从2名幼儿的血液中培养出空肠弯曲菌空肠亚种的分离与鉴定

聂娟娟，马 爽，林 铿，王槐堂

1.广东省广州市花都区妇幼保健院检验科，广东广州 510800；2.湖北健康职业学院医学技术系，湖北咸宁 437000

血液细菌培养是诊断血流感染的重要依据，其中的病原菌有许多种，但文献报道的空肠弯曲菌空肠亚种少见。本院分别在2020年3月2日、4月9日从2例住院幼儿血液中培养出空肠弯曲菌空肠亚种菌株，现报道如下。

1 临床资料

病例1，女，23 d，因“腹胀2 d”于2020年3月2日16时5分入住新生儿科。体格检查：体温36.8 ℃，脉搏136次/分，呼吸频率50次/分，血压72/36 mm Hg。神志清醒、反应可，无脱水征，全身皮肤欠红润，中度黄染，前囟平软，张力不高。呼吸不促，双肺呼吸音粗，未闻及啰音。心率136次/分，律齐，各瓣膜未闻及杂音。腹胀明显，见腹壁静脉显露，未扪及包块，肝肋下3 cm，脾触诊不满意，肠鸣音正常。四肢肌张力正常。辅助检查：入院后查胸片示心肺未见明显异常，腹部平片示肠功能紊乱。血常规：白细胞计数(WBC) 9.38×109/L，中性粒细胞比例(NEUTR) 15.9%，淋巴细胞比例(LYMPHR) 64.1%，单核细胞比例13.5%，嗜酸性粒细胞比例5.8%，嗜碱性粒细胞比例0.2%，未成熟粒细胞比例0.5%。血清总胆红素228.7 μmol/L，直接胆红素29.4 μmol/L，间接胆红素199.3 μmol/L，免疫球蛋白G(IgG) 6.07 g/L，偏低(正常7.0～15.0 g/L)，大便常规正常，大便潜血阴性，轮状病毒阴性。患儿腹胀明显，警惕败血症，同时间送检血培养，培养出空肠弯曲菌空肠亚种。临床使用哌拉西林/舒巴坦抗感染治疗，患儿3月5日、10日2次血培养均阴性，病情好转，于2020年3月17日办理出院手续。

病例2，男，1岁4个月，因“发热39 ℃半天，抽搐1次”于2020年4月9日8时52分入住儿科。体格检查：神志清醒，反应尚可，呼吸平顺，全身皮肤黏膜无黄染，浅表淋巴结未扪及肿大，前囟平软，口唇红，咽充血，双扁桃体无肿大，双肺呼吸音粗，未闻及啰音，心律齐，心音有力，无杂音，腹平软，肝脾触诊不大，肠鸣音正常，双下肢肢端暖，四肢肌力、肌张力正常，神经系统检查未见阳性体征。血常规：WBC 8.95×109/L，NEUTR 78.9%，LYMPHR 14.5%，C反应蛋白(CRP) 5.79 mg/L。血气分析：二氧化碳(CO2)分压36.6 mm Hg，氧分压125.9 mm Hg。甲型流感病毒抗原阴性，乙型流感病毒抗原阴性。降钙素原(PCT)3.28 ng/mL(<0.5 ng/mL为阴性)，乳酸1.79 mmol/L，葡萄糖9.12 mmol/L，肝功、肾功、心功、免疫五项结果未见异常。脑脊液生化及常规未见异常。4月10日查血常规：WBC 7.35×109/L、NEUTR 60.40%、LYMPHR 31.00%，CRP 42.72 mg/L，PCT 13.38 ng/mL，呼吸道核酸十五项示卡他莫拉菌、人类疱疹病毒阳性。4月14日复查，CRP<0.50 mg/L，WBC 5.15×109/L、NEUTR 23.50%，PCT 0.57 ng/mL。临床根据发热、炎症指标升高，提示细菌感染，采用头孢曲松治疗、补液、退热及对症处理。4月9日的血培养结果回报，培养出空肠弯曲菌空肠亚种。患儿退烧，症状好转，家长要求办理出院手续。因患儿家长拒绝再次抽血送检，仅有1次血培养结果。

2 细菌培养、鉴定及药物敏感试验

2.1细菌培养 血培养采用Auto BC120血培养仪(郑州安图生物工程股份有限公司)。取阳性瓶内悬液直接涂片革兰染色(珠海贝索公司)，镜下可见革兰阴性、形态弯曲、螺旋样菌体；转种血琼脂平板(广州市迪景微生物科技有限公司)和巧克力琼脂平板(郑州安图生物工程股份有限公司)，放置在37 ℃及5% CO2(CO2产气袋，杭州滨和微生物试剂有限公司)环境中，培养24 h无肉眼可见菌落，取原始划线处生长物涂片革兰染色，镜下见形态弯曲、螺旋样革兰阴性菌。继续5% CO2环境中孵育至48 h，血琼脂平板和巧克力琼脂平板上出现针尖大小、圆形、湿润菌落，涂片革兰染色，见形态弯曲、螺旋样阴性菌。平板生长物在42 ℃的5% CO2环境中培养生长良好，在25 ℃的5% CO2环境中培养48 h不生长。

