miR-133b在子宫内膜癌中的表达及临床意义

党引利,罗海霞,刘莹莹,刘晓莺,樊海燕

陕西省榆林市第一医院检验科,陕西榆林 719000

子宫内膜癌(EC)又称子宫体癌,其发病率位居妇科恶性肿瘤首位,主要发生于围绝经期和绝经后的中老年妇女中,严重威胁女性身心健康和生命安全[1]。虽然大多数EC患者经临床合理治疗后可获得较好预后,但相较于其他恶性肿瘤逐渐下降的病死率,EC病死率却呈现明显增长趋势[2]。寻找新的高效的治疗靶点对于改善EC患者预后具有重要意义。微小核糖核酸(miRNA)是近年研究较多的,与恶性肿瘤发生、发展、转移等密切相关的非编码内源性RNA[3-4]。近年研究亦在EC病灶组织中发现了许多表达异常的miRNA[5-6]。miR-133b位于6号染色体短臂1区2带,其低表达与食管鳞癌、直肠癌患者细胞增殖、侵袭、迁移有关[7-8],其高表达与宫颈癌的发生、发展有关[9],但关于其在EC中的表达及作用的分析报道较为少见。本研究旨在探讨miR-133b在EC癌变组织中的表达及意义,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 以本院2020年1月至2022年6月在肿瘤病灶切除术中收集的EC癌变组织(EC组)、诊断性刮宫术中收集的子宫内膜增生性病变组织(增生组)、进行诊断性刮宫术或行子宫切除术的子宫异常出血者和子宫肌瘤者的正常子宫内膜组织(对照组)各66例为研究对象。各组织来源者的纳入标准:术前未接受任何药物治疗;顺利完成手术操作;获得新鲜子宫内膜组织标本,且保存良好;临床资料完整。各组织来源者的排除标准:合并凝血系统或免疫系统疾病;合并严重心、肝、肾、肺和脑血管疾病;合并其他部位肿瘤。EC组患者年龄39～70岁,平均(54.64±7.46)岁;增生组患者年龄36～71岁,平均(53.27±8.05)岁;对照组患者年龄36～69岁,平均(51.72±6.92)岁。3组患者年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)。本研究均征得患者或陪同家属同意,且签订知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1miR-133b测定 (1)总RNA提取:取适量子宫内膜组织标本,加液氮快速研成粉末,严格参照Trizol试剂盒说明书,加入总RNA抽提试剂,提取组织标本中的总RNA;紫外分光光度计检验提取的RNA纯度,测定标本吸光度(A)。当A260/230和A260/280均在1.9～2.1时,提示RNA纯度达标。1%琼脂糖凝胶电泳分析提取的RNA,电泳样带5S rRAN、18S rRAN、28S rRAN清晰存在时,证明提取的RNA完整性良好。(2)RNA检测:严格按照反转录试剂盒说明书合成上述提取物的反转录cDNA标本;以反转录cDNA为模板(3.0 μL),联合miR-133b正向和反向引物各1.0 μL(正向引物:5′-CTT TGG TCC CCT TCA ACC A-3′,反向引物:5′-GTG CAG GGT CCG AGG T-3′),2×SYBR Green Ⅰ Master混合物12.5 μL,双蒸水7.5 μL,选择实时荧光定量PCR技术,经过95 ℃预变性3 min,95 ℃变性10 s,59.2 ℃退火30 s,70 ℃延伸30 s,反复40个循环,测定标本中miR-133b水平,记录反应标本的Ct值,用2-ΔΔCt计算组织标本中miR-133b表达水平。

1.2.2肿瘤标志物检测 分析天平精确称取EC组子宫内膜组织1 000 mg,加入液氮充分研磨后转入2 mL RIPA裂解液匀浆,17 000 r/min离心10 min,分离上清液保存待用。采用化学发光法测定组织上清液中肿瘤标志物人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)表达水平。结果判断:HE4>140 pmol/L为阳性,HE4≤140 pmol/L为阴性;CA125>35 U/mL为阳性,CA125≤35 U/mL为阴性。

1.2.3雌激素受体(ER)检测 获取EC子宫内膜组织标本,4%甲醛溶液固定,经石蜡包埋、切片、免疫组化染色后,显微镜下观察组织切片,细胞核或细胞膜中出现棕黄色颗粒,判定为阳性细胞。依据阳性细胞占比进行切片中ER阳性表达判定,阳性细胞占比>5%判定为ER阳性表达[10]。

2 结 果

2.13组子宫内膜组织中miR-133b表达水平比较 EC组患者子宫内膜组织miR-133b表达水平为0.65(0.46,1.09),增生组为1.32(0.93,1.72),对照组为1.84(1.45,2.31),3组子宫内膜组织miR-133b表达水平比较,差异有统计学意义(H=80.513,P<0.05),且EC组低于增生组和对照组(Z=5.787、8.199,P<0.05),增生组低于对照组(Z=4.624,P<0.05)。

