结直肠癌组织多配体蛋白聚糖-4(SDC4)蛋白表达与临床病理参数及短期预后的关联

张 玲,兰家秀,王智敏,王 伟,方金满,3

(1.中国科学院合肥肿瘤医院,合肥 安徽230032;2.中国科学院合肥物质科学研究院 健康与医学技术研究所,合肥 安徽230032;3.中国科学技术大学，合肥 安徽230026)

结直肠癌(CRC)是最常见和最具侵袭性的恶性肿瘤之一，是全球癌症相关死亡的第四大原因[1-2]。CRC是一种异质性疾病，尽管在肿瘤的遗传和分子特征方面取得了进展，但 CRC患者的预后不良和长期生存率非常低[3-4]。SDC4是一种细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，SDC4与生长因子、细胞外基质(ECM)分子和细胞骨架信号蛋白存在相互作用[5-6]。SDC4在多种肿瘤的分化和预后中发挥着关键作用[7]。SDC4通常作为抗肿瘤分子，其在结直肠癌中表达显著降低，因此，SDC4作为结直肠癌肿瘤发生发展的候选标志物，也是治疗和诊断的重要靶点[8]。因此本研究分析SDC4与结直肠癌患者的临床病理参数及短期预后的关系，探讨SDC4在结直肠癌发生发展及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2016年1月至2020年1月收治的结直肠癌患者70例，年龄18～69岁，平均(57.32±7.64)岁。纳入标准：①符合《中国结直肠癌诊疗规范(2015年版)》[9]中关于结直肠癌的诊断标准，患者经病理检查确诊为结直肠癌；② 接受规范性的结直肠癌根治手术，且术前未进行任何抗肿瘤治疗；③预计生存时间>6个月；④临床病理信息和随访资料完整。排除标准：①合并认知障碍者或精神病患者；②合并其他恶性肿瘤患者；③合并已接受肿瘤治疗、胃肠道手术史患者。

1.2 免疫组化分析检测组织SDC4表达结直肠癌组织微阵列(TMA)使用福尔马林固定石蜡包埋组织切片，从固定石蜡包埋的组织块中取出。在5 μm处切取阵列切片并置于载玻片上。本研究采用传统的免疫组织化学染色方法。用10 %山羊血清封闭30 min后，用兔抗人SDC4抗体(赛默飞世尔科技有限公司)在4℃孵育过夜，然后用过氧化物酶标记的二抗(赛默飞世尔科技有限公司)孵育。由两位病理医师通过盲法阅片确定染色的染色强度和阳性比例。染色百分比分为0(0-1%)、1(2-25%)、2(26-50%)、3(51-75%)、4(>75%)，染色强度分为0分(阴性)、1分(弱阳性)、2分(中等阳性)、3分(强阳性)。采用视觉免疫反应评分(IRS)，范围从0到12，由染色强度评分乘以阳性细胞程度评分生成。因此，SDC4表达被分为2类：高水平(IRS 5-12)和低水平(IRS 0-4)。

1.3 临床资料收集及随访通过查阅患者病历档案，收集患者临床资料，包括性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、Dykes 分期等。采用电话或门诊复诊等随访方式，截止时间为2022年1月。

2 结果

2.1 结直肠癌患者组织SDC4的表达与临床病理特征关系

在结直肠癌组织中SDC4与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移、Dykes 分期等病理特征无关(P>0.05)，在分化程度低、浸润程度深(浆膜外)的结肠癌患者中SDC4 的表达显著降低(P<0.05)，见表1。

表1 结直肠癌患者组织SDC4 的表达与临床病理参数的关系

2.2 SDC4在结直肠癌组织中的表达与短期预后的关系

经过2年随访后，70例结直肠癌患者生存率为72.86%(51/70)。SDC4低或无表达组的生存率为 67.27%(37/55)，SDC4高表达组的生存率为93.33%(14/15)，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.048，P=0.044)，见图1。

图1 SDC4表达与结直肠癌患者生存的关系

2.3 影响结直肠癌患者预后的单因素和多因素分析

单因素分析发现SDC4表达、分化程度、Dukes分期与结直肠癌的不良预后有关，将上述单因素引入多因素Cox回归模型分析发现SDC4表达、分化程度、Dukes分期是结直肠癌患者独立预后的指标，见表2。

表2 SDC4与预后的单因素和多因素分析

3 讨论

CRC是最常见的恶性肿瘤之一和全球癌症相关死亡的主要原因，近年来CRC的发病率不断上升，这可能与生活方式和营养习惯的改变有关[10]。早期 CRC 大多无症状，多数患者在晚期才被诊断出来[11]。肿瘤淋巴结转移阶段仍然是临床决策过程中最有效的预后因素[12]。目前医生用来预测结直肠癌患者预后和治疗反应的生物标志物，如癌胚抗原(CEA)和糖抗原19-9(CA19-9)等，敏感性和特异性都相对较低[13]。因此在这种情况下，需要更有效的生物标志物。

syndecan 家族由主要存在于细胞表面的4种跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG) 组成[14]。这些不同的多聚体的结构在脊椎动物和无脊椎动物中表现出高度的同源性[15]。所有4种多聚糖均由不同数量的糖胺聚糖(GAG)侧链的核心蛋白构成[16]。Syndecans 主要通过这些 GAG 链发挥其功能，但核心蛋白的不同结构域也具有不同的作用[17]。Syndecan-1 和 syndecan-3 携带硫酸乙酰肝素(HS)和硫酸软骨素(CS)链，而 syndecan-2 和 syndecan-4 仅携带 HS 链[18]。Syndecans 参与广泛的生物过程，包括生长和分化、细胞扩散、细胞黏附、细胞迁移、细胞骨架组织、浸润和血管生成[19-20]。缺氧是调节人类结肠癌细胞中SDC4表达的因素之一[21]。在正常上皮细胞和组织中，SDC4的显著高表达，但在高转移性结肠癌细胞(KM1214) 中，SDC4的表达水平显著降低[22]。

本研究中发现在分化程度低、浸润程度深(浆膜外)的结肠癌患者中SDC4 的表达显著降低(P<0.05)，说明SDC4与结直肠癌侵袭转移有关。经过2年随访后，70例结直肠癌患者生存率为72.86%(51/70)。SDC4低或无表达组的生存率为 67.27%(37/55)，SDC4高表达组的生存率为93.33%(14/15)，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.048，P=0.044)。单因素分析发现SDC4表达、分化程度、Dukes分期与结直肠癌的不良预后有关，将上述单因素引入多因素Cox回归模型分析发现SDC4表达、分化程度、Dukes分期是结直肠癌患者独立预后的指标，表明SDC4在结直肠癌中起着肿瘤抑制作用，SDC4表达的丧失与预后不良显著相关。

综上所述，结直肠癌组织中SDC4的表达与临床病理特征及预后密切相关，有成为预测结直肠癌患者预后生物标志物的潜力，亦有望成为肿瘤生物治疗的新靶点。尽管如此，本研究仍然存在一些局限性，本研究的样本量相对较小，且研究结果来自单一中心。因此需要在更大样本、多中心的研究中证实，SDC4在CRC中的作用机制也需要进一步探讨。