兴安蒲公英乙酸乙酯萃取物化学成分研究

李雨泽，时志春,2，孙立秋,2，李军,2，王金兰,2，赵明,2，张树军,2

兴安蒲公英乙酸乙酯萃取物化学成分研究

李雨泽1，时志春1,2＊，孙立秋1,2，李军1,2，王金兰1,2，赵明1,2，张树军1,2

（1.齐齐哈尔大学 化学与化学工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2.黑龙江省工业大麻加工技术创新中心，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

采用薄层色谱、硅胶柱层析和半制备反相高效液相色谱等分离方法对兴安蒲公英甲醇提取液乙酸乙酯萃取物进行分离纯化，得到6个单体化合物，依据波谱数据分析及理化性质鉴定了化合物1～6的结构分别为：对羟基苯乙酸甲酯(1)、对羟基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、对香豆酸(4)、黑麦草内酯(5)、苯甲酸(6)，化合物3和5为第一次从兴安蒲公英中分离得到。

菊科；兴安蒲公英；酚酸

蒲公英（）为菊科蒲公英属多年生草本植物，别名婆婆丁、华花郎、黄花地丁等，性味甘、微苦、寒，全草可入药，有清热解毒与利尿散结等功效，用于治疗急性结膜炎、急性乳腺炎、急性扁桃体炎、淋巴腺炎、疗毒疮肿、肿囊炎、感冒发热、急性支气管炎、肝炎及尿路感染等各种疾病[1]。蒲公英属植物含有多种化学成分——黄酮类、酚酸类及倍半萜类等[2-4]，有明显抗炎、抗氧化和抗肿瘤等生物活性[5]。兴安蒲公英（Kitag.）属于蒲公英属植物中的一种，在大兴安岭地区有广泛分布，资源丰富[6]。为了进一步完善蒲公英化学成分研究。本文对Kitag.进行化学成分研究，依据波谱数据等分析方法确定了化合物1～6的化学结构分别为：对羟基苯乙酸甲酯(1)、对羟基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、对香豆酸(4)、黑麦草内酯(5)、苯甲酸(6)。辛二酸二甲酯(3)和黑麦草内酯(5)为首次从兴安蒲公英中分离得到。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

兴安蒲公英于2018年6月2日采自内蒙古根河市，经齐齐哈尔大学沙伟教授鉴定为兴安蒲公英，标本（No. Ts-20180602）收藏于齐齐哈尔大学天然产物研究室。正己烷（n-Hexane）为市售正己烷，在68.8℃收集的馏分，记为H；乙酸乙酯（EtOAc）为市售乙酸乙酯，在77.1℃收集的馏分，记为E；甲醇（MeOH）为市售甲醇，在64.7℃收集的馏分，记为M，冰乙酸（AcOH, 记为HAc），乙腈（CH3CN，记为ACN），均为分析纯（≥99.5%），为辽宁泉瑞试剂有限公司生产。

AV-600核磁共振波谱仪，Bruker公司；HITACHI L-7100高效液相色谱仪，日本日立公司；PREP-ODS 10×250 mm色谱柱，日本日立公司；RE-52 AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；X-6熔点测定仪，北京泰克仪器有限公司；HANGPING JA2003电子天平，上海精科实业有限公司；AUTOPOL V旋光仪，美国鲁道夫公司。200～300目柱层析用硅胶，青岛海洋化工厂；20 cm×20 cm薄层层析板，烟台化工厂。

1.2 提取分离

取1.6kg干燥的兴安蒲公英地上部分，在室温条件下用8L甲醇浸泡3d后过滤，重复3次，将得到的甲醇提取液用旋转蒸发仪蒸发浓缩至小体积，加水将甲醇提取液混悬，依次用正己烷、乙酸乙酯萃取3次，合并相同溶剂萃取液分别用旋蒸浓缩至恒重，得到正己烷萃取物57.7g，乙酸乙酯萃取物18.2g。

