血清miR-214、miR-143在急性髓性白血病中的表达水平及与疾病复发的关系

罗婷，刘丽，饶琦，巫涵，沈恺

急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)是指髓系造血干细胞、祖细胞发生分化障碍，恶性克隆性增生导致的恶性肿瘤，具有高度异质性[1-2]。AML一旦发生，病情恶化可能引发患者出现严重感染、出血和器官浸润等一系列症状，导致患者预后效果差，易出现复发等现象[3]。因此，探究AML复发的影响因素对提高患者预后生活质量具有重要的意义。研究发现，微小RNA(miRNA)调控机体约30%的基因表达，作为促癌基因或抑癌基因参与多种疾病的发生与发展过程[4]。大量研究表明，miR-214在多种恶性肿瘤中异常表达，如在乳腺癌、胃癌和胰腺癌等肿瘤中呈高表达，在宫颈癌和食管鳞癌等肿瘤中呈低表达[5-6]。miR-143在胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤中亦有异常表达，参与并调控细胞因子及相关通路表达[7]。目前，miR-214和miR-143在AML中的作用研究较少，因此，本研究检测AML患者血清miR-214、miR-143的表达水平，并分析二者与AML治疗后复发的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年1月—2021年4月四川大学华西医院血液内科治疗的AML患者94例作为研究对象(AML组)，男48例，女46例，年龄44～73(58.37±12.41)岁。按照AML患者治疗后1年内是否复发分为AML缓解亚组60例和AML复发亚组34例，另选择同期医院体检的健康者50例作为健康对照组，男28例，女22例，年龄45～78(59.18±12.59)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准(201811-21)，受试者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 (1)诊断标准：复发诊断标准依据“复发难治性急性髓系白血病中国诊疗指南(2017年版)”中的相关标准[8]。(2)纳入标准：①符合世界卫生组织关于AML的诊断标准[9]；②AML患者之前未接受过放疗、化疗和分子靶向治疗；③患者均首次诊断为AML，且临床资料和随访资料完整。(3)排除标准：①伴有严重感染者；②伴有严重肝肾功能不全等患者；③伴有严重心力衰竭或免疫缺陷患者；④伴有恶性肿瘤等相关疾病的患者。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 血清miR-214、miR-143表达水平检测：健康对照组体检时、AML患者入院时采集空腹肘静脉血4～6 ml，离心留取血清置于-80℃保存备用。采用实时荧光定量PCR方法检测血清中miR-214、miR-143相对表达量。使用RNA提取试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)提取各组血清中总RNA，然后将RNA反转录为cDNA，根据实时荧光定量PCR试剂盒(武汉默沙克生物科技有限公司)操作说明进行操作。引物序列见表1，以U6作为内参基因，采用2-△△Ct值表示相对表达水平。

表1 miR-214、miR-143 PCR反应引物序列

1.3.2 实验室相关指标检测：采用BC-5000全自动血液细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，检测AML患者入院时白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)和血小板计数(PLT)。采用BS-830型全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，检测AML患者入院时总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)表达水平，检测试剂盒均购自美康生物科技股份有限公司。

2 结 果

2.1 2组血清miR-214、miR-143表达水平比较 AML组患者血清miR-214表达水平高于健康对照组，miR-143表达水平低于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表2。

表2 健康对照组与AML组血清miR-214、miR-143表达水平比较

2.2 2亚组血清miR-214、miR-143表达水平比较 复发亚组AML患者血清miR-214表达水平高于缓解亚组，miR-143表达水平低于缓解亚组，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表3。

表3 AML缓解亚组和复发亚组血清miR-214、miR-143表达水平比较

2.3 缓解亚组和复发亚组AML患者临床资料比较 复发亚组AML患者WBC高于缓解亚组，Hb、PLT水平低于缓解亚组，差异均有统计学意义(P<0.05)，2亚组患者性别、年龄、体质量、病程、吸烟史、饮酒史、家族遗传史、基础病、疾病分型、脾肿大、TC、TG、HDL-C和LDL-C等指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

2.4 血清miR-214、miR-143水平与AML患者复发的关系分析 Spearman等级相关分析显示，AML患者复发与血清miR-214表达呈正相关，与血清miR-143表达呈负相关(r/P=0.584/<0.001,-0.428/<0.001)。

2.5 多因素Logistic回归分析AML患者治疗复发的影响因素 以AML患者复发为因变量(复发=1，缓解=0)，以上述单因素分析中具有显著性差异的指标为自变量，WBC、Hb、PLT、miR-214和miR-143水平均为连续变量。多因素Logistic回归分析显示，WBC高、miR-214高为AML患者复发的危险因素(P<0.05)，而Hb高、PLT高、miR-143高为其保护因素(P<0.05)，见表5。

