫病预防控制中心提供，由于支原体遗传物质为DNA，所以按照DNA 体系要求配制体系。（2）扩增 总体系配制完成后，分装到PCR管中，每管加入样品8 μL 液体，加入1.5 μL 核酸样品，分装前用移液枪反复吸取吹入，混匀。放入PCR 仪中，输入相应的反应条件进行扩增。（3）跑胶 按要求完成凝胶和电泳液的制备，用10 μL 的可调移液枪取7 μL 经PCR 仪反应过的样品从右往左依次点入凝胶孔中，顺序为1～8 号样品，阳性，阳性，Mark。跑胶设置电泳仪电压150V，电流110mA。（4）凝胶成像 跑胶完成后，将按照要求进行操作设置，肺脏组织样品检测结果显示支原体阳性。支原体阳性对照条带为750bp。

2.3.5 羊传染性脓疱病病毒的检测（Q-PCR 法）

（1）体系配制 该病毒的检测使用羊口疮病毒直接扩增qPCA 检测试剂盒。（2）定量检测病毒 按说明配制扩增试剂（每个样本作为一个反应，每个反应加入38 μL 直扩qPCR 反应液，加入2 μL 直扩qPCR 酶混合液，加入5 μL 羊口疮直扩qPCR引物探针，加入5 μL 样本核酸），将反应管放入实时荧光定量PCR 仪中，设置反应条件为（第1 阶段：50 ℃5 min，一个扩增循环；第2 阶段：95 ℃3 min，一个扩增循环；第3 阶段95 ℃10 s、62 ℃30 s、72 ℃30 s，5 个扩增循环；第4 阶段：95 ℃10 s、58 ℃30 s，40 个扩增循环）选择FAM 通道进行荧光定量检测。（3）结果判定 根据试剂盒说明，当监测样本Ct 值≤30 时，报告为羊口疮病毒核酸阳性，检测结果显示羊口疮阳性对照Ct 值为18.14，阴性对照无数值（实验成立），样品Ct 值分别为22.44,22.69,23.61,26.77,28.05.28.66 均小于30，判定为羊传染性脓疱病毒阳性。

故结合临床诊断、病理诊断和实验室诊断，最终确诊为羊传染性脓疱病和支原体肺炎。

3 治 疗

由于羊口疮和支原体肺炎都是具有较强的传染性，治疗之前，对该场全群羊逐头采样复检，对病羊、可疑病羊和假定健康羊分群隔离和治疗，同时用相应浓度的氢氧化钠对环境和工具全面消毒。

3.1 治疗方案（1）对已结痂的皮肤，先用过氧化氢将其软化，用镊子轻轻剥离痂皮，用0.2%的高锰酸钾溶液冲洗创面，涂上碘甘油，2～3 次/d。

（2） 四环素（0.25 g/瓶）0.25 g/头肌肉注射，同时喂服VB2。

（3）炙甘草20 g，黄连、金银花、连翘、瓜蒌、桔梗、黄芩、赤芍以及杏仁30 g，贝母45 g，研磨成粉末后，用开水冲调后灌服，2 次/d。以达到清肺化痰，宣肺定喘的目的。

（4）加强饲养管理，对病羊尽量用精料饲养，提高病羊免疫力，淘汰有严重呼吸道症状的病羊。

3.2 疗 效连续治疗5 d 以后，多数病羊疗效明显，食欲恢复。继续加强用药，15 d 以后，病羊陆续恢复健康。

4 讨 论

（1）临床诊断羊传染性脓疱时应与羊口炎、口蹄疫相区别，羊口炎一般是单独发病，不会发生传染；口蹄疫是一种急性、高热性传染病，高热是其典型症状。实验室可快速确诊。该病传染性强，发病初期一般不致死，但后期会因严重脓疱造成病羊无法采食日渐衰，或因继发肺炎感染（包括支原体感染、坏死杆菌感染等）而死亡，由于死亡率较低，容易被养殖户忽略，进而使病羊的病程延长，最终造成病羊营养不良，日渐消瘦甚至生长停滞，大大降低其经济效益。对本病采取对症治疗、抗炎和抗继发感染相结合的方式，能取得了较好的疗效，但该病毒很难彻底清除，需长期防范，定期清洁环境卫生，捡出饲料和垫草中的芒刺，不从疫区引种和购买其产品，对情况不明的羊场购入的羊，应先隔离检疫一定时间，并对其蹄部多次彻底消毒。

（2）羊支原体肺炎的传染性强，致死率高，对养殖业会造成较大的危害。对这一疾病的防治，主要是平时加强预防措施，防止引入病羊和带菌者，新引进羊必须隔离检疫1 个月以上，确认健康后方可混群。免疫接种是预防该病的有效措施，目前国内支原体肺炎疫苗包括山羊传染性胸膜肺炎氢氧化铝苗、鸡胚化弱毒苗和绵羊肺炎支原体灭活苗等，可根据病原分离结果进行使用。