取乙酸乙酯萃取物17.5g，用硅胶柱色谱法分离，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 5∶5（6.5 L），2∶8（6.0 L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 8∶2（6.0 L），5∶5（5.0 L），0∶1（5.0 L）洗脱，经TLC检测合并相同流分，减压浓缩得到10个组分（F1～F10）。F3（1.6 g）用硅胶柱层析分离，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（1.7 L），5∶5（0.9 L），0∶1（1.0L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 5∶5（0.9 L）洗脱。经TLC检测合并相同流分，减压浓缩得到9个组分（F3-1～F3-9）。其中F3-4（210.1 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(水)=4∶6，流速为5mL/min）纯化，得到化合物1（1.5 mg,R= 7.5 min）。F3-5（83.9 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(水)= 4∶6，流速为5mL/min）纯化，得到化合物2（3.8 mg，R= 6.5 min）。F3-6（83.9 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(水)∶(冰乙酸) = 6∶4∶0.3%，流速为4 mL/min）纯化，得到化合物3（2.5 mg,R=10.5 min）。F4（1.5 g）用硅胶柱层析分离，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 5∶5（2.0 L）, 2∶8（0.5 L）, 0∶1（0.5 L）,(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 0∶1（0.5 L）洗脱。经TLC检测合并相同流分，减压浓缩得到6个组分（F4-1～F4-6）。其中F4-2（150.2 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(水)= 9∶1，流速为4mL/min）分离，得到6个组分（F4-2-1～F4-2-6），F4-2-1（83.8 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(乙腈)∶(水)∶(冰乙酸) = 25∶10∶65∶0.5%，流速为4 mL/min）分离纯化，得化合物4（2.4mg,R= 12.0min）。F4-6（413.5mg）用硅胶柱层析分离，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（0.5 L）, 5∶5（0.5 L）,(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 5∶5（0.5 L）, 0∶1（0.2 L）洗脱。经TLC检测合并相同流分，浓缩得到4个组分（F4-6-1～F4-6-4）。F4-6-2（57.5 mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(水)= 65∶35，流速为4mL/min）纯化，得到化合物5（4.5mg,R=4 .8min）和其它3个组分（F4-6-2-1～F4-6-2-3）。F4-6-2-1（19.6mg）用RP-HPLC（流动相为(甲醇)∶(乙腈)∶(水)∶(冰乙酸) = 12∶8∶80∶0.5%，流速为4 mL/min）分离纯化，得到化合物6（9.5 mg,R=15.0min）。

2 结构鉴定

化合物1：浅黄色油状物（甲醇），mp: 110～119.8℃；1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：7.12 (2H, d,= 8.4Hz,H2,6), 6.78 (2H, d,= 8.4Hz, H3,5), 3.54 (2H, s, H7), 3.69 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150MHz, CDCl3)：125.8 (C1), 130.4 (C2,6), 115.4 (C3,5), 155.1 (C4), 40.3 (C7), 177.6 (C8), 52.0 (C1')。数据与参考文献[7]基本一致，鉴定为对羟基苯乙酸甲酯。

化合物2：白色粉末（甲醇），mp: 212～215℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：7.79 (2H, d,= 8.4 Hz, H2, 6), 6.81 (2H, d,= 8.4 Hz, H3,5);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6)：167.1 (-COOH), 161.8 (C4), 131.9 (C2,6), 130.6 (C1), 115.4 (C3,5)。数据与参考文献[8]基本一致，鉴定为对羟基苯甲酸。

化合物3：无色油状物，1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：3.67 (6H, s, -OCH3), 2.30 (4H, t,= 7.2 Hz, H2,7), 1.62 (4H, m, H3,6), 1.32 (4H, m, H4,5);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 174.3 (C1,8), 51.5 (C1',8'), 34.0 (C2,7), 28.9 (C3,6), 24.8 (C4,5)。数据与参考文献[9]基本一致，鉴定为辛二酸二甲酯。

化合物4：白色粉末（甲醇），mp: 210～213℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：7.51 (2H, d,= 8.4Hz, H2,6),7.49 (2H, d,= 18.0 Hz, H7),6.79 (2H, d,= 8.4 Hz H3,5), 6.29 (1H, d,= 18.0 Hz, H8);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6)：168.5 (-COOH), 160.0 (C4), 144.5 (C7), 132.7 (C2,6), 125.8 (C1), 116.2 (C3,5), 115.3 (C8)。数据与参考文献[10]基本一致，鉴定为对香豆酸。

化合物5：无色晶体（甲醇），mp: 147～148℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.69 (1H, s, H7), 4.34 (1H, m, H3), 2.47 (1H, dt,= 13.8 Hz, 3.0 Hz, H4), 1.98 (1H, dt,= 13.8Hz, 3.0Hz, H2), 1.79 (1H, dd,= 9.0Hz, 4.2 Hz, H4), 1.78 (3H, s, H11), 1.53 (1H, dd,= 15.0Hz, 3.6Hz, H2), 1.47 (3H, s, H10), 1.28 (3H, s, H9);13C-NMR (150MHz, CDCl3)：182.4 (C8), 171.9 (C6), 112.9 (C7), 86.6 (C5), 66.9 (C3), 47.3 (C2), 45.6 (C4), 35.9 (C1), 30.7 (C10), 27.0 (C11), 26.5 (C9)。数据与参考文献[11]基本一致，鉴定为黑麦草内酯。

