百香果采后果腐病菌的生物学特性及其杀菌剂毒力测定

杜婵娟，杨 迪 ， 叶云峰 ，潘连富 ，张 晋，付 岗

(1 广西农业科学院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室，南宁， 530007；2 广西农业科学院园艺研究所，南宁，530007)

百香果Passifloraedulis，学名西番莲，原产于南美洲热带地区，因富含多种营养物质，具有独特的浓郁香气，同时兼具食用价值和药用价值，深受消费者喜爱[1-2]。

我国从20世纪90年代开始引种百香果，主产区分布包括广西、广东、海南、云南和福建等地[3]。截至2018年，我国百香果种植面积4.73万hm2，鲜果产量达63.5万t，成为近年来我国大力发展的新兴产业之一[4]。

随着百香果产业的快速发展，我国百香果种植面积不断扩大，其病虫害问题也日益突出[6-13]。其中，可可毛色二孢Lasiodiplodiatheobromae引起的果腐病是近年发生在百香果果实上新病害[14]，可造成果实腐烂，严重影响鲜果经济价值。然而，目前国内鲜见防治百香果采后果腐病的相关研究报道，病害防治困难较大。

为进一步了解百香果果腐病菌的生物学特性，我们研究其相关生物学特性，测定14种杀菌剂对病原菌的室内毒力，为百香果采后果腐病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodiatheobromae，由广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所分离与保存。培养基包括马铃薯葡萄糖培养基(PDA)和察氏培养基[15]。

杀菌剂：植物仿生类，80%乙蒜素乳油，河南科邦化工有限公司产。硫代氨基甲酸酯类，80%代森锰锌可湿性粉剂，陶氏益农农业(中国)科技有限公司产。咪唑类，450 g/L咪鲜胺水乳剂，青岛中达农业科技有限公司产。三唑类，250 g/L丙环唑乳油，山东潍坊双星农药有限公司产；430 g/L戊唑醇悬浮剂，江苏七洲绿色化工股份有限公司产；10%苯醚甲环唑水分散粒剂，先正达南通作物保护有限公司产。苯并咪唑类，50%多菌灵可湿性粉剂，上海悦联化工有限公司产。烷基多胺类，400 g/L嘧霉胺悬浮剂，拜耳(中国)有限公司产。甲氧基丙烯酸酯类，25%嘧菌酯悬浮剂，陕西皇牌作物科技有限公司产；22.5%啶氧菌酯悬浮剂，安阳市锐普农化有限公司产；30%吡唑醚菌酯悬浮剂，河南勇冠乔迪农业科技有限公司产；50%肟菌酯水分散粒剂，河北兴柏农业科技有限公司产。酰胺类，41.7%氟吡菌胺悬浮剂，拜耳(中国)有限公司产；50%啶酰菌胺水分散粒剂，巴斯夫欧洲公司产。

1.2 pH值、温度和光照的影响试验

将纯化后的病原菌移至PDA平板，28 ℃培养2 d，用灭菌的直径5 mm打孔器沿菌落边缘取菌饼，分别接种至pH值3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5和11.0的PDA平板，28 ℃培养36 h；另将菌饼接种至PDA平板后，分别放置在10、13、16、19、22、25、28、31、34、37和40 ℃培养36 h；另将菌饼接种至PDA平板后，分别放置24 h/d光照、12 h/d光暗交替和24 h/d黑暗下，28 ℃培养36 h，每处理重复3次，采用十字交叉法测量各处理菌落直径。

1.3 不同碳源、氮源的影响试验

以察氏培养基为基础培养基，分别用葡萄糖、甘露醇、D-半乳糖、乳糖、山梨醇、果糖、可溶性淀粉、木糖、木糖醇和甘油等含碳化合物，等量置换基础培养基中的蔗糖，制成不同碳源培养基；用硝酸钾、甘氨酸、硫酸铵、L-脯氨酸、亚硝酸钠、L-精氨酸、氯化铵、DL-丙氨酸、L-天冬氨酸和尿素等含氮化合物，等量置换基础培养基中的硝酸钠，制成不同氮源培养基，将病原菌菌饼接种至不同碳源或氮源培养基中，重复3次，28 ℃培养36 h，采用十字交叉法测量各处理菌落直径。

1.4 杀菌剂室内毒力测定

采用平板生长速率法，将供试14种杀菌剂用无菌水配制成母液，分别加入PDA中配制成不同浓度含药平板。即丙环唑和苯醚甲环唑浓度为3.125、6.25、12.5、25、50 mg/L；戊唑醇、多菌灵和吡唑醚菌酯浓度为6.25、12.5、25、50、100 mg/L；乙蒜素、嘧霉胺和咪鲜胺浓度为12.5、25、50、100、200 mg/L；啶氧菌酯和氟吡菌胺浓度为25、50、100、200、400 mg/L；嘧菌酯、肟菌酯和啶酰菌胺浓度为62.5、125、250、500、1 000 mg/L；代森锰锌浓度为125、250、500、1 000、2 000 mg/L。每平板中央移入菌饼1块，每浓度重复3次，以不含药剂的PDA为对照， 28 ℃培养36 h，采用十字交叉法测量菌落直径，计算相对抑菌率。以药剂浓度对数值为自变量(x)，相对抑菌率的概率值为因变量(y)，进行线性回归分析，建立毒力回归方程，计算相关系数r和抑菌有效中浓度EC50和EC95。相对抑菌率(%)=(对照菌落直径-药剂处理菌落直径)/(对照菌落直径-5)×100。

1.5 数据统计与分析

数据用Excel 2019汇总、计算平均值和作图，并采用SPSS 18.0软件的Duncan’s新复极差法进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 pH值和培养温度对菌丝生长的影响