2.2不同临床病理特征EC患者子宫内膜组织miR-133b表达水平比较 不同年龄、病理分型、细胞分化程度、肌层浸润深度、ER表达的EC患者子宫内膜组织miR-133b表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、HE4阳性、CA125阳性的EC患者子宫内膜组织miR-133b表达水平均低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、HE4阴性、CA125阴性的患者(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征的EC患者子宫内膜组织中miR-133b表达水平比较

2.3EC组患者子宫内膜组织miR-133b表达水平与FIGO分期、淋巴结转移、HE4表达、CA125表达的相关性 相关分析显示,EC组患者子宫内膜组织中miR-133b表达水平与FIGO分期、淋巴结转移、HE4表达、CA125表达呈负相关(r=-0.445、-0.405、-0.445、-0.534,P<0.001)。

2.4miR-133b对EC、EC病理分期及淋巴结转移的诊断效能 ROC曲线分析显示:以增生组为对照,miR-133b诊断EC的曲线下面积(AUC)为0.802(95%CI:0.726～0.877);以FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期为对照,miR-133b诊断FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期的AUC为0.765(95%CI:0.650～0.880);以无淋巴结转移为对照,miR-133b诊断EC淋巴结转移的AUC为0.826(95%CI:0.756～0.895)。见图1和表2。

注:A为miR-133b诊断EC的ROC曲线;B为miR-133b诊断EC病理分期的ROC曲线;C为miR-133b诊断EC淋巴结转移的ROC曲线。图1 子宫内膜组织中miR-133b诊断EC、EC病理分期和淋巴结转移的ROC曲线

表2 miR-133b对EC、EC病理分期及淋巴结转移的诊断效能

3 讨 论

EC是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,且近年来其发病率呈现出一定上升趋势。有研究指出,EC患者的预后与疾病早期诊断及病情进展情况密切相关,当病灶仅局限于内膜组织时,其5年生存率可高达91%,但当发生远处转移时,5年生存率可降至17%以下[11]。故做好EC诊断及病情进展状况的准确判断对患者预后的评估至关重要。

目前已存在的诊断性刮宫技术、盆腔镜技术及磁共振技术等虽然在EC诊断中有一定的灵敏度和特异度,但仍存在一定局限性[12]。miRNA是一类长度约为22～25个核苷酸的单链RNA,被越来越多研究证实与恶性肿瘤的发生、发展相关[13]。miR-133b被证明是细胞代谢中的关键分子,可在转录后调节机体代谢[14]。CHENG等[15]研究发现,miR-133b属于海绵肿瘤中的抑制基因;LI等[16]在卵巢癌研究中发现,卵巢癌患者卵巢组织及血液中miR-133b水平均显著低于正常卵巢组织,miR-133b可通过抑制Warburg效应而抑制肿瘤的发生、发展,并提出这一发现可能会改善卵巢癌的诊断及治疗方法。 LIAO等[17]在EC研究中发现,miR-133b在EC组织中低表达,且在肿瘤高病理分期和绝经患者中表达水平较低,在EC患者体内miR-133b可通过下调SUMO1抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭作用。本研究得到与LIAO等[17]相似的结果,EC组子宫内膜组织miR-133b表达水平显著低于增生组和对照组,且其在FIGOⅢ～Ⅳ期、有淋巴结转移、HE4阳性、CA125阳性患者子宫内膜组织中的表达水平均显著低于FIGOⅠ～Ⅱ期、无淋巴结转移、HE4阴性、CA125阴性的患者(P<0.05),证实在EC患者体内miR-133b呈低表达状态,且病情越严重其表达水平越低。HE4和CA125是临床常用的肿瘤标志物,对EC诊断均具有较高价值[18]。本研究相关分析显示,EC组患者子宫内膜组织中miR-133b表达水平与HE4和CA125表达呈负相关(P<0.05),提示miR-133b可用于EC诊断及病情判断。进一步ROC曲线分析显示,miR-133b对EC、EC FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期和淋巴结转移均具有一定诊断价值,AUC分别为0.802、0.765和0.826,但单独用于病理分期发展诊断的特异度较低,若与其他肿瘤标志物进行联合检测,有可能会提高其临床应用价值。

综上所述,miR-133b在EC中呈低表达,在EC发生和病情发展方面均具有一定诊断价值。但受时间和其他条件限制,本研究仍存在诸多不足有待后续进一步证实。诸如,miR-133b均低表达于卵巢癌病灶组织和血清中,该现象是否同样存在于EC中?临床是否可通过监测血清miR-133b进行EC早期判断?此外,基质金属蛋白酶(MMP)-9在EC转移中起促进作用[19],而以往在诸多恶性肿瘤发病机制研究中发现miR-133b通过调节MMP-9代谢,抑制肿瘤的发生、发展[9],该机制是否同样存在EC中?有待进一步研究分析。