宁夏地区2 032例不同产前诊断指征孕妇羊水染色体核型分析

宋 娟,李 春,张 丽,马海霞

1.宁夏回族自治区银川市妇幼保健院检验科,宁夏银川 750000;2.上海市长宁区妇幼保健院检验科,上海 200051

染色体疾病是由染色体数目或者结构异常引起各种表型的疾病,临床多表现为智力低下、发育迟缓、性发育异常、成年后生育障碍等。胎儿出生缺陷多与染色体异常有关,染色体疾病是严重的遗传疾病,对患儿及其家庭造成沉重负担,且目前尚无良好的治疗办法[1-2]。我国每年大约有100万新生儿患有出生缺陷,占新生儿的5%,其中染色体异常的总患病率为1.8‰,占所有出生缺陷的3.6%。由于大多数染色体疾病无有效的治疗手段,产前筛查及产前诊断在控制出生缺陷中发挥着极为重要的作用[3]。随着医学技术的不断发展,产前筛查及产前诊断的方法逐渐多样化,包括传统的血清学筛查、超声筛查,以及无创产前检测(NIPT)等。但羊水穿刺等检测手段获取标本的方式有创,可能引起胎儿畸形或流产等风险[4]。本研究对在银川市妇幼保健院(以下简称本院)产前诊断中心就诊的2 032例羊水穿刺孕妇进行羊水染色体核型分析,探讨了羊水染色体异常核型与不同的产前诊断指征之间的关系,以评估不同产前检测方法的临床应用价值,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2021年12月于本院产前诊断中心就诊的孕妇2 032例,年龄17～45岁、平均(31.59±4.81)岁,孕周16～26周。孕妇及家属签署知情同意书后,经羊膜腔穿刺抽取羊水进行细胞培养、染色体核型分析。产前诊断指征:(1)NIPT高风险。NIPT提示13、18、21-三体高风险及其他染色体异常。(2)血清学唐氏筛查高风险。血清学筛查提示18、21-三体高风险或神经管畸形高风险。(3)高龄。孕妇年龄≥35岁。(4)超声检查异常。超声检查提示心脏畸形(房间隔缺损、室间隔缺损、单心室等)、神经系统畸形(无脑畸形、脑积水、脊柱裂等)、胎儿颜面部畸形(唇腭裂、小下颌畸形等)、颈部透明层(NT)增厚、脉络丛囊肿、鼻骨发育不良或缺失、心室强回声斑、侧脑室增宽、单脐动脉、胎儿手足姿势异常等,具有2项及以上指标者。(5)夫妇染色体异常。夫妇一方有染色体异常。(6)不良孕产史。曾有反复流产、胎停、死胎、染色体异常、患儿生育史等。纳入标准:单胎自然受孕,孕周16～26周;符合以上任意一种产前诊断指征(符合1项即可)。排除标准:1年内接受过异体输血等。

1.2方法 在超声引导下进行羊膜腔穿刺术,抽取羊水30 mL,分装于2支15 mL无菌离心管,1 200 r/min,离心8 min后弃上清液,留取约0.5 mL制成细胞悬液,各加入4 mL羊水培养基,接种于25 cm3无菌培养瓶中,平铺混匀。按照两线培养原则,置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养7～10 d,观察后按照实验室制订的标准操作规程,经收获、制片、染色体G显带后,使用全自动染色体扫描仪LAICA GSL-10扫描。对羊水细胞进行染色体分析,两线各计数10个核型,每线分析2～3个核型(本研究共计数20个核型,分析5个核型)。如遇性染色体数目嵌合,加大计数至100个细胞。核型诊断标准按照人类遗传学国际命名体系(ISCN2016)执行[5]。

2 结 果

2.1不同产前诊断指征孕妇羊水染色体异常核型检出情况 2 032例羊水标本中检出染色体异常核型153例,检出率为7.53%。不同的产前诊断指征孕妇染色体异常核型检出率不同,其中具有NIPT高风险指征者检出率最高,为46.49%;具有唐氏筛查高风险指征者检出率为2.86%;具有高龄指征者检出率为6.93%;具有超声检查异常指征者检出率为4.69%;具有夫妇染色体异常指征者检出率为30.30%;具有不良孕产史指征者检出率为3.10%。见表1。