化合物6：白色粉末（丙酮），mp: 122～123℃;1H-NMR (600 MHz,CDCl3)：8.14 (2H, d,= 7.6 Hz, H2,6), 7.62 (1H, t,= 7.6 Hz, H4), 7.48 (2H, t,= 7.6 Hz, H3,5);13C-NMR (CDCl3, 150MHz)：171.9 (C7), 133.7 (C4), 130.1 (C1), 129.2 (C2,6), 128.5 (C3,5)。数据与参考文献[12]对照基本一致，鉴定为苯甲酸。

3 结论

本文对兴安蒲公英甲醇提取液乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究，依据波谱数据等分析方法确定了化合物1～6的结构分别为：对羟基苯乙酸甲酯(1)、对羟基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、对香豆酸(4)、黑麦草内酯(5)、苯甲酸(6)。其中辛二酸二甲酯(3)和黑麦草内酯(5)为第一次从蒲公英中分离得到，该研究结果进一步丰富了蒲公英中化学成分的结构类型。本文分离得到的化合物大多属于酚酸类成分。由于酚酸具有良好的抗氧化活性和抑菌活性等，可做食品的抗氧化剂和防腐剂[13]。兴安蒲公英作为药食两用植物，具有资源丰富，价格低廉等优势，本文的研究结果也可为进一步开发利用兴安蒲公英资源提供理论依据。

[1] 江苏新医学院. 中药大辞典(下册)[M].上海：上海科学技术出版社，1996: 2459-2461.

[2] 杨文志，杜跃中，高宇，等. 蒲公英总黄酮的研究进展[J]. 人参研究，2017, 29(1): 52-55.

[3] 施树云，周长新，徐艳，等. 蒙古蒲公英的化学成分研究[J]. 中国中药杂志，2008, 33(10): 1147-1157.

[4] 姜醒，赵敏，高晓波，等. 蒲公英中桉叶烷型倍半萜类化学成分研究[J]. 中南药学，2016, 14(12): 1293-1297.

[5] 王亚茹，李雅萌，杨娜，等.蒲公英属植物的化学成分和药理作用研究进展[J].特产研究，2017, 39(4): 67-75.

[6] 葛学军. 中国植物志[M]. 北京：科学出版社，1999: 32.

[7] 张颖，李嘉，何飞，等. 滇白珠止泻活性部位的化学成分研究[J]. 中南药学，2020, 18(11): 1800-1802.

[8] 于彩碟，刘晓兰，刘井权，等. 玉米浆乙酸乙酯萃取物化学成分研究[J]. 齐齐哈尔大学学报（自然科学版），2021, 37(2): 82-83, 87.

[9] 中国科学院上海有化学研究所. 化学专业数据库[DB/OL]. http://www.organchem.csdb.cnShanghai institute of Orgnic Chemistry of CAS. Chemistry Database[DB/OL]. http://www.organchem.csdb.cn.

[10] 粟杰，冯艳，林炳锋，等. 刺五加化学成分的分离与鉴定[J]. 中草药，2021, 52(16): 4783-4788.

[11] 孔江波，朱莹，张文静，等. 枸杞子醋酸乙酯部位非生物碱类化学成分研究[J]. 中草药，2021, 52(7): 1877-1883.

[12] 王子延，吴丹，牛璐，等. 美洲大蠊粪便提取物抗氧化活性及其化学成分研究[J]. 天津中医药，2021, 38(8): 1056-1061.

[13] 段红波，梁引库. 蒲公英多酚的提取及其活性研究[J]. 中国食品添加剂，2017, 28(3): 80-86.

Chemical constituents of ethyl acetate extract ofKitag.

LI Yu-ze1，SHI Zhi-chun1,2＊，SUN Li-qiu1,2，LI Jun1,2，WANG Jin-lan1,2，ZHAO Ming1,2，ZHANG Shu-jun1,2

(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Heilongjiang Qiqihar 161006, China;2.Heilongjiang Industrial Hemp Processing Technology Innovation Center, HeilongjiangQiqihar 161006, China)

Six compounds were isolated and purified from ethyl acetate fraction in the methanol extract ofKitag. by thin layer chromatography, silica gel column chromatography and semi preparative reversed-phase high performance liquid chromatography. The structures of compounds 1～6were identified by analysis on their spectral data and physicochemical properties as methyl 4-hydroxyphenylacetate(1),-hydroxybenzoic acid(2), dimethyl suberate(3),-coumaric acid(4), loliolode(5) and benzoic acid(6), Compounds 3 and 5 were isolated from this plant for the first time.

Compositae；Kitag.；phenolic acid

2021-11-24

黑龙江省属高等学校基本科研业务费项目（135309301，135109207）

李雨泽（1996-），男，黑龙江大庆人，在读硕士，主要从事天然产物化学研究，1269678067@qq.com。

时志春（1986-），男，讲师，博士，主要从事天然产物化学研究，shizhichun1008@163.com。

R284.1

A

1007-984X(2022)03-0057-03