从图1可知，病原菌在pH值3.5～10.5范围内均可以生长，培养36 h，病原菌菌落直径13.62 mm以上。当pH值为4.5～5.5时，菌落生长最快且不同处理间差异不显著(p<0.05)，菌落直径最大可达64.48 mm。当pH值11.0时，病原菌停止生长。病原菌在10～40 ℃范围内均可生长；培养36 h，以31～34 ℃时菌落生长最快，且差异不显著(p<0.05)，菌落直径最大可达68.15 mm。当温度小于16 ℃或大于40 ℃时，病原菌生长缓慢，菌落直径在7.63 mm以下。

注：不同小写字母表示处理间存在显著性差异(p<0.05)。

2.2 碳源、氮源和光照条件对菌丝生长的影响

从表1可知，供试碳源条件下，病原菌均可较好生长。培养36 h，病原菌在以蔗糖、甘油、D-半乳糖、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、D-木糖、乳糖、山梨醇和可溶性淀粉为碳源的培养基上生长差异不显著，菌落直径为43.20～59.64 mm。病原菌可利用11种供试氮源生长。在以硫酸铵和氯化铵为氮源的培养基上，病原菌生长最迅速，培养36 h，菌落直径均在74 mm以上。以尿素为氮源的培养基上，病原菌生长最慢，其菌落直径仅3.34 mm，显著低于其他氮源处理(p<0.05)。

表1 不同碳源、氮源和培养光照条件对百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae菌丝生长的影响

不同光照条件下，病原菌在PDA上的生长无显著性差异，菌落直径均在45 mm以上，说明光照对病原菌菌丝生长的影响不大。

2.3 杀菌剂对病原菌的室内毒力

从表2可知，供试14种杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用存在差异。其中，嘧霉胺的毒力最强，EC50为0.004 6 mg/L；其次为戊唑醇、多菌灵、苯醚甲环唑和丙环唑，其EC50均小于1 mg/L，分别为0.007 2、0.025 5、0.384 9和0.706 7 mg/L。毒力中等的为咪鲜胺、吡唑醚菌酯、乙蒜素和啶氧菌酯，EC506～76 mg/L。对病原菌的毒力效果较差的杀菌剂为代森锰锌、肟菌酯、啶酰菌胺和嘧菌酯，EC50均大于100 mg/L。氟吡菌胺的毒力效果最差，其EC50高达1 152.317 6 mg/L。此外，丙环唑的EC95最小，为33.129 5 mg/L；其次是咪鲜胺和戊唑醇，EC95分别为46.596 5和90.545 9 mg/L，三者的EC95均小于100 mg/L；乙蒜素、苯醚甲环唑和代森锰锌的EC95均小于1 000 mg/L，而其余药剂的EC95均大于1 000 mg/L。

表2 14种杀菌剂对百香果果腐病菌可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae的室内毒力

3 结论与讨论

可可毛色二孢作为一种寄主广泛的植物病原真菌[16]，可引起多种植物果实病害，其生物学特性研究已有大量报道[17-22]。然而，来源于不同寄主的可可毛色二孢的生物学特性存在一定差异[22-24]。笔者2019年在广西北流、百色等地调查中发现可可毛色二孢会引起百香果采后果腐病[14]。由于该病害是近年来在百香果上发生的新病害，目前关于其病原菌的生物学特性及药剂筛选鲜见报道。研究结果表明，该病原菌在pH值3.5～10.5范围内均可生长，以pH值4.5～5.5生长最好；10～40 ℃范围内均可生长，以31～34 ℃生长最好，表明其适应性强，是一种嗜高温的微生物。该结果与刘小玉等[24]、董章勇等[25]、戴利铭等[26]的报道基本一致。广西百香果的采收期正值高温多雨的夏季，湿热的气候为果腐病发生及病害传播提供了有利条件。病原菌生长对碳源要求并不严格，均可利用供试的11种碳源；对氮源利用差异较大，最佳氮源为硫酸铵和氯化铵，利用尿素的能力最差。有研究表明，百香果果皮富含大量的营养物质[27]，这为病原菌的生长繁殖提供了条件。由于病原菌利用尿素的能力较差，因此，百香果施肥管理时，喷施含有尿素的叶面肥来补充氮肥，可利于控制该病害的发生和扩展。

8类14种杀菌剂的室内毒力测定结果表明，三唑类的丙环唑和戊唑醇、咪唑类的咪鲜胺对病原菌表现出较强的抑制作用，这与戴利铭等[26]、唐利华等[28]、刘树森等[29]的研究相似。而苯并咪唑类、烷基多胺类、甲氧基丙烯酸酯类和酰胺类的供试杀菌剂对病原菌的EC95值均大于1 000 mg/L，表明这些药剂对病原菌的抑制效果较差，因此在生产上不推荐使用这类药剂防治百香果果腐病。由于不同类型的杀菌剂对病害的防治机理不同[30-32]，为避免重复施用单一杀菌剂而使病原菌产生抗药性，可考虑交替使用不同类型的杀菌剂防治病害。此外，本研究调查发现，百香果果腐病菌主要通过果皮上的伤口侵染为害[14]。因此，为预防该病害发生，可在采收前全园喷施戊唑醇、苯醚甲环唑等药剂；采后则考虑使用咪鲜胺等药剂。

本研究仅测定了不同杀菌剂对病原菌的室内毒力，由于田间环境较为复杂，且杀菌剂对病害的防治与病原菌孢子的抗逆性、杀菌剂的稳定性、寄主植物的生长环境等诸多因素有关。因此，室内筛选药剂在田间施用时，实际防效可能会存在差异。下一步我们将开展田间药效试验，进一步验证杀菌剂的防效，为百香果果腐病的防治提供参考。