甘肃省19 361例42 d至6岁健康儿童血常规参考区间建立*

韩 璐,赵慧敏,石云深,王平平,张 颖,钱柏友,汪梦棋,王临艳△

1.成都市公共卫生临床医疗中心检验科,四川成都 610066;2.甘肃省妇幼保健院临床检验中心,甘肃兰州 730050

我国幅员辽阔,环境差异极大,海拔、民族和生活习惯、年龄等方面的差异均会使得血常规参考范围出现差异[1]。甘肃省属于高海拔地区,多民族聚居,有必要科学建立本地区儿童血常规参考区间。末梢血检测血常规因采血量少,创伤小,低龄儿童及家长易接受等优势在儿童专科医院及儿科门诊中使用最为广泛,但其检测结果通常与静脉血存在差异[2]。本研究依据WS/T 402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》[3]标准,对甘肃地区19 361例健康体检儿童末梢血血常规进行调查分析,初步建立了本实验室针对42 d至6岁儿童末梢血血常规参考区间。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年1月至2021年8月在甘肃省妇幼保健院儿童保健科行常规健康体检,以及同时间段分别于甘肃省东、南、西、北、中部地区及甘南藏族自治州合作市、临夏回族自治州东乡县和张掖市裕固县等少数民族地区体检筛查的42 d至6岁的健康儿童19 361例作为研究对象。所有研究对象均根据WS/T 779-2021《儿童血细胞分析参考区间》[4]要求纳入。按照年龄分成6组,各组年龄段及人数分别为:42 d至6个月1 985例(男1 051例,女934例),>6个月至1岁5 783例(男3 027例,女2 756例),>1～2岁6 014例(男3 182例,女2 832例),>2～3岁2 830例(男1 513例,女1 317例),>3～4岁1 348例(男790,女558例),>4～5岁956例(男521例,女435例),>5～6岁445例(男236例,女209例)。

1.2检测参数 红细胞相关参数包括红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC),白细胞相关参数包括白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、中性粒细胞绝对值(NEUT#)、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、淋巴细胞绝对值(LYMPH#)、单核细胞百分比(MO%)、单核细胞绝对值(MO#)、嗜酸性粒细胞百分比(EO%)、嗜酸性粒细胞绝对值(EO#)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)、嗜碱性粒细胞绝对值(BASO#),血小板相关参数包括血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)、大血小板比率(P-LCR)。

1.3仪器与试剂 甘肃省妇幼保健院XN-550全自动五分类血液分析仪为本研究的基准仪器,其他合作医院均为日本 Sysmex五分类血液分析仪及其配套的试剂、质控品及校准品。校准和质控:每半年由厂商工程师对上述血液分析仪进行校准1次,每年上半年和下半年对仪器作精密度测试各1次,要求变异系数在仪器说明书规定范围内。每天开机用3个浓度(高值、中值、低值)XN-CHECK 质控品对血液分析仪进行检测,所有质控结果均在控。各医院室间比对均合格。

1.4方法

1.4.1检测方法 由熟练的检验人员严格按照《中国末梢采血操作共识》[5]采集末梢血的方法,采取儿童无名指末梢血100 μL于乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管内,1 h内完成血常规检测。对有少部分有核红细胞报警的样本,参照《临床检验操作规程》第4版的说明,由副高以上人员使用显微镜计数 200 个白细胞所看到的有核红细胞数,结果以有核红细胞数/100个WBC的形式记录,并进行人工白细胞的分类,同时对红细胞总数进行纠正[6]。白细胞的校正值=100×校正前白细胞数/(100+有核红细胞数)。

1.4.2参考区间的验证 各实验室、各年龄段随机选取20例末梢血血常规检测结果,验证新建立的参考区间,若各项检验结果不超过2例落在新建参考区间以外,则新建立的参考区间通过验证。

2 结 果

2.1红细胞相关参数参考区间 42 d至6岁儿童末梢血中红细胞相关参数RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC的统计合并后的参考区间见表1。RBC、MCV、MCH在同年龄段不同性别间差异均有统计学意义(P<0.000 1);Hb在>2～6岁儿童中不同性别差异有统计学意义(P=0.012 8),在小于2岁的儿童中不同性别差异无统计学意义(P=0.177 7、0.115 3)。MCHC在1岁以上儿童中不同性别差异有统计学意义(P<0.000 1),在小于1岁的婴幼儿中不同性别差异无统计学意义(P=0.573 3、0.184 3)。

表1 甘肃地区42 d至6岁儿童红细胞相关参数参考区间

2.2血小板相关参数参考区间 42 d至6岁儿童末梢血中血小板相关参数PLT、PDW、MPV、P-LCR、PCT统计合并后的参考区间见表2。6岁及6岁以内,PLT随年龄的增加而减少,女童PLT略高于男童,且在42 d至2岁儿童中不同性别差异有统计学意义(P<0.000 1),在>2～6岁儿童中不同性别差异无统计学意义(P=0.219 4)。MPV及PCT在同年龄段不同性别间差异均有统计学意义(P<0.05)。PDW在同年龄段不同性别间差异无统计学意义(P=0.941 5)。

表2 甘肃地区42 d至6岁儿童血小板相关参数参考区间

2.3白细胞相关参数参考区间 42 d至6岁儿童末梢血中WBC、LYMPH%、MO%、NEUT%、EO%、BASO%、LYMPH#、MO#、NEUT#、EO#、BASO#统计合并后的参考区间见表3。MO%、EO%、BASO%、MO#、EO#、BASO#在同年龄段不同性别间差异均有统计学意义(P<0.05);LYMPH%在>3～6岁儿童中不同性别差异有统计学意义(P=0.036 9、0.006 9),在42 d至3岁儿童中不同性别差异无统计学意义(P>0.05);NEUT%及NEUT#在42 d至2岁儿童中不同性别差异有统计学意义(P<0.05),在>2～6岁儿童中不同性别差异无统计学意义(P>0.05);WBC在同年龄段不同性别间差异无统计学意义(P=0.517 7)。

