临床基因扩增实验室进修生带教探讨

宋丽影，李雨艳，周婷婷，路放

吉林金域医学检验所有限公司，吉林长春 130000

该公司PCR实验室于2009年成立并通过临检中心首次验收，2019年6月17日吉林金域正式被授予为吉林省内首家也是唯一一家“基因扩增检验实验室岗前培训实验操作基地”。

该检测方法可用于检测艾滋病、乙型肝炎、人禽流感等病毒感染，检测方法为通过病毒内所含基因进行扩增的方法，判断出一些病毒含量不高感染者体内是否含有特定病毒。2020年后，该公司在省内开展多家PCR实验室，而作为省内培训基地承接了来自多家单位的PCR进修人员的带教工作。PCR技术具备特异性高、灵敏度强、对样品要求低等特点，但同时整个检测操作步骤较为繁琐，自动化程度低，整个实验过程中任何一个环节的疏忽都可能对结果造成严重影响[1-2]。故此带教老师需根据进修生进修目的，定制培训计划，帮助其明晰重点，做到有的放矢。两年来，该科室一直从事临床基因扩增实验室进修生带教工作，总结出几点带教体会，现报道如下。

1 科室设备及项目介绍

该科室拥有一支专业的技术团队，具有完整的实验室质量安全管理体系及规范化的室内质控管理。科室所用主要检测设备包括ABI7500荧光定量PCR仪、MA-6000荧光定量PCR仪、Luminex200流式荧光点阵仪、DML2000杂交信号扩大仪、德同化学发光免疫分析仪及LifeECO基因扩增仪等。检测项目近20项，包括HPV类宫颈癌筛查相关项目检测系列、肝炎类检测系列、叶酸代谢能力基因检测系列、性病感染系列、septin9肠癌基因检测等。

2 根据进修目的，制订培训计划，明确重点

进修生学习时间为期1个月，由于时间较短所以必须有针对性地制订培训计划，便于进修人员充分利用时间掌握要学习的知识。在制订培训计划前，应了解学习需求，制订更合理、更实用的教学内容。由于其所在原单位的情况不同，进修的目的也有所区别，有的进修生所在医院PCR实验室刚刚成立；有的医院已开展几项常规类项目，预计打算开展更多类型病毒感染检验项目。因此在培训计划中将学习内容分为3个类别，即了解、掌握和熟练掌握。有侧重点带教更有助于进修人员在有限的时间内掌握自己要学习的知识。

3 实施培训过程

虽然大部分进修生均是具备一定工作能力和经验的检验人员，但基因扩增技术能够在短时间内完成扩增，加之PCR检验程序复杂，可涉及标本采集、编号、准备试剂、提取、上机扩增以及产物检测等诸多环节，每一个步骤的严谨程度和准确率均关乎检验结果。也正因如此，使得大部分进修者带有习惯性和经验性错误的检验方式被不断放大，出现不易察觉的风险。故此进修生在进入实验室正式学习之前，第一件事为对其进行岗前教育，重点强调实验室的分区制度、单一流向制度、日常、生物安全等。第二为强化职业责任感的培养，灌输责任意识、服务意识，使得进修生可以时刻保持精益求精的专业态度。其次进行专业知识学习，并在培训过程中要切实关注和掌握进修生学习动态，针对错误问题及时纠正，严格按照标准化操作流程进行操作。

4 增强进修生的安全防护意识

作为标准化的PCR实验室，根据实际情况将其划分为以下几大主要区域，如试剂待检区、标本制备区、检测分析区等，而介于检测标本具有一定传染性和检测重要性，各区域之间主要采用传递柜完成物品传递，以此可避免因人为工作造成的误差等。同时，该科室明确规定不可将任何标本随意带出PCR实验室，在避免污染环境的同时也要保障区域人民安全。而因当下科室所开展的所有检测项目均具有一定传染性，所以对所检测的样本，如血液、分泌物等均一律视为传染性物质，检测人员必须按照统一规定制度采取相应的防护措施，并明晰检验样本前中后的顺序。①检验前：个人防护佩戴齐整，PCR实验室人员应带无粉乳胶手套，因有粉手套会抑制PCR反应，影响检测结果[3-4]。检测不同类型样本处理区实验人员应采用三级防护,熟练防护服的穿脱顺序。②检验中：将可能出现的职业风险告知如下，因为操作失误或者人为失误等导致玻璃器皿的破损、液体飞溅等因素可致使检测人员感染检测病毒，如乙肝、丙肝病毒、艾滋病病毒、梅毒等。因为实践操作过程中，使用相关仪器将产生人类肉眼和嗅觉无法感染到的气体，可能会增加呼吸道病毒感染概率。由于实验室电器设备众多，使用不当会发生触电事故；由于接触到患者的血液、分泌物等标本和医疗废物，可能会引起病原微生物的感染；PCR实验引起的感染性物质局部扩增，可能引起扩散和感染。如果检测人员意识到上述职业风险或者发生上述情况后应立即停止当下工作，对于身体存在实质性伤口的人员应该立即从近心端向远心端挤压伤口，尽可能挤压出损伤处受到污染的血液，并使用流动水源反复冲洗[5-6]。冲洗完毕后涂抹消毒物品，必要时可包扎伤口；如果无实质性伤口通过黏膜发生职业暴露时，可及时使用冲淋装置；如通过眼睛进行传播，需立即使用洗眼器完成眼部冲洗；无论任何职业暴露风险发生时，必须保持冷静，及时处置，并于伤后24 h内完成上报，告知生物安全主管，采取后续监测流程[7-8]。③检验后：样本严格按照SOP上面要求的温度及时限进行保存。实验结束后，对各区的工作台面用10%次氯酸钠液消毒液进行消毒清洁，然后用75%乙醇清洁，再用紫外线杀菌车照射1 h；地面用10%次氯酸钠液消毒液进行消毒清洁，打开固定紫外灯消毒2 h。以《医疗废物管理条例》为前提，所有医疗废物必须遵守该规定条例规范处理，并必须区分生活垃圾和医疗垃圾，对于医疗垃圾可将其放置于黄色标志垃圾袋、对于生活垃圾可将其放置于黑色标志垃圾袋，并由专人完成不同垃圾的收集、处理等流程。

