康复新液对大鼠萎缩性胃炎合并糜烂的治疗作用

李东哲,陈 希,杨明华

(1.浙江中医药大学 药学院,浙江 杭州 310053;2.建德市第一人民医院 药剂科,浙江 淳安 311600;3.浙江省中药研究所 糖尿病重点实验室,浙江 杭州 310023)

萎缩性胃炎合并糜烂又称为急性胃黏膜病变,其发生机制尚不能完全阐述,可能与外源性及内源性损伤引起的黏膜血流减少或胃黏膜防御机制被破坏而导致胃酸及胃蛋白酶损伤胃黏膜相关。有研究显示[1],萎缩性胃炎合并糜烂有癌变倾向。目前西医临床多以保护胃黏膜、药物抑酸等方法治疗,但治疗进程缓慢,且长期抑酸药物的使用引发的不良反应较多,临床效果并不理想。康复新液是蜚蠊科美洲大蠊干燥虫体,经乙醇提取并凝练的动物中成药,可化瘀破积聚、通利血脉[2]。现代药理学研究显示[3]:康复新液可有效改善局部微循环,抗炎活血消肿,能够加速受损组织的修复,促进血管及肉芽组织生长,并能够促进坏死细胞组织的脱落。目前康复新液常用于外伤所致创面的修复治疗,对消化道类疾病的研究尚有不足。本研究应用康复新液治疗萎缩性胃炎合并糜烂大鼠,观察其效果,望为拓展更多临床用药选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 动物 健康SPF级SD大鼠100只,雌雄各占一半,体质量180～230 g,由上海上药第一生化药业有限公司提供(生产许可SCXK(沪)2021-0005),由北京百奥思科动物实验室饲养并进行实验(伦理批号MDL-2022-09-16-09),饲养于专门动物饲养笼内(雌雄分笼),笼内通风隔音,使用实验动物配方喂养,自由进食进水。光照及黑暗12 h交替,室内温度控制在(24.37±2.01)℃内,空气的相对湿度为40%～55%,适应性饲养一周。本实验研究符合中国伦理委员会有关动物研究指导原则。

1.2 主要药物与试剂 康复新液(四川好医生攀西药业有限责任公司,国药准字Z51021834);水合氯醛(青岛宇龙海藻有限公司,国药准字H37022673);水杨酸钠(四川省维克奇生物科技有限公司,规格:20 mg);精密pH试纸(上海三爱思试剂有限公司);大鼠血清胃蛋白酶原-Ⅱ(PGⅠ、PGⅡ)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS )ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司,货号分别为mlsh0487、ml058957-1、ml059375-1)。

1.3 动物模型建立[4-5]取20只大鼠作为空白对照组,余80只随机分为模型对照组和治疗A组、B组、C组,每组20只,按照相关文献[4-5]建立萎缩性胃炎合并糜烂模型。造模后1周,各组随机抽取1只(共计4只)大鼠行麻醉后脱臼处死,HE切片观察病灶是否发生腺体消失、炎症细胞坏死或浸润等,确定是否造模成功。

1.4 分组及给药方式 确定建模成功后,参照《中药药理研究方法学》[6],根据大鼠和人体表面积折算系数,计算大鼠的给药剂量为10 mL/kg。治疗A、B、C组采用康复新液灌胃,浓度分别为0.10、0.05、0.025 g/mL;空白对照组及模型对照组给予蒸馏水灌胃;各组灌胃1次/d,连续8周。末次灌胃后,使用实验动物配方继续饲养7周。

1.5 观察指标及检验方法 实验期间,每3周对大鼠的体重变化、饮食情况、活动状态等进行观察及测量。饲养15周后,大鼠禁食不禁水24 h后取大鼠腹腔主动脉血2 mL分离血清至-80 ℃ 保存,采用酶联免疫法(ELISA)检验胃蛋白酶原-Ⅱ(PGⅠ、PGⅡ)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。随后按照每100 g 0.2 mL 10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,切开大鼠腹腔结扎贲门及幽门并摘除全胃,取注射器吸取胃液,采用精密pH试纸检测胃酸pH值;向胃中注入10%中性甲醛溶液5 mL进行固定,并将全胃浸没在10%中性甲醛溶液中,30 min后沿大弯侧剪开胃部,用已预冷的PBS缓冲液缓慢冲洗,肉眼观察胃部病变情况;取食管端至十二指肠端大弯侧胃黏膜组织,制作石蜡包埋切片,HE染色后,在显微镜下观察胃黏膜损伤程度,并用Guth等[7]标准计算胃黏膜溃疡指数(ulcer index,UI),并以累积积分制计算:斑点糜烂=1分;糜烂长度<1 mm=2分,<2 mm =3分,<4 mm =4分,≥4 mm =5分;宽度超过2 mm以上分值均×2。

2 结果

2.1 大鼠一般情况 造模期间,模型对照组大鼠死亡3只,治疗A、B、C组分别死亡2、1、3只;造模的各组主动处死大鼠各1只。实验结束后,空白对照组大鼠活泼好动,毛发颜色洁白且有光泽,状态一切正常;模型组大鼠自建模开始,逐渐出现毛发枯槁且稀疏易脱落,易疲倦不活跃,对移动箱笼及投喂等活动响应度低;各治疗组采用康复新液灌胃后,萎靡状态逐渐改善,毛发光泽度、清洁度等均逐步恢复。

