护肝提取物对山地梅花鸡生产性能、血清生化指标及抗氧化功能的影响

■刘 莹陈 鑫易 鑫郑 磊饶 勇李林祥赵小玲舒 刚*

（1.四川农业大学动物医学院，四川成都 611130；2.四川中弘天然药物有限责任公司，四川成都 611130；3.巴中市绿色农业创新发展研究院，四川巴中 636000；4.四川农业大学动物科技学院，四川成都 611130）

产蛋鸡产蛋周期可分为前期、高峰期和后期三个阶段[1]。产蛋后期是指产蛋鸡产蛋率小于80%，或产蛋鸡周龄大于48周龄的阶段。产蛋鸡进入产蛋后期会伴随一系列的生理健康问题，如脂质代谢失调、氧化性损伤、免疫性能降低和钙磷吸收代谢紊乱等[2]。其中，脂质代谢失调最明显的病理现象就是脂肪肝。脂肪肝是由于产蛋后期蛋鸡产蛋量下降，对营养物质需求量降低，以致摄入过多的营养物质会在肝脏内沉积，进而引发的营养代谢病[3]。在我国畜禽养殖业的无抗背景下，如何改善蛋鸡脂肪肝症状、保证产蛋后期蛋鸡机体的健康，对于提高其生产性能、延长其使用年限和提高其养殖生产经济效益具有重要意义。

中医以疏肝解郁、健脾消导为主，清热解毒、利胆化积为辅，减少肝脏脂肪沉积[4]。本试验采用的护肝中药提取物的主要成分为柴胡、茵陈、板蓝根和大青叶组成的中草药方剂提取物（后文简称护肝提取物）。柴胡和茵陈作为此中药复方的君臣角色，起保肝护肝作用。现代药理研究表明，柴胡具有抗癌、抗抑郁、抗炎、镇痛、保肝、保肾等药理作用[5]，茵陈具有保肝利胆、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抑菌和抗病毒等作用[6]。其中柴胡中的皂苷具有提高肝脏内抗氧化分子水平、降低血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平，改变肝再生增强因子的功能，从而减少炎症反应起到保护肝脏的作用[7]。已有研究发现，茵陈提取物对长期饲喂高脂饲粮导致的肉鸡脂肪肝出血综合征的肝脏脂肪变性具有明显的抑制作用[8]。板蓝根和大青叶辅佐柴胡和茵陈，加强对脂肪肝的治疗作用，同时提高产蛋量。板蓝根清热解毒、凉血利咽，具有抗菌、抗病毒、增强免疫、解热等作用[9]。大青叶清热解毒、凉血消斑，可用于抗病毒、抑菌、增强机体免疫力、抗肿瘤、解热、抗炎等[10]。研究报道饲粮添加0.75%板蓝根和0.75%大青叶可显著提高肉鸡采食量和体增重，降低料重比，提高半净膛率[11]。目前对中药单体、中药复方作为饲料添加剂提高产蛋后期蛋鸡产蛋率的影响研究较多，但对于中药复方提取物作为饲料添加剂对产蛋后期蛋鸡脂肪肝的影响较少。

本试验旨在探究在饲粮中添加不同剂量护肝提取物对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、脏器指数和抗氧化功能的影响，拟提高产蛋后期蛋鸡产蛋率、改善蛋鸡肝脏脂肪变性现象以及改善日粮营养水平，为推进护肝提取物在蛋鸡生产中的推广应用提供科学参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

护肝提取物：由四川中弘天然药物有限责任公司提供（主要成分为柴胡、茵陈、板蓝根和大青叶，按照10∶1提取而成）。

1.2 试验动物及试验日粮

试验时间为2021年12月—2022年1月。选取体重2.0 kg 左右的80 周龄产蛋后期山地梅花鸡180 只作为试验动物，随机分为4 组，每组3 个重复，每个重复15 羽，分别为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组饲喂基础饲粮，低剂量组、中剂量组和高剂量组分别在基础饲粮中添加0.2‰、0.4‰、0.8‰护肝提取物。基础日粮组成和营养水平见表1。试验过程中，试验鸡只自由采食和饮水，消毒、免疫程序按常规进行。

表1 基础日粮组成和营养水平(风干基础)

1.3 样品采集

试验第21 天，从每个重复随机选取4 枚鸡蛋，即每组12 枚新鲜鸡蛋，在24 h 内进行常规蛋品质指标检测。试验结束后，禁食12 h，每组随机选取5只鸡，称重，翅静脉采血，2 500 r/min 离心10 min，制备血清；采血后麻醉处死，取肝脏组织，一部分-20 ℃保存，用于生化指标测定；一部分固定于多聚甲醛中，用于病理组织学观察。

1.4 检测指标

1.4.1 生产性能指标

每日同一时间统计各组各重复蛋鸡的产蛋数、产蛋重量，试验结束后，计算各组总产蛋率、平均合格蛋重和料蛋比。

1.4.2 蛋品质样品采集24 h内，采用全自动蛋品质测定仪测定各组各重复鸡蛋的蛋重、蛋横径、蛋纵径、蛋型指数、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄颜色、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋壳重、蛋黄重等指标。