5 培养质量控制理念，确保结果准确性

检验工作质量为先，其检测出的最终结果直接关乎临床诊断和后续采取的治疗方式，关系到患者个人生命安全、家庭生活等，由此说明检测质量的重要性。而对于提升检验质量，只有不断强化各个不同检验流程的质量控制，提高操作规范和人员意识，才能从根本上帮助临床提供更加精准的检测数据，为临床医师后续采取的诊疗计划打下良好依托[9-10]。“每一例标本都是一颗期待的心”，我们的质量方针是：公正、准确、快速、创新，打造无缝链接的服务链，追求零缺陷的质量目标。质量是生存的根本，质量体系文件应本着系统性、协调性、唯一性和适用性的原则。临床检验是应用成熟的技术及方法对患者的临床标本进行检测，要求每一次检测以及对每一份标本的检测都必须准确、及时，这就要求实验室必须有严格的质量保证程序[11-12]。在带教过程中，要培养进修生质量控制的理念，掌握定性及定量项目质控框架的建立，熟知质控规则。以乙肝病毒（HBV）为例，每批检测至少有待检血清、HBV-PCR反应液20管（20μl/管）、HBVDNA裂解液、阳性模板、溴化乙锭、PCR扩增仪、电泳仪、紫外线分析仪，质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程，让进修生理解室内质量控制是控制实验的重复性和精密度，检验实验的准确度，提高本室常规工作中的批间、批内标本检测的一致性[13-14]。真正做到“写你所做、做你所写、记录你做和分析你做”，明确人员的职责、权限和行为规范，为实验室实现质量目标提供最有效、最切实可行的办法。

6 提升操作技能，夯实理论知识

除了掌握理论知识，还应加强进修生的操作技能，更好地将理论与实践相结合，学习过程中熟读试剂说明书及项目SOP。能够熟练掌握所学项目的方法学性能验证和实验操作，样本的结果分析处理。精密度、正确度、线性、抗干扰能力等均为定量检测方法和程序分析性能验证内容，而测定下限、准确度以及特异性等均为定性检测项目中应该验证的内容[15-16]。荧光定量PCR仪和移液器均为临床基因扩增实验室至关重要的设备，带教老师需要就此仪器进行详细和全面的普及介绍，其中需包括PCR仪器使用方法、仪器保养、注意事项等[17]。同时移液器的正确使用十分关键，很容易在使用中出现各种细节问题，影响检测结果，如移液器吸样过快，导致气溶胶产生，增加职业暴露风险，吸样量不足，加样器不稳污染其他标本等，使得检测结果存在较大出入等。使用后未将移液器归回最大量程等，这些都将直接导致实验结果的偏差。因此要求进修生的所有操作必须在带教老师的指导、监督下完成，当场纠正学生错误或不当的操作并说明原因，以确保结果的准确性。

7 制订考核制度

进修生需要在培训完成后根据检验操作标准通过考核，具体包括检测项目操作、设备维护、操作熟练度、检测结果准确性测评以及实验室规章制度、临床检测意义等相关理论知识，所有进修生需通过考核标准。

8 结语

我国人口密度较高，在国家的重点关注下，很多基层医院均纷纷建立了分子生物实验室。分子生物学技术发展迅速，已应用到临床各个方面，作为医学检验分子生物实验室检验人员，必须具有规范的操作技能、扎实的理论知识，才能更好地服务于临床。针对不同目的进修学员要因材施教，计划合理、贴近实际的学习方案，使进修生通过培训，熟练掌握和运用临床基因扩增实验室的基础知识、流程规范、管理体系、质量控制和性能验证等，为今后从事日常临床分子检验工作积累经验。进修生在按照培训计划完成规定的培训任务后，应分阶段进行考核，根据人员的接受程度随时进行调整，了解进修生在培训过程中所存在的问题并及时解决，真正把培训工作落到实处。在带教过程中，我们还需与时俱进，努力提高自身知识水平，总结经验方法，加强交流，做到教学相长，以此培养出更多技能全面、理论扎实、医德高尚的优质检验人才。