冠心病伴2型糖尿病患者外周血miR-6089水平与冠状动脉狭窄程度的关系

曹丽慧, 孟宪杰

唐山市人民医院内分泌科,河北唐山 063001

随着生活节奏加快、人口老龄化进展,中国心血管疾病的发病人数逐渐增加,心血管疾病占死亡原因第一名[1]。近年来临床关于糖尿病与心血管疾病间关系的研究逐渐增多,糖尿病患者的心血管疾病发生率明显高于非糖尿病患者,且全因死亡率更高,血糖升高是心血管疾病发生的危险因素[2]。血管平滑肌细胞增殖、迁移被认为是冠状动脉狭窄的重要因素,分析血管平滑肌细胞增生的基因表达对防治冠状动脉狭窄有重要意义[3]。miRNA在细胞增殖、迁移、侵袭、分化及转移等多种病理、生理过程中具有重要作用,其中miR-6089是细胞周期调控因子下游小RNA,可通过靶向肌球蛋白重链9以激活Wnt/β-catenin信号通路,具有抑制上皮间质转化作用,是潜在的肿瘤抑制因子[4]。本研究选取本院冠心病伴2型糖尿病患者,旨在分析miR-6089与冠状动脉狭窄关系,为临床防治提供依据,现报告如下。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选取2020年4月—2022年3月本院冠心病伴2型糖尿病患者183例为研究对象,其中男98例,女85例;年龄46～73岁,平均(59.19±6.08)岁。所有患者均符合冠心病[5]、2型糖尿病[6]诊断标准,至少存在一支主要冠状动脉直径狭窄≥50%,均排除合并免疫系统疾病、血液系统疾病、甲状腺功能亢进/减退、心力衰竭、急慢性感染、肿瘤。

1.2 miR-6089检测

采集外周血3 mL,采用台式离心机分离血浆,取血浆样本200 μL,加入QIAzol裂解试剂1 mL,振荡30 s,室温下孵育5 min;EP试管内加入氯仿200 μL与混合样本,用力摇晃15 s,室温下孵育3 min,4 ℃ 3 000 r/min离心15 min,取上层清液至新的EP管,添加1.5倍100%乙醇,上下颠倒混匀;吸取700 μL样本至装有离心柱的2 mL EP试管,室温下3 000 r/min离心15 s,其余样本重复本操作;样本洗脱RNA并提取,确保RNA浓度、纯度合格后进行反转录,采用实时定量荧光PCR法检测,正向引物:5′-CCAGCCTCCGAGGGCAGA-3′,反向引物:5′-TCCCTCCAGCAGTGAAGAAG-3′,计算相对水平。

1.3 冠状动脉狭窄程度评价

对患者实施冠状动脉造影,由本院3名经验丰富的影像学医师分别采用Gensini评分进行冠状动脉狭窄程度评估[7],计算Gensini总分,其中Gensini评分≤30分判定为轻度狭窄,>30分为重度狭窄。

1.4 观察指标

①比较不同冠状动脉狭窄程度患者的一般资料。②分析冠状动脉重度狭窄的影响因素。③分析冠状动脉狭窄程度与影响因素的相关性。④miR-6089水平预测冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的价值。⑤miR-6089水平与Gensini评分的剂量-效应分析。⑥不同miR-6089表达水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉重度狭窄发生率。

1.5 统计学分析

通过SPSS 22.0处理数据,计量资料采用方差分析;计数资料采用χ2检验;采用Logistic回归模型分析冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉重度狭窄的影响因素;采用Spearman分析Gensini评分与冠状动脉狭窄影响因素的相关性;采用ROC分析miR-6089水平预测冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的价值;采用限制性立方样条模型分析miR-6089水平与冠状动脉狭窄的线性剂量反应关系。以P<0.05表示差异具有显著性。

2 结 果

2.1 不同冠状动脉狭窄程度患者的一般资料比较

183例患者中冠状动脉轻度狭窄109例,重度狭窄74例。与轻度狭窄的冠心病伴2型糖尿病患者比较,重度狭窄的患者糖尿病病程更长,糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平更高,支架植入率、miR-6089水平更低(P<0.05;表1)。

表1 不同冠状动脉狭窄程度患者的一般资料比较

2.2 冠状动脉重度狭窄的影响因素分析

以冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度为因变量,以糖尿病病程、糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白、支架植入、miR-6089为自变量,根据狭窄程度(轻度=0,重度=1),支架植入(无=0,有=1),其他自变量按照实际值进行赋值,采用Logistic回归分析,结果显示,糖尿病病程延长及糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高为冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉重度狭窄独立危险因素,miR-6089水平提高是重度狭窄的保护因素(P<0.05;表2)。