1.4.3 脏器指数

试验结束后，各组鸡称重并麻醉后处死，剖取肝脏、卵巢和输卵管，称重，计算相应脏器指数。剖取卵泡并计数。

脏器指数（g/kg）=脏器重量（g）/活体重（kg）

1.4.4 血液生化指标

取血清样品，严格按照试剂盒说明书检测丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、还原型谷胱甘肽（GSH）等血清抗氧化指标，检测高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等血清生化学指标和碱性磷酸酶（ALP）、ALT、AST等血清肝酶活性，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4.5 肝脏抗氧化指标

取-20 ℃保存的肝脏样品，严格按照试剂盒说明书检测MDA、T-SOD、T-AOC 和GSH，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所有限公司。

1.4.6 肝脏病理组织形态

将多聚甲醛固定后的肝脏组织采用石蜡包埋，切成4 μm切片，按照苏木精-伊红（H.E.）染色标准程序进行。图像由倒置显微镜和CellSens 标准处理系统（PLYMPUS）获得。

1.5 数据分析

试验数据运用SPSS 20.0 软件进行统计，采用单因子方差分析进行差异显著性检验，最小显著差数法（LSD）进行多重比较，结果均以“平均值±标准差”表示，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡总生产性能的影响

如表2 所示，与对照组相比较，低、中、高剂量组在产蛋率上分别升高39.20%、39.20%和54.16%，均具有显著差异（P＜0.05）；在料蛋比指标上低、中、高剂量组分别下降23.86%、25.08%、35.75%，均具有显著差异（P＜0.05）；在平均合格蛋重方面，3个试验组均无显著差异（P＞0.05）。

表2 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响

2.2 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡蛋品质的影响

如表3 所示，与对照组相比较，护肝提取物高剂量组的蛋黄比例呈显著差异（P＜0.05），其余试验组的各项指标无显著差异（P＞0.05）。

表3 添加护肝提取物对产蛋后期蛋鸡蛋品质的影响

2.3 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡脏器指数的影响

如表4所示，与对照组相比较，3个试验组的肝脏指数、卵巢指数和卵泡个数均无显著差异（P＞0.05）；其中，低剂量组的输卵管指数与对照组相比较增加了20.93%，具有显著差异（P＜0.05），中剂量组和高剂量组与对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

表4 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡脏器指数的影响

2.4 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡血清抗氧化指标的影响

如表5 所示，与对照组相比较，低、中、高剂量组血清中的MDA、T-AOC、T-SOD和GSH均无显著差异（P＞0.05）。

表5 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡血清抗氧化指标的影响

2.5 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡血清生化指标的影响

如表6 所示，与对照组相比较，低、中、高剂量组血清中的ALP、ALT 和AST（除低剂量组外）具有显著差异（P＜0.05），其余各项指标无显著差异（P＞0.05）。

表6 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡血清生化指标的影响

2.6 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响

如表7 所示，与对照组相比较，低、中、高剂量组肝脏组织中的MDA、T-AOC、T-SOD和GSH均无显著差异（P＞0.05）。

表7 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡肝脏抗氧化指标的影响

2.7 护肝提取物对产蛋后期蛋鸡肝脏病理组织形态的影响

如图1所示，对照组肝脏细胞严重脂肪变性，肝细胞内出现大小不一的空泡，细胞核挤于一侧，细胞核浓缩；低剂量组肝脏组织有轻微脂肪变性，部分肝细胞出现空泡；而中剂量组和高剂量组肝脏细胞未发现明显脂肪变性，肝脏组织结构正常，肝细胞排行整齐且大小基本一致，细胞核基本居于细胞中央且核膜完整。

图1 肝脏组织H.E.染色切片（200×）

3 讨论

3.1 护肝提取物对山地梅花鸡产蛋后期生产性能的影响

随着产蛋日龄的增长，蛋鸡机体步入衰老，产蛋性能逐渐下降。近年来研究发现，在饲料中添加中药单体或中药复方可以提高蛋鸡生产性能。李立顺等[12]在研究柴芪散对蛋鸡的影响中发现，添加0.3%柴芪散可以明显提高总产蛋量和11.0%产蛋率。王士杰等[13]研究发现，加味小柴胡散可显著增加鹌鹑的平均日增重和平均日采食量，有效降低鹌鹑的料重比。敖礼林[14]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加0.3%的复方中草药（含柴胡、党参、茵陈等），能提高10%产蛋率，又能提高饲料利用率和延长产蛋高峰期。本试验结果与前人研究结果一致，添加护肝提取物的低、中、高剂量组与对照组相比均显著提高了39.20%、39.20%和54.16%的产蛋率；在料蛋比指标上分别显著下降23.86%、25.08%、35.75%。与李立顺等[12]研究结果相比，低剂量组和中剂量组产蛋率增加了5.48%，护肝提取物高剂量组甚至增加了一倍多。由此表明，在饲粮中添加护肝提取物能显著提高产蛋后期梅花蛋鸡的生产性能，提高饲料转化率，增加养殖场经济效益和生产效益。