2.2菌种鉴定 2株菌在血平板、巧克力平板(无添加抗菌药物)生长，菌落圆形、凸起、不溶血，48 h菌落细小，延长孵育时间菌落增大。触酶试验和氧化酶试验均阳性，马尿酸盐试验阳性，经Api CAMPY条(法国生物梅里埃公司)鉴定为空肠弯曲菌空肠亚种，Vitek 2 Compact全自动生化鉴定仪(法国生物梅里埃公司)使用NH卡鉴定为空肠弯曲菌空肠亚种，用Vitek MS全自动微生物质谱检测系统(法国生物梅里埃公司)鉴定为空肠弯曲菌空肠亚种[1]。2株菌在25 ℃不生长，在42 ℃生长良好。

2.3药物敏感试验 根据文献[2]，采用纸片扩散法对红霉素、环丙沙星和四环素进行药物敏感试验。用生理盐水直接菌落悬液法制备0.5麦氏标准菌悬液，使用含5%绵羊血的MH培养基(采用杭州滨和微生物试剂有限公司生产的MH干粉，加入绵羊血自制)，在5% CO2、42 ℃环境下孵育24 h。病例1菌株，其红霉素抑菌环直径19 mm为敏感(敏感≥16 mm)；病例2菌株，其红霉素抑菌环直径40 mm为敏感，2株菌四环素和环丙沙星均无抑菌环，为耐药(四环素抑菌环≤22 mm为耐药；环丙沙星抑菌环≤20 mm为耐药)。而多西环素的药物敏感试验需使用最小抑菌浓度法检测，此2株菌未作检测。

3 讨 论

空肠弯曲菌是一种革兰阴性的微嗜热细菌，也是一种常见的食源性致病菌。弯曲菌在发展中国家常常从有/无腹泻的患者中分离到，大部分有症状的弯曲菌感染发生在婴儿和儿童早期，发病率随年龄增长而降低。婴幼儿时期发病率最高，感染者可能无症状，新生儿仅50%出现发热，腋温>37.8 ℃，且发热可能与脱水等有关。幼儿反复接触细菌会导致炎症，在短期内，导致吸收不良、口服疫苗失败、认知延迟和5岁以下儿童病死率增加[3]。弯曲菌感染以胃肠道最常见，其引起腹泻的具体过程未完全明确，多发生于<5岁儿童或青少年中，尤其是婴幼儿[4]。

空肠弯曲菌是引起细菌性腹泻的主要因素，它作为一种人畜共患病的病原菌在动物身上流行，分布于大多数温血动物，因此主要的传播途径是食源性感染，通过肉类产品特别是家禽，也可通过污染食物、牛奶和水经口传播，被感染的人和动物粪便中的活菌可污染环境，常因食品、牛奶或水的污染而引起爆发，人际传播罕见，死亡也很罕见，可能会发生在年龄小或者免疫功能低下的患儿[5-6]。空肠弯曲菌肠炎可引起发热、腹部绞痛和腹泻，还可引起肠外感染，如菌血症、尿路感染等，免疫功能低下者可能发生持续性腹泻和菌血症[7],但在免疫功能正常的患者中通常具有自限性。一般从感染到出现症状的潜伏期长达72 h，感染通常在1周内消退[3]。同时空肠弯曲菌的感染是致命的，尤其是在幼儿中，而空肠弯曲菌罕见血流感染为迁延性，伴反复发热，感染来源不明确，主要侵犯免疫缺陷患者。此次本院检出的2例患儿，1例患儿发热抽搐，另1例患儿肠功能紊乱并有低IgG血症，可能因为2例患儿年龄小，机体抵抗力差，免疫功能低下，从而导致空肠弯曲菌趁机而入引起菌血症。菌血症发生率占肠道感染患者的1.5‰，老年人发病率最高，由空肠弯曲菌感染导致的死亡不常见[8]。

短期内从2例幼儿血液中培养出空肠弯曲菌空肠亚种，比较少见，需要重视此菌引起的血流感染。由于细菌培养鉴定需要时间，临床采用了经验用药，需要注意如患儿家长拒绝抽血做细菌培养复查，应重视与患儿家属的沟通。病例1入院后经验性给予红霉素抗感染治疗后，病情未加重，情况好转，血培养阳性后予以“哌拉西林/舒巴坦”抗感染对症治疗，症状也无反复，状况良好；病例2入院后在儿科重症监护病房给予头孢曲松抗感染、补液、退热等对症处理，病情未加重，之后转入儿科一区继续头孢曲松抗感染及对症治疗后患儿热退，病情好转。从这2例患儿症状好转看出，空肠弯曲菌血流感染及时诊治效果较好。临床上空肠弯曲菌引起的感染性疾病，往往由于病原菌检测困难、诊断不明确而延误治疗。同时，也提示了临床微生物室应具备鉴定的条件，充分考虑到部分自动化鉴定系统不能鉴定此菌，药物敏感试验也需要手工完成，才能为临床提供明确的鉴定结果。

药物敏感试验对于流行病学监测、感染经久不愈、严重感染治疗有指导作用，空肠弯曲菌大多数菌株对多种抗菌药物敏感，尤其是庆大霉素、红霉素和氯霉素[9-10]，其对红霉素的耐药率较低。