表3 甘肃地区42 d至6岁儿童白细胞相关参数参考区间

2.4淋巴细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞随年龄段变化趋势 在42 d至4岁儿童的LYMPH%较NEUT%更高,在>4～6岁时,LYMPH%与NEUT%趋于相等,见图1。而42 d至6个月儿童EO#在学龄前儿童中最高,且随年龄的增加而逐渐降低,>3～6岁趋于稳定,见图2。

图1 NEUT%及LYMPH%变化趋势

图2 EO#变化趋势

2.5参考区间验证 各实验室、各年龄段随机选取20例末梢血血常规检测,结果落在待验证参考区间以外的测定值均未超过2例,新建立的参考区间通过验证。

3 讨 论

正常参考区间通常是指健康人群参考值95%的中心区间,这类区间可作为分析检验结果,解释疾病情况的标准及依据。医学实验室拥有根据客观的、符合实际的参考区间,对于临床更加具有指导意义。对于儿童专科医院,儿童是就诊的重要主体之一,但是由于儿童疾病具有主诉不明,病情易隐藏,疾病进展迅速以及检测样本获得不易等情况,儿童参考区间的建立具有很大的难度,且血液学参考区间受许多因素的影响,如人口、地理位置、经济背景、生活习惯和饮食结构。对于有条件的实验室,有必要针对其实验室主要受众建立血液学指标的参考区间[8]。

关于血常规项目,临床常用的采血方式有2种,EDTA-K2抗凝的静脉血及末梢血。静脉血由于重复性好,采血量充足,易于复查等因素,临床上采用较多。末梢血位于肢体末端,受气温-肢体温度、血液循环能力、采血时组织液干扰等因素影响存在不可控差异,检测效果稳定性与静脉血具有一定的差距,但由于痛感轻微、采集量少及采集过程便捷等因素,被儿童及家长广泛接受,已经成为儿科门诊尤其0～6岁儿童单一采集血常规的主要方式[2]。围生期婴儿因存在无法避免的母体因素、生产因素以及采集因素,如宫内感染,新生儿黄疸,胎儿宫内窘迫,ABO溶血换血,新生儿采血困难易凝集等因素,对其外周血血细胞分析有一定的干扰[9],且此阶段的健康婴儿通常不需要做外周血血细胞分析,因此建立该人群的外周血血细胞分析参考区间具有一定的难度及不确定性。

本研究分析甘肃地区19 361例体检健康42 d至6岁儿童的血常规分布发现,与上海地区相比,RBC稍高,这可能与甘肃地区本地饮食中食用牛、羊肉等各类红肉较多有关[10]。同年龄段MCV与MCH女童略高于男童,并且差异有统计学意义(P<0.05),这与ZHANG等[7]的研究结论相一致。42 d至6岁儿童WBC相较于现存成人血细胞参考区间稍高,可能与小龄儿童存在潜在的轻微感染,病程隐匿有关。PLT在儿童早期最高,并且随着年龄的增长而降低,这与2021年4月颁布的中华人民共和国卫生行业标准WS/T 779-2021《儿童血细胞分析参考区间》[4]及WANG等[11]的研究相一致,这可能由于儿童血小板蛋白质组在促进正常生长发育及预防疾病发展方面发挥了重要作用[12],而同年龄段女童PLT略高于男童,差异有统计学意义(P<0.000 1)。有研究发现,女性PLT、PCT与男性有明显差异,并在各个年龄段,男性PLT、PCT总体水平均低于女性[13-14]。

本研究人群以汉族儿童为主,同时纳入甘肃省回族、蒙古族、藏族、东乡族、裕固族、保安族等少数民族儿童,但由于各民族之间受教育程度及对儿童保健意识的差异,故本研究中纳入少数民族人数较少,各民族之间未发现差异。

本研究分析了淋巴细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞随年龄段的变化趋势,结果显示,在42 d至4岁儿童的LYMPH%较NEUT%更高,在>4～6岁时,LYMPH%与NEUT%比趋于相等,这与第5版《临床检验基础》[15]中叙述一致。在42 d至1岁婴幼儿中EO#较高,高于其他学龄前年龄段,并且高于现行成年人血细胞参考区间中EO#,这可能与这一年龄段的婴幼儿的饮食模式及饮食内容持续性改变,至肠道环境属于持续致敏且儿童时期肠道通透性较高有关[16]。

本研究仍存在以下不足:(1)本研究纳入人群不包括42 d内婴儿,因受母体、生产方式、样本采集难度大,家长难接受相关伦理等问题的影响,同时外周血常规指标变化灵敏,42 d内婴儿样本难获得足够样本量。(2)喂养方式不同可能会间接影响红细胞相关参数,尤其42 d至6个月婴幼儿,因喂养方式不同分为母乳喂养、混合喂养及配方奶粉喂养,配方奶粉因其营养成分的添加,故配方奶粉喂养的婴儿相较混合喂养及母乳喂养的婴儿,其血清铁及铁蛋白含量水平升高[17]。因此,在今后的研究中可对此年龄段群体根据喂养方式再进一步详细划分。(3)本研究所涉及医院均使用Sysmex XN系列血细胞五分类分析仪,故未进行不同血液分析仪之间的检测结果的比对,后续可进行深入统计和研究。