不同处理对欧月初代培养的影响

苏 阳 崔 锦 郝金倩 高 泽 崔泽华

（1河北小五台山国家级自然保护区管理中心，河北蔚县 075000；2河北工程大学，河北邯郸 056000；3河北廊坊职业技术学院，河北廊坊 065000；4河北政法职业学院，河北石家庄 050061）

欧月通常是指2000年之后从欧美、日本等地引进的新品种月季，但也有少数20世纪80年代例如伊芙伯爵之类从欧洲引进的品种。相对国月而言，欧月具有鲜明特点，首先，典型的欧月花型浑圆饱满，花瓣数量繁多，层层叠叠、紧密包裹；其次，欧月花色丰富，柔和典雅，多见复杂混合以及渐变的色彩；第三，欧月中多数品种花香迷醉，香气浓郁，有茶香、果香，没药香、辛香等［1-3］。因此其园林及景观应用更为广泛，很受花卉爱好者的喜爱。但是繁殖方式多为扦插和嫁接，成活率较低，且费时费力，因此，该试验通过欧月初代腋芽诱导培养，筛选出适宜的消毒试剂和消毒时间，以期为欧月的组培快繁及种质资源保存提供技术支撑［4-6］。

1 材料与方法

1.1 试验材料取自河北高泽科技有限公司从河南南阳引种栽培的粉和平、果汁阳台，河北省林业和草原科学研究院从江苏沐阳引种栽培的萨曼莎。

1.2 方法

1.2.1 外植体获取及处理 选取生长健壮、无病虫害、芽体饱满的当年生嫩枝为外植体，剪成带2个芽眼长1～2 cm的茎段，剪去叶片和刺、保留少许叶柄，用小毛刷蘸中性洗衣粉将茎段涮洗干净，然后用自来水冲2～3 h［7-8］。

1.2.2 培养基 初代培养腋芽诱导培养基：选用含蔗糖的MS培养基，添加琼脂1 g/L，氢氧化钠100 μL/L，pH为5.8。

1.2.3 接种 在超净工作台上用75%乙醇处理30 s，无菌水冲洗3～5次，随后用0.1% HgC12和6%次氯酸钠进行不同处理的消毒。试验设6种处理，如表1所示，完全随机设计，每个处理接种10瓶，设3次重复。

表1 试验设计

1.2.4 培养条件 接种后置于（25±2）℃培养室，光照强度2 000～2 500 lx，光照时间12～16 h/d，20 d后统计茎段污染率、萌芽率、成活率、死亡情况等，选择欧月外植体的最佳消毒方式。

萌芽率（%）=侧芽萌发出小苗的外植体数量/接种外植体总数×100；

污染率（%）=污染的外植体数/接种外植体总数×100；

成活率（%）=成活数/接种数×100

2 结果与分析

2.1 氯化汞消毒处理对欧月茎段诱导的影响从图1、表2可以看出，粉和平、果汁阳台、萨蔓莎在氯化汞不同处理下均能诱导茎段腋芽萌发，且腋芽长势健壮。果汁阳台的污染率最低，萨曼莎次之，粉和平的污染率最高。不同品种各处理间的污染率均随消毒时间的增加表现为持续下降的趋势。T3处理情况下，3个品种的污染率均最低，以果汁阳台的污染率最低，为6.67%，成活率最高；T1处理下粉和平的污染率达到最高值63.33%，成活率仅为36.67%。因此，诱导粉和平、果汁阳台、萨蔓莎茎段分化最适宜的氯化汞消毒时间为15 min。

表2 氯化汞消毒处理时间对欧月茎段诱导分化的影响

图1 3个欧月品种不同氯化汞处理茎段萌芽情况

2.2 次氯酸钠消毒处理对欧月茎段诱导的影响从图2、表3可以看出，粉和平、果汁阳台、萨蔓莎3个品种在次氯酸钠不同处理下茎段的萌芽率和诱导率较低，而污染率较高。次氯酸钠处理下3个品种的污染率变化趋势与氯化汞处理相似，萨曼莎的污染率随次氯酸钠处理时间的增加而下降。T6处理下的果汁阳台成活率最高，为83.33%，粉和平的成活率最低，为66.67%；T4处理下的粉和平污染率高达63.33%，T4、T5处理下的萨曼莎萌芽率最高，达90%。因此，诱导茎段分化最适宜的次氯酸钠的消毒时间为25 min。

表3 次氯酸钠消毒处理时间对欧月茎段诱导分化的影响

图2 3个欧月品种不同次氯酸钠处理茎段萌芽情况

3 讨论与小结

初代腋芽诱导培养时，灭菌试验通常先用乙醇对外植体进行表面消毒，再配合氯化汞、次氯酸钠等进行灭菌，都能达到理想的灭菌效果。乙醇浸泡一方面能够起到灭菌作用，另一方面能够使细胞收缩，以防进一步消毒时剧毒物质对外植体的伤害。此次试验在使用氯化汞、次氯酸钠灭菌前已用75%乙醇消毒30 s，达到了理想的消毒效果。

该试验对3个欧月外植体采用了6种不同的灭菌方式进行处理，试验结果显示，0.1%HgC1215 min处理方式最优，成活率达到93.33%，污染率最低为6.67%。6%次氯酸钠消毒25 min处理最佳，成活率达到83.33%，污染率最低为13.33%。试验中3个品种污染率在氯化汞处理下均随消毒时间的增加表现为下降的趋势，与朱淑新［9］、袁婉君等［10］在月季组培中消毒时间研究的结果类似，说明消毒时间过短不利于解决外植体的带菌问题，会造成消毒不彻底，从而导致初代培养下的茎段成活率较低，污染率较高，适当提升消毒时间会降低污染率，保证初代培养顺利进行，但是因时间条件有限，试验设置的时间梯度较少，未能找到消毒效果最好的时间临界值，有待继续探究。比较3个品种来看，果汁阳台在不同处理下的成活率均最高，污染率低，可能是因为比其余2个品种的抗病性强，不容易滋生细菌，不容易染病，适宜进行组织培养。