牛副结核病诊断与防控

何 春，吴利芳，周国燕，张 涛，黄剑锋

（1.四川省凉山州农业科学研究院，四川 西昌 615000；2.四川省西昌市农业农村局，四川 西昌 615000）

1 病原及危害

1.1 病原 牛副结核病的致病病原是副结核分枝杆菌，是一种宽在0.3～0.5 μm之间，长在0.5～1.5 μm之间的革兰氏阳性小杆菌，属于分枝杆菌科分枝杆菌属。

副结核分枝杆菌无鞭毛、无荚膜、无芽孢、需氧。根据菌株特性及致病力可将副结核分枝杆菌分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，造成牛副结核病的为Ⅱ型菌株。

由于副结核分枝杆菌不能产生分枝杆菌素，因此无法在自然环境下进行增殖。该菌有较强的抵抗力，在外界环境中11个月，在粪便和土壤中数月，在河水中5～6周仍能保持活性，其生长的最适温度在38～40 ℃之间，最适pH 值为7.0 左右。副结核分枝杆菌对高温敏感，在63 ℃下30 min，在70 ℃下20 min，在80 ℃下5 min 失去活性。另外，3%来苏尔和3%甲醛等消毒剂处理可使其失去感染性。对副结核分枝杆菌进行培养发现，培养基上生长出无色、透明的半球形菌落，随着培养时间的增加，菌落颜色变暗，形状变为乳头样。

1.2 危害 副结核分枝杆菌主要感染牛的消化系统，导致病牛出现慢性肠炎。病菌最先感染小肠系膜以及肠淋巴结。前期感染不会导致牛出现临床症状，感染严重时，病牛肠道严重病变，最终病菌分布于全身。副结核分枝杆菌可导致病牛严重腹泻、肠道出血，产奶量下降、机体消瘦。该病在世界范围内广泛流行，人感染后可发生肠道过敏或溃疡性肠炎。

2 流行病学

2.1 传染源 牛副结核病的主要传染源是病牛和带菌牛。

2.2 易感动物 主要易感动物是牛，尤其是6月龄以内的犊牛，其次是鹿、山羊和绵羊等反刍动物及犀牛、野牛、野羊等野生动物。此外骆驼、马、猪、猴、狐狸、斑鸠、乌鸦、鸽等动物和人类也可感染。

2.3 传播途径 病菌主要通过饮水、饲料、用具等经由消化系统传播，少部分病例经血液传播。奶牛感染后可通过母乳将病菌传播给犊牛，及通过子宫垂直传播给胎儿。

2.4 流行特点 该病多呈地方性流行，发病率不高，发病缓慢，但死亡率极高，其可快速传播，难以根除。本病潜伏期通常为半年至一年甚至更长，其一年四季均可发生，春季、秋季发病率最高。妊娠期和哺乳期母牛出现应激反应后，可诱发该病。

3 临床症状

发病初期病牛食欲不振，消化不良，轻微腹泻，排稀软便，随后水样腹泻，粪中伴有少量气泡，其眼窝下陷，被毛干涩、无光泽，体重显著减轻，消瘦。绵羊、山羊感染症状与牛相似，均以持续性腹泻和渐进性消瘦为主，部分病羊可保持食欲，病程后期可并发肺炎。

4 病理变化

主要病变发生在消化系统，病牛空肠、回肠和结肠前段肠壁增厚至正常的3～30 倍左右，其中回肠病变最为明显。肠内有少量气泡和大量黏稠而混浊的液体，肠黏膜皱褶、充血。肠系膜和浆膜下的淋巴多呈暗褐色索状，显著肿大，切面外翻、多汁。

5 诊断

5.1 粪便检查法 采取病牛粪便中的黏液或血丝与3倍量的0.5%氢氧化钠液混合均匀，随后通过55 ℃水浴进行30 min 乳化，在充分过滤后，1000r/min离心5min，取上清3000r/min离心30min后，使用沉淀进行涂片，抗酸染色，镜检，若发现呈堆或丛状的红色细小杆菌，则判为阳性。

5.2 变态反应法 此方法仅适用于发病前期，通常可在病牛左侧颈部中上1/3 处皮内注射0.5 mg/mL副结核菌素，并测量皮厚。72 h后注射部位出现红、肿、热、痛等炎性反应，并且注射前后的皮厚差大于等于4 mm，则判为阳性。

5.3 血清学诊断 可采用的血清学诊断方法有补体结合试验、琼脂免疫扩散试验、ELISA、间接血凝试验、免疫斑点试验、对流免疫电泳及免疫荧光抗体实验等。补体结合试验具有良好的特异性和敏感性，可与变态反应法配合使用。琼脂免疫扩散试验操作便捷，具有良好的特异性，但其敏感性低，不适于诊断隐性感染病牛。ELISA具有良好的敏感性和特异性，可代替补体结合试验进行广泛使用。

5.4 分子生物学方法 常用的是特异性DNA探针法和PCR 法，DNA 探针法能够准确快速地检测出粪便中副结核分枝杆菌的DNA 片段。PCR 能够高效快速地检测出乳、乳制品和反刍动物中的副结核分枝杆菌，是可靠且实用的诊断方法。

6 防控措施

6.1 治疗 中药治疗，可选用苍术30g、陈皮30g、厚朴30 g、猪苓30 g、砂仁30 g、泽泻30 g，大青叶50 g、黄连50 g、黄白头翁50 g、老鹳草250 g 研磨成粉，用开水和陈醋进行冲调，候温给病牛灌服，每天1次，连续灌服20 d左右。腹泻严重的病牛可增加双花50g、连翘50g、郁金50 g、知母30 g、焦栀子30 g、大黄30 g。若病牛食欲下降，可在配方中添加山楂、龙胆草等，提高食欲。脱水严重的病牛可在配方中添加车前子等。用开水冲调时还可在药液中添加1%的盐水，防止病牛因严重脱水而死亡。

6.2 免疫接种 预防牛副结核病的疫苗有菌体成分苗、全菌苗和活苗等。疫苗并不能够全面防控，还应通过加强饲养管理等对本病进行预防。

6.3 定期检疫 可采用变态反应等检测方法对牛群进行检疫。检疫每隔三个月进行一次，连续三次检疫均为阴性的判定为健康牛，健康牛每年也应进行两次检疫。检疫结果为阳性的病牛及时扑杀，同群的牛实施紧急免疫和隔离，必要时也应扑杀。被污染的牛舍、地面和用具等用漂白粉、生石灰、苯酚及氢氧化钠等进行严格消毒，牛粪进行发酵处理。

6.4 饲养管理 禁止从疫区引入种牛，牛引入前进行严格的隔离和检疫。根据牛的体况和生长阶段进行分群饲养，保持合理的饲养密度和通风良好。根据牛的不同生长阶段调整饲料配方，及时补充维生素和微量元素，不喂发霉、变质的日粮。做好牛群净化工作，犊牛出生后立即进行隔离饲养，同时禁止给犊牛喂食带菌母乳，初乳应消毒后再喂。犊牛6月龄以内应进行副结核病检疫，阳性犊牛立即淘汰。犊牛饲养区与病牛隔离区保持适当距离，避免病原传播。