表5 多因素Logistic回归分析AML患者复发的影响因素

2.6 血清miR-214、miR-143水平预测AML复发的价值 ROC曲线分析结果显示，血清miR-214、miR-143及二者联合预测AML复发的曲线下面积为0.765、0.886、0.938，二者联合预测AML复发的效能优于血清miR-214、miR-143单独预测(Z/P=3.318/0.002, 2.342/0.019)，见表6、图1。

表6 血清miR-214、miR-143水平预测AML复发的价值比较

图1 血清miR-214和miR-143水平对AML患者复发的预测效能

3 讨 论

AML是最为常见的急性白血病之一，据统计，成年人患急性白血病类型中80%～90%为AML[10]。AML发病机制复杂、发病急、病情进展快且易复发，严重影响患者预后生活质量[11]。AML主要发病特点是患者造血干细胞功能出现障碍，临床症状主要表现为乏力、贫血、细菌感染和发热等，严重者还会出现肝、脾和淋巴结肿大[12]。目前，AML患者主要采用化疗和干细胞移植的手段进行治疗，但大约有70%的患者在治疗后会出现复发现象，随着病情恶化发展为难治性白血病，威胁患者生命健康[13]。因此，寻找AML复发的影响因素进行及时干预治疗对改善患者预后生活质量具有重要的意义。沈宏宇等[14]研究显示，AML复发患者血清WBC水平显著高于缓解患者，Hb、PLT水平显著低于缓解患者。本研究显示，与缓解亚组比较，AML复发亚组患者WBC水平更高，Hb、PLT水平更低，与上述研究结果一致。

miRNA是一类内源性非编码的小分子单链RNA，在机体内广泛且稳定存在，具有高度保守性、表达阶段特异性和组织特异性等特点[15-17]。miRNA在体内的主要作用方式是其与靶基因mRNA的3'-UTR互补配对，降解mRNA或抑制翻译过程，另一方面，miRNA可以与5'-UTR、编码序列及基因启动子的mRNA序列相互作用[18-20]。正常情况下，miRNA稳定存在于机体各个组织部位，调节蛋白质编码基因的表达，当机体出现炎性反应、肿瘤、心脑血管疾病等各类疾病时，相应的miRNA就会出现异常表达，可作为相关疾病诊断治疗的临床生物性指标[21]。近年来研究发现，miRNA的异常表达参与并影响AML的发生与发展，AML属于遗传学高度异质性疾病，体内约有200种染色体异常，miRNA的异常表达与染色体异常密切相关[22]。miR-214在多种肿瘤组织中异常表达，可能参与肿瘤疾病的发展，miR-214在不同类型疾病中存在异质性，既可作为致癌基因发挥作用，也可作为抑癌基因缓解疾病的发展[23]。miR-214在机体内可调控细胞的凋亡过程，影响细胞增殖并对细胞的耐药性产生影响[24]。王中平等[25]研究发现，食管鳞癌(ESCC)患者血浆miR-214水平较健康者明显上调，其水平变化与ESCC分期密切相关，ROC曲线分析显示其可作为ESCC诊断的分子标志物。本研究显示，与健康人群比较，AML患者血清miR-214表达明显上调，其变化趋势与ESCC疾病中miR-214表达变化一致，此外研究还发现，miR-214表达与AML患者复发呈正相关，与缓解亚组比较，复发亚组miR-214表达明显上升，提示miR-214水平变化与AML患者治疗后复发情况密切相关。

miR-143位于5q33染色体上，具有茎环结构的前体，在多种肿瘤组织中呈低表达状态，如直肠癌、乳腺癌和卵巢癌等[26]。miR-143通过参与细胞增殖、分化和凋亡等过程发挥作用，影响多种疾病的发生发展[27]。姚金晓等[28]研究显示，AML患者血浆和细胞系中miR-143表达水平显著降低(P<0.05)，miR-143过表达可显著抑制人髓性白血病细胞HL60细胞的迁移和侵袭能力。本研究显示，与健康人群比较，AML患者血清miR-143表达水平明显下调，与既往研究结果一致。此外研究还发现，miR-143表达与AML患者复发呈负相关，与缓解亚组比较，复发亚组miR-143表达明显下调，提示miR-143可能作为抑癌因子参与AML的发生与发展，其水平变化与AML患者复发情况密切相关。

综上所述，AML患者血清miR-214水平上调，miR-143水平下调，两者均与AML患者复发有关，二者联合检测可提高对AML患者复发的预测价值，有利于临床判断AML患者预后情况。但本研究未深入探讨两者影响AML复发的作用机制，后续需进一步设计试验进行研究。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

罗婷：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；刘丽、沈恺：实施研究过程，资料搜集整理，论文修改;饶琦：提出研究思路，论文审核;巫涵：分析试验数据，进行统计学处理