3.2 护肝提取物对山地梅花鸡产蛋后期蛋品质的影响

蛋品质是影响商品蛋鸡生产效益的重要因素，主要受蛋禽种类、遗传、营养、环境因素影响[15]。根据卢世杰等[16]的研究，饲粮中添加含板蓝根的中草药添加剂，能积极改善坝上长尾鸡鸡蛋蛋品质。谢全喜等[17]研究益生菌和中草药复方剂时发现，含柴胡的中药复方能显著提高蛋黄颜色，含板蓝根的中草药复方能显著提高蛋形指数和蛋壳厚度。本试验中护肝提取物高剂量组的蛋黄比例与对照组相比显著增加。在蛋壳强度方面，3个试验组与对照组比较虽无显著差异，但高剂量组在蛋壳强度上与对照组相比升高了7.45%，提高蛋壳强度能减少生产运输过程中因蛋壳破损带来的损失，增加经济效益。本试验在饲粮中添加护肝提取物在蛋形指数、蛋壳厚度和蛋黄颜色等上与对照组无显著差异，出现与先前研究不同的结果，可能是由于中药配方的比例不同或加工工艺不同。

3.3 护肝提取物对山地梅花鸡产蛋后期脏器指数的影响

脏器指数的改变通常可以反映动物机体生理或病理状态。王迎春等[18]研究表明，在非产蛋时期输卵管的重量可减少9%。因此输卵管指数在一定程度上与产蛋性能有关联性。本试中、验低剂量组的输卵管指数与对照组相比较增加了20.93%，具有显著差异。这一结果与本试验添加护肝提取物提高产蛋后期蛋鸡产蛋率一致，可以进一步说明在饲粮中添加0.2‰护肝提取物可以改善产蛋后期蛋鸡生产性能。

3.4 护肝提取物对山地梅花鸡产蛋后期血清、肝脏生化指标的影响

现代大规模畜禽行业存在集约化严重、活动空间不足等现象，导致蛋鸡生理机能下降，代谢紊乱等问题的加重，从而诱导蛋鸡脂肪肝的产生，以致脂肪肝成为产蛋后期蛋鸡广泛存在的疾病之一。因此通过测定肝脏或血清生化指标，探究护肝提取物是否对脂肪肝具有改善作用是常用实验室方法。ALT、AST 主要在心肌细胞和肝肌中活性较高，在血清中的活性较低，只有组织细胞处于病理状态时，血清中的ALT、AST 活性升高。江楠等[7]研究发现，柴胡中的皂苷具有提高肝脏内抗氧化分子水平，降低血清ALT、AST水平，改变肝再生增强因子的功能，从而减少炎症反应，起到保护肝脏的作用。何顺勇等[19]观察发现，柴胡疏肝散能降低非酒精性脂肪肝患者血清ALT、AST含量，说明柴胡疏肝散具有保护肝细胞和减轻肝细胞变性坏死的作用。本试验结果与前人研究结果一致，与对照组相比，3个试验组血清中的ALP、ALT和AST（除低剂量组外）均显著降低，说明护肝提取物具有治疗产蛋后期蛋鸡脂肪肝综合征的潜力，减轻肝损伤。

3.5 护肝提取物对山地梅花鸡产蛋后期肝脏病理组织形态的影响

肝脏组织病理学观察能直观反映产蛋后期梅花蛋鸡肝脏组织病理变化。有曼等[20]在研究柴胡皂苷b2对LPS/GalN 诱导的急性肝损伤小鼠肝组织病理学的影响中发现，高剂量治疗组肝小叶结构较完整，炎性细胞浸润灶明显减少，且损伤程度随药物浓度增大而逐步减轻。本试验在饲粮中添加护肝提取物对产蛋后期蛋鸡肝脏组织脂肪变性减轻，肝脏组织结构恢复正常，肝细胞排行整齐且大小基本一致，细胞核基本居于细胞中央且核膜完整，与上述血清肝酶ALT和AST活性结果一致，说明护肝提取物对产蛋后期蛋鸡肝功能有保护作用。

4 结论

在饲粮中添加不同剂量护肝提取物能显著提高山地梅花鸡产蛋后期产蛋率和输卵管指数，降低料蛋比，提高生产性能和饲料利用率；也能明显提高蛋品质，为生产带来更多收益。同时，对血清抗氧化指标有一定改善作用，同时发挥保肝功能。综上所述，在饲粮中添加不同剂量护肝提取物对产蛋后期梅花蛋鸡生产性能、蛋品质和脏器指数有一定提升作用且能改善肝脏损伤，且添加0.8‰护肝提取物效果最佳。