表1 不同羊膜腔穿刺指征异常核型种类及其检出率比较

2.2异常核型种类及例数 2 032例孕妇中羊水培养成功2 032例,成功率为100%。羊水染色体异常核型中数目异常占67.32%(103/153),其中21-三体最多(75例),其次为性染色体数目异常(19例);结构异常占18.30%(28/153),嵌合体占14.38%(22/153)。见表2。

表2 羊水染色体异常核型检出情况

3 讨 论

染色体异常是导致出生缺陷的重要因素之一。我国出生人口较多,随着社会发展和国家二孩、三孩政策的实行,女性生育年龄普遍延迟,高龄孕妇逐渐增多,妊娠合并症的发病率也明显升高[6]。染色体疾病目前仍无有效的治疗方法,只能联合应用多种产前检测手段,从而减少该类疾病患儿的出生。本研究针对6种不同的产前诊断指征,研究宁夏地区2019年1月至2021年12月2 032例孕妇羊水标本发现,染色体异常核型153例,检出率为7.53%(153/2 032),与近几年国内其他地区报道的检出率相似(5.93%～8.10%)[7-8]。本研究收集的羊水标本数量有限,由于各地区人群染色体异常发生率不同,纳入分析的孕妇中,其产前诊断各指征的比例也有所不同,故各地报道染色体异常的检出率有差异。

NIPT对胎儿非整倍体染色体的筛查具有较高的准确率、检出率以及较低的假阴性率和假阳性率[9-10]。本研究2 032例羊水标本中NIPT高风险114例,异常核型53例,检出率为46.49%,以21-三体、性染色体异常及嵌合体多见。NIPT凭借无创安全、可早期检测、准确率高等优点在产前筛查中的应用越来越广泛,但仍有一定的局限性,对平衡易位、倒位等染色体结构异常仍无法检出,也慎用于年龄≥35岁及多胎妊娠的孕妇等,不适用于夫妇一方有明确染色体异常、胎儿超声检查提示有结构异常等情况。

本研究中因唐氏筛查高风险进行产前诊断的孕妇665例,异常核型19例,检出率为2.86%。唐氏筛查是一种通过检测孕妇血清中甲胎蛋白、绒毛膜促性腺激素和游离雌三醇的水平,并结合预产期、体质量、年龄和采血时的孕周等,计算生出先天性缺陷胎儿危险系数的检测方法。由于技术原理限制,此方法存在一定的漏诊率及误诊率。

自2016年以来,随着我国生育政策的放开,高龄(≥35岁)孕妇不断增加。本研究中高龄孕妇707例,异常核型49例,其中21-三体27例。多项研究认为,胎儿染色体异常发生率与孕妇年龄呈正相关,并且孕妇年龄>38岁,胎儿染色体总体异常率显著上升[11-12]。因此,对于高龄孕妇,建议直接行羊膜腔穿刺术进行产前诊断。

随着超声技术的不断发展,产前超声在产前诊断中发挥了越来越重要的作用。B超可检测出的异常包括羊水过多或过少,以及肾积水、NT增厚、双侧(单侧)脉络丛囊肿、侧脑室囊性水肿、胎儿水肿、胎儿心室内强回声点等各种胎儿畸形,均可能与染色体异常有关[13-14]。本研究中由于超声检查异常进行产前诊断的患者384例,异常核型18例,检出率为4.69%。

本研究中夫妇染色体异常核型检出率较高(30.30%)。33例夫妇一方染色体异常患者中异常核型10例,均为遗传自双亲一方的染色体发生平衡易位或者倒位,虽然该异常情况对胎儿无临床效应,但其成年后会出现生育问题。有少数病例会出现遗传过程中染色体部分丢失或者重复的情况,胎儿会出现各种临床表型。故夫妇染色体异常时进行产前诊断很有必要。

不良孕产史发生的原因较多,常见的是自然流产和胚胎停育,有不良孕产史尤其是伴染色体异常患者再次妊娠时,羊水染色体异常的风险显著升高。本研究中129例具有不良孕产史指征的孕妇中异常核型4例,检出率为3.10%。

综上所述,有NIPT高风险、唐氏筛查高风险、高龄、超声检查异常、夫妇染色体异常、不良孕产史指征的孕妇进行羊水染色体的检查,其异常检出率明显升高。但是染色体检查仍有一定的局限性,对于染色体微缺失、微重复以及单基因病、多基因病无法检出。因此,在实际应用中应根据临床实际情况将多种检测技术联合使用,以减少染色体异常患儿的出生率,提高我国出生人口质量。