表2 冠状动脉重度狭窄的影响因素分析

2.3 冠状动脉狭窄程度与影响因素的相关性分析

相关性分析结果显示,糖尿病病程、糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平与Gensini评分呈正相关关系(r=0.306、0.395、0.407、0.358,P<0.05),miR-6089水平与Gensini评分呈负相关关系(r=-0.416,P<0.05)。

a为P<0.05,与轻度组比较。

2.4 miR-6089水平评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的ROC分析

miR-6089评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的AUC值为0.784,灵敏度为81.08%、特异度为60.55%,cut-off值为≤2.11,Youden指数为0.416,95%CI为(0.717～0.841),提示血清miR-6089评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度具有较高价值(P<0.001;图1)。

图1 miR-6089水平评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的ROC

2.5 miR-6089水平与Gensini评分的剂量-效应分析

根据多因素分析结果,校正糖尿病病程、糖化血红蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白等因素,采用限制性立方样条模型分析miR-6089水平连续变化与Gensini评分的关系,以miR-6089水平为横轴,预测OR值为纵轴,上下虚线代表95%CI,由图2可看出,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089水平连续变化与Gensini评分呈负相关关系。

图2 miR-6089水平与Gensini评分的剂量-效应分析

2.6 不同miR-6089表达水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉重度狭窄发生率

以ROC中cut-off值为判定标准,183例患者中miR-6089高表达105例、低表达78例。miR-6089低表达的患者冠状动脉重度狭窄发生率70.51%,高于高表达者的狭窄率18.10%(P<0.001)。

3 讨 论

近年来冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉相关并发症成为临床研究热点,由于长期高血糖可促进动脉粥样硬化、加剧内膜损伤及氧化应激反应、提高炎症因子表达,合并2型糖尿病的冠心病患者更易出现冠状动脉损伤[7]。2型糖尿病发生血管并发症的始动因素与内皮细胞功能有关,高血糖可进一步加重内皮损伤,同时长期糖尿病伴随脂质代谢紊乱、糖毒性,多种因素共同作用造成2型糖尿病冠状动脉并发症[8]。关于糖尿病对冠状动脉损伤的具体机制尚不明确,一般认为与血脂紊乱、胰岛素抵抗、高血糖等密切相关,这些因素可使包括内皮细胞、血管平滑肌细胞在内的多种细胞功能发生改变,最终造成冠状动脉狭窄[9]。越来越多的证据显示,血管平滑肌细胞过度迁移、增殖对促进冠状动脉狭窄有积极作用,研究[10]显示,miR-6089对血管平滑肌增殖有一定抑制作用,但其是否能用于评估冠状动脉狭窄程度仍缺乏循证依据。

miR-6089有助于抑制卵巢癌的发生、进展,但其在冠心病、2型糖尿病患者中的表达情况尚未有研究分析[11]。本研究结果发现,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表达与Gensini评分呈负相关关系,且冠状动脉重度狭窄的患者miR-6089表达水平更低,可能是由于影响冠状动脉狭窄的因素较多,而miR-6089仅为其中之一。miR-6089可抑制脂多糖诱导的细胞增殖及巨噬细胞活化,同时可有针对性地控制TLR4信号转导调节白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α等炎症因子分泌,抑制炎症因子造成的内皮损伤,对抑制冠心病进展有积极作用[12];但miR-6089异常低表达时,其生理作用明显削弱,对脂多糖诱导的细胞增殖控制能力降低,且加剧疾病进展过程中的炎性损伤,促使冠心病病情加重,加快冠状动脉狭窄进程[13-15]。因此,通过检测miR-6089表达水平可一定程度上评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度。进一步通过ROC分析,发现miR-6089评估冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度的AUC值为0.784,且灵敏度、特异度均较高,表明采用miR-6089预测冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度具有较高准确性。但需指出的是,仅把miR-6089作为连续变量纳入Logistic回归模型,结果偏移性较大,故本研究首次采用限制性立方样条模型分析miR-6089连续变化对冠状动脉狭窄的影响,随着miR-6089水平升高,冠状动脉重度狭窄的风险性明显下降,进一步表明miR-6089与冠状动脉重度狭窄之间的关系。因此,选择miR-6089作为分析冠心病伴2型糖尿病患者冠状动脉狭窄程度及风险的指标具有一定价值,可为防治冠状动脉狭窄提供新的思路。

综上,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表达情况与冠状动脉密切相关。但关于引起miR-6089水平降低的上游因子及相关机制还需进一步探究。