2.2 大鼠体质量变化 饲养15周后,空白对照组大鼠体质量持续上升;模型组自建模后体质量持续下降,各治疗组大鼠在康复新液灌胃后,体质量逐步恢复并持续增加;治疗A、B、C组间大鼠体质量在第9周差异有统计学意义(P<0.05);第15周,各治疗组大鼠体质量与模型对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 实验期间各组大鼠体质量变化情况Figure 1 Changes in body mass of rats in each group during the experiment

2.3 大鼠胃组织病理表现 空白对照组大鼠胃部黏膜组织各层结构清晰,腺体排列整齐且紧密,黏膜层无炎症;模型对照组黏膜固有腺体大量减少且结构松散,呈现出不同程度的萎缩状态,黏膜层内嗜酸性粒细胞成团浸润,呈现轻中度炎症;见封三图2A、B。治疗C组腺体排列紧密,黏膜有轻度炎症表现;治疗A、B组可见胃组织结构紧密,未有炎症表现;见封三图2C、D、E。

2.4 各组大鼠UI及胃液pH值 各治疗组的UI均低于模型对照组;且治疗A组小于B、C组,B组小于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各治疗组胃液pH值均高于模型对照组,且治疗A组高于B、C组,B组高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠胃黏膜UI及胃液pH值比较

2.5 各组大鼠血清指标比较 5组间、各治疗组间及其与模型对照组的血清各指标水平,差异均有统计学意义(P<0.05),见表2。模型组中,治疗A组TNF-α水平最低,余各指标水平均为最高。

表2 各组大鼠血清指标比较

3 讨论

萎缩性胃炎伴糜烂内镜下表现为胃部脐状凹陷而深,胃小凹之间隆起分布不均,细胞增生脱落呈网状,绒毛增多增长呈地毯样外观;病理组织切片表现为黏膜变薄,固有腺体减少或消失,亦或部分被纤维组织替代等[8]。王鸣等[9]研究显示,环氧合酶-2和Ki-67基因在胃炎伴糜烂及胃癌组织中均呈高表达。目前该病的西医临床治疗方案并不统一,多以制酸、保护胃黏膜为主,但临床效果不尽人意。

中医认为胃损伤可与多种因素相关,如情志不舒、饮食不节、外邪入侵、药物损伤以及先天不足等。脾胃不调、水谷精微不化,受纳失常,使各器官气血生化能力下降,遂痰湿阻滞、气血不畅、脾胃气机更加阻碍。故应予以健脾和胃,调节气机,活血通脉[8]。中药典籍记载,蜚蠊可清热解毒消积、活血化瘀生肌[10];现代药理研究[11]显示,美洲大蠊乙醇提取物含有多种活性物质,包括氨基酸、多元醇及表皮生长因子等,并能有效降低肿瘤坏死因子(TNF-α)等炎性因子水平,有效改善炎症反应。本研究采用水杨酸钠灌胃结合单双日断食、饱食刺激,模拟人类不正常饮食及生活习惯,使胃黏膜处于反复的刺激损害中,更贴近人类的发病机制。建模成功后,模型组大鼠均呈现出毛发变稀疏、脱落、活跃度差、应激反应慢等状态,而治疗组在康复新液灌胃后,萎靡状态逐渐改善。

本实验中病理组织显示治疗A、B组无明显炎症表现,治疗C组有轻微炎症,模型对照组有轻、中度炎症;治疗组血清TNF-α水平低于模型对照组。提示康复新液确实可提高糜烂组织的修复作用,改善胃黏膜炎性状态。胃肠激素主要由胃肠黏膜的化学信使细胞分泌,是调节消化器官的重要肽类物质,包括蛋白酶原(PG)、GAS、MTL、生长抑素、5-羟色胺等。PG是胃蛋白酶的无活性前体,而其PGⅠ、PGⅡ具有保护胃肠道结构及功能完整的作用。当胃出现炎性或萎缩等病理变化时,PGⅠ波动较大,PGⅡ相对稳定。康复新液可抑制黏膜炎性因子渗出,增强吞噬细胞的吞噬作用,促进溃疡创面的愈合和新生肉芽组织的生长,使PGⅠ等物质分泌恢复正常水平[11]。GAS可促进胃肠分泌,营养及保护胃黏膜,增加胃动力[12]。胃酸增加会刺激交感神经兴奋,GAS分泌受到抑制。MTL可促进胃肠运动,调节胃肠道水电解质的运输。研究[2]表示,萎缩性胃炎的发生与胃肠激素分泌降低。通过康复新液干预后,胃肠激素可明显上调,消化功能明显提高。本研究结果亦显示,治疗组的PGⅠ、PGⅡ、GAS、MTL均高于模型对照组,且治疗A、B、C三组水平依次降低。提示了康复新液对提高胃肠激素的水平具有优势,且1.00 g/mL浓度表现最优。

综上所述,康复新液治疗大鼠萎缩性胃炎合并糜烂的效果显著,可有效减少胃部糜烂组织,降低血清肿瘤坏死因子水平,改善胃肠激素分泌